重組豬α干擾素抗豬繁殖與呼吸綜合征病毒的應用研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、利用本實驗室成功構(gòu)建的豬α干擾素原核達載體PETIFN-α，在大腸桿菌BL21中表達了豬α干擾素，表達產(chǎn)物為一融合蛋白。SDS-PAGE電泳后在約40.2kDa處出現(xiàn)一條帶，同預期結(jié)果一致。經(jīng)過優(yōu)化IPTG的濃度和誘導時間，豬α干擾素的表達量明顯提高，表達量約占細菌總蛋白量的20％。應用鎳瓊脂糖凝膠樹脂層析柱吸附純化豬α干擾素融合蛋白，不同濃度咪唑緩沖液洗脫吸附蛋白，SDS-PAGE電泳鑒定表明，400mM咪唑的緩沖液洗脫的豬α干擾素蛋

2、白，純度最高，達到蛋白純化的預期目的，可以用于抗病毒活性試驗。 用細胞病變抑制法在Marc-145細胞上測定重組豬α干擾素活性，測定重組豬α干擾素抗PRRSV的病毒活性為5.0×103U/mg。將干擾素做不同濃度梯度稀釋后，在單層Marc-145細胞上做豬α干擾素抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒試驗，測得干擾素對Marc-145細胞的無毒濃度為0.20mg/ml，最小抑制濃度為0.14mg/ml。結(jié)果表明，重組豬α干擾素在體外對PRR

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