廣州管圓線蟲不同發(fā)育時期差異蛋白表達的研究.pdf

1、溫州醫(yī)學院碩士學位論文廣州管圓線蟲不同發(fā)育時期差異蛋白表達的研究姓名：宋增梅申請學位級別：碩士專業(yè)：臨床檢驗診斷學指導教師：潘長旺；黃慧聰20120522溫州醫(yī)學院碩士學位論文和雄成蟲，蟲體用001mol／LPBS緩沖液洗滌3次后，80。C凍存。2蛋白樣品的制備：將收集的蟲體分別使用裂解液裂解、超聲裂解、離心，獲得的上清，使用BioRadproteinassayreagent測定蛋白質(zhì)濃度。分裝后80。C低溫保存。3CyDye染料標記蛋

2、白質(zhì)：分別用Cy3或Cy5標記樣品，Cy2標記內(nèi)標。4雙向熒光差異凝膠電泳(2DDIGE)41第一向等電聚焦(IEF)42膠條的平衡43第二向SDSPAGE電泳：125％的SDSPAGE凝膠5雙向熒光凝膠電泳的圖像掃描：利用U]VIaxPowerlook2110XL和TyphoonFLA9000對電泳后的膠板圖像掃描，得到不同顏色的掃描圖。6DeCyder70圖像分析7質(zhì)譜鑒定：膠內(nèi)酶解，抽提酶解肽段，ZipTip脫鹽，MALDITOF

3、MS鑒定、數(shù)據(jù)庫檢索結(jié)果1對廣州管圓線蟲5個樣品及內(nèi)標進行雙向熒光差異凝膠電泳后，得到了清晰的蛋白質(zhì)表達譜。用UMaxPowerlook2110XL和TyphoonFLA9000激光掃描儀于熒光模式下進行Cy2、Cy3、Cy5激光掃描，8塊張膠共得到24張熒光掃描圖譜。2經(jīng)過DeCyder70軟件分析，校準后，蛋白表達差異值經(jīng)統(tǒng)計學分析(f檢驗)，篩選出在24張圖譜中均出現(xiàn)的點共183個蛋白點。與成蟲相比，314、537、698、925

4、和980這5個蛋白點在V期幼蟲中表達上調(diào)，但沒有表現(xiàn)出顯著的性別差異；與IⅡ期幼蟲相比，點469、488、609、855、859、885、1253、1520和1416等89個蛋白點在成蟲和V期幼蟲中上調(diào)，相反的，點623、730、1053、1161和1060等13個蛋白點在IⅡ期幼蟲中出現(xiàn)明顯上調(diào)；雌雄蟲及V期幼蟲雌雄比較中，點1496在雄蟲和V期幼蟲雄蟲中均表達上調(diào)。3質(zhì)譜分析差異蛋白點，獲得肽質(zhì)量指紋圖譜(PMF)，經(jīng)數(shù)據(jù)庫檢索，鑒

5、定了其中37個蛋白質(zhì)。1081％是細胞骨架相關(guān)蛋白，如肌動蛋白和副肌球蛋白；6486％功能蛋白與代謝過程、免疫反應和轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)，如熱休克蛋白和變換域相關(guān)蛋白；2432％是未知的蛋白質(zhì)。這些差異表達蛋白在細胞黏附、細胞凋亡、炎癥反應、蛋白質(zhì)水解、抗氧化和免疫調(diào)節(jié)等許多生理和病理過程。4與V期雌蟲相比，過氧化物氧還蛋白(1253)、吲哚胺2，3雙加氧酶(1520)和TRRAP1ikefamilymember(1521)在雌成蟲中上調(diào)：肌鈣