利用環(huán)介導等溫擴增和Padlock探針技術檢測瓜蔓枯病菌.pdf

1、植物病原茵的檢測與鑒定技術的研究是我國各口岸檢驗工作的重點，對阻止外來有害生物的入侵從而保護我國農(nóng)林業(yè)經(jīng)濟安全生產(chǎn)活動與生態(tài)安全有著重要的意義。目前為止傳統(tǒng)的檢測技術及現(xiàn)有的分子檢測技術如傳統(tǒng)PCR技術已無法滿足上述要求，因此尋找其他更加穩(wěn)定和特異的的檢測靶標，并建立新的檢測技術體系，變得越來越重要。
　　本研究通過分別利用環(huán)介導等溫擴增(LAMP)技術和Padlock探針（同時結合了斑點雜交）技術這兩種分子檢測手段檢測了瓜蔓枯病

2、的病原真菌(Didymellabryoniae)并建立了其高效的檢測體系。本研究的LAMP引物和Padlock探針的靶標位點選擇的是看家基因之一的RNA聚合酶Ⅱ(RPB2)基因，并對這些引物和探針的特異性和靈敏度進行了實驗驗證。實驗結果表明，實驗中所使用的特異性引物和探針均可達到特異性檢測特定病原茵的目的，并且其檢測的靈敏度達到反應體系中DNA最低濃度閥值:200fg，較普通的PCR檢測手段高出100倍，完全滿足了檢驗工作的需求。同時，

3、通過本實驗室從全國各地收集的西瓜和甜瓜藤蔓樣品的實際檢測應用，其實驗結果表明這兩種檢測手段都能很好的從33份樣品中檢測出17份。
　　本研究使用的環(huán)介導等溫擴增技術檢測周期短只需1h，靈敏度高，并且在反應過程中不涉及模板的變性與退火，所以不需要熱循環(huán)儀，只需恒溫水浴鍋即可完成實驗，加之反應結果肉眼可見。同時，Padlock探針技術也具有耗時短，靈敏度高以及易操作的特點，再結合斑點雜交技術將實驗結果通過顯色反映變得可視化，且保證了結