構(gòu)建HFA動(dòng)物模型研究糞便菌群在CMPA發(fā)生中的作用.pdf

1、目的：將牛奶蛋白過(guò)敏嬰兒和正常嬰兒的糞便菌群分別移植給無(wú)菌小鼠后，構(gòu)建菌群人源化小鼠模型，觀察移植小鼠對(duì)牛奶蛋白的反應(yīng)，探究糞便菌群在牛奶蛋白過(guò)敏發(fā)生中的作用。
　　方法：收集重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院消化專(zhuān)科臨床診斷為牛奶蛋白過(guò)敏（cow’ milk protein allergy, CMPA）且以胃腸道表現(xiàn)為主的嬰兒糞便（I-CMPA組），同時(shí)收集該院兒?？企w檢的、無(wú)胃腸道癥狀且無(wú)過(guò)敏性疾病的正常嬰兒糞便（I-NC組），分別移植

2、給無(wú)菌小鼠后為過(guò)敏移植小鼠組（M-CMPA組）和正常移植小鼠組（M-NC組），兩組移植小鼠均用嬰兒配方奶粉喂養(yǎng)。14天后，用Illumina測(cè)序技術(shù)檢測(cè)糞便菌群的定植規(guī)律和變化情況、觀察移植小鼠的臨床表現(xiàn)、HE染色觀察空腸組織的病理改變、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)脾臟細(xì)胞中CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例變化。
　　結(jié)果：（1）Illumina測(cè)序結(jié)果分析顯示，供體糞菌間的優(yōu)勢(shì)菌不同，且I-CMPA組菌屬豐富度和多樣性均較I-N

3、C組低。糞菌移植14天后，I-CMPA組中的重要組分能在無(wú)菌小鼠腸道內(nèi)較好維持；兩組移植小鼠的菌群結(jié)構(gòu)差異明顯，菌屬水平主成分分析（PCA）圖和層級(jí)聚類(lèi)分析圖中兩組均能獨(dú)立分開(kāi)。組間差異物種分析結(jié)果顯示：I-CMPA組與M-CMPA組中雙歧桿菌屬的比例均高于其對(duì)照組；（2）用嬰兒配方奶粉喂養(yǎng)后，M-CMPA組出現(xiàn)肛門(mén)紅腫、糞便變稀等表現(xiàn)，而M-NC組沒(méi)有出現(xiàn)類(lèi)似的表現(xiàn)；（3）HE染色可見(jiàn)M-CMPA組較M-NC組出現(xiàn)明顯的空腸絨毛上皮細(xì)

4、胞局灶性脫落，絨毛連續(xù)性破壞和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；（4）流式細(xì)胞分析結(jié)果顯示，M-CMPA組脾臟CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例較M-NC組降低。
　　結(jié)論：（1）HFA小鼠能較好地模擬CMPA嬰兒的腸道微生物區(qū)系，該HFA模型為糞便菌群與CMPA的關(guān)系及機(jī)制研究提供了新的選擇；（2）糞便菌群的差異使移植小鼠對(duì)牛奶蛋白的反應(yīng)不同，糞便菌群的變化可能是CMPA發(fā)生的始動(dòng)因素，食物過(guò)敏的敏感性可通過(guò)糞菌移植的方式在不同種屬的宿