應用農(nóng)桿菌介導的生長點轉化方法建立河套蜜瓜高效規(guī)模化轉化技術.pdf

1、用基因工程技術把外源基因導入植物細胞是現(xiàn)代遺傳育種的重要途徑。經(jīng)過二十多年的研究已建立了多種基因轉化系統(tǒng)，獲得了很多有價值的轉基因植物。目前的轉基因技術可分為物理法、化學法及生物學法。這些方法各有其優(yōu)點，但也都有不足之處，這就推動新的轉基因技術的出現(xiàn)。利用植物分生組織直接進行基因轉化，由于不經(jīng)過愈傷組織誘導培養(yǎng)過程，體細胞無性系變異小，能較好地保持受體植物的遺傳穩(wěn)定性，轉化的外源基因也能實現(xiàn)穩(wěn)定地遺傳。
　　 本文首先以河套蜜瓜

2、腋芽生長點做外植體，利用SPSS軟件對農(nóng)桿菌轉化時的菌液濃度、轉化時間、共培養(yǎng)時間設計16組正交實驗。做法如下：切取河套蜜瓜腋芽莖段，用滅菌的細針刺傷腋芽萌發(fā)處，用帶有外源基因的農(nóng)桿菌進行轉化處理。然后將腋芽萌發(fā)的莖段切下來，轉到生根培養(yǎng)基上后獲得轉基因再生植株。對16組實驗進行數(shù)據(jù)分析，得到農(nóng)桿菌轉化河套蜜瓜生長點的最優(yōu)體系為：使用OD600=0.7的菌液轉化10min之后，黑暗中共培養(yǎng)2d。在后期篩選轉基因植株時選定：葉片上噴灑20