水稻廣譜抗性相關基因OsMOS3的克隆及功能研究.pdf

1、水稻是我國主要的糧食作物，在其生產(chǎn)過程中由于受到稻瘟病、紋枯病以及白葉枯病的危害，水稻的質(zhì)量與產(chǎn)量受到嚴重的影響。本研究主要利用水稻基因組信息并結合生物信息學，對水稻廣譜抗病性基因OsMOS3進行克隆并實現(xiàn)克隆基因的過量表達、RNAi以及融合表達，通過轉基因水稻對白葉枯病病原菌抗性的研究以及水楊酸含量的分析，表明OsMOS3具有廣譜抗病性。具體結果如下：
　　 1.OsMOS3及干涉片段mir的克隆
　　 結合生物信息學

2、，在水稻基因組中獲得與擬南芥中已經(jīng)克隆的AtMOS3的同源序列，將其命名為OsMOS3。以水稻日本晴的cDNA為模板，設計特異性引物分別擴出OsMOS3A段，1475bp，OsMOS3B段，1543bp，最后通過重疊PCR(overlap)擴出OsMOS3的cDNA全長(A+B段)，3018bp。另外，根據(jù)結構域分析，在OsMOS3中選取一段保守且含有功能結構域的核苷酸序列作為干涉片段mir，經(jīng)特異性PCR擴增獲得mir，250bp。分

3、別構建出雙元表達載體CPB-OsMOS3，CPB-2F，P1302-OsMOS3-GFP。
　　 2.35S-OsMOS3-GFP的亞細胞定位
　　 通過基因槍將35S-OsMOS3-GFP融合表達質(zhì)粒瞬時轉化到洋蔥表皮細胞，利用熒光顯微鏡進行亞細胞定位檢測，結果顯示OsMOS3定位在細胞核內(nèi)。
　　 3.T0代轉基因水稻的陽性檢測
　　 分別對獲得的3株OsMOS3過表達轉基因植株，1株OsMOS3-R

4、NAi轉基因植株，進行篩選標記基因潮霉素(HPT)的PCR檢測，結果表明獲得的4株水稻全為陽性轉基因水稻；OsMOS3半定量凝膠結果顯示：與原始對照植株相比，OsMOS3過表達水稻中OsMOS3上調(diào)表達，OsMOS3-RANi轉基因水稻中OsMOS3表達沉默。
　　 4.T0代轉基因水稻的抗病性鑒定
　　 分別檢測了OsMOS3過表達、OsMOS3-RNAi、及原始對照日本晴植株體內(nèi)游離態(tài)水楊酸(freeSA)的含量，結