稻瘟病菌中MoRab51假定互作蛋白MoYIP3、MoVPS9的功能分析.pdf

1、Rab蛋白是一類單體形式的GTPase，由200多個氨基酸組成，具有共同的結構特征，包括保守的G結構域與高度可變的N端和C端并且有類似于Ras蛋白的重疊結構，Rab蛋白作為細胞內囊泡運輸的分子開關，在囊泡運輸過程的不同階段發(fā)揮作用。Rab5是Rab家族蛋白中的一員，它主要定位在早期內涵體上，調控早期內涵體的出芽、融合、囊泡的形成以及受體介導的胞吞過程參與胞內蛋白質等物質的定向運輸。
　　本論文是在前期已經明確MoRab51功能的基

2、礎上，重點尋找其下游調控侵染致病過程的效應因子并進行功能研究。因此，我們通過生物信息學分析，在稻瘟病菌中獲得MoRab51的兩個假定互作蛋白MoYIP3和MoVPS9，通過酵母雙雜交點對點的方法鑒定它們之間的互作關系；通過同源重組的方法敲除基因并進行后續(xù)基因功能分析，從而初步明確兩個蛋白在稻瘟病菌中的功能。
　　酵母雙雜交實驗表明，MoYIP3不與MoRab51互作，而MoVPS9則與DN狀態(tài)下的MoRab51互作，初步驗證MoV

3、PS9是MoRab51的GEF（guanine nucleotide exchange factors）。
　　通過生物信息學的方法，對兩種蛋白進行了亞細胞定位，并比較其與真菌中同源蛋白的進化關系，結果顯示，其對應的結構域高度同源。通過同源重組的方法，獲得了MoYIP3和MoVPS9基因的敲除突變體，對基因功能做了相應的表型分析。結果表明，與野生型ku80相比，△MoYIP3突變體的氣生菌絲減少、菌落邊緣厚度變薄，產孢量下降，但致

4、病性沒有降低，說明基因MoYIP3的缺失不會對稻瘟病菌的生長發(fā)育及致病機制產生關鍵性的影響，但該基因在稻瘟菌菌絲形成及產孢途徑中發(fā)揮其作用?！鱉oVPS9突變體菌落生長速率明顯減慢、氣生菌絲減少、菌落邊緣厚度變薄、孢子梗數目減少、產孢量顯著下降。同時，突變體對外界脅迫的敏感性增強，致病性顯著降低，說明基因MoVPS9的缺失對稻瘟菌的生長發(fā)育及致病性產生重要的影響。
　　Real-timePCR分析結果表明，MoRab51在MoYI