地被月季、菊花再生和抗旱遺傳轉(zhuǎn)化體系建立及其耐旱性快速評價方法研究.pdf

1、該研究為建立園林地被植物抗旱種質(zhì)資源篩選和創(chuàng)新方法體系,以地被月季'Royal Bassino'和地被菊花'White Snow'為試材,研究了再生和抗旱遺傳轉(zhuǎn)化體系建立,并探索了其耐旱性快速鑒定和評價方法.'White Snow'在MS添加0.2mg/l NAA、1.0mg/l KT和2.5mg/l GA<,3>或0.1mg/l NAA、2.0mg/l KT、5.0mg/l GA<,3>的培養(yǎng)基中每40天一次交替繼代,對幼芽增殖效果最

2、好;以無菌苗葉片為外植體,在附加2.0mg/l 6-BA和0.2mg/l NAA的MS培養(yǎng)基中獲得了93.8﹪的不定芽再生率.而對于'Royal Bassino'帶有腋芽的莖段,MS中添加1.5mg/l 6-BA和0.1mg/l IBA為最適誘導培養(yǎng)基,誘導出芽率100﹪;MS中添加0.4mg/l 6-BA和0.05mg/l IBA可以獲得最高增殖倍數(shù)6.3;而添加0.01mg/l IBA的1/2MS為最佳生根培養(yǎng)基,生根率92﹪;以葉

3、柄為外植體和MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,在添加7μM TDZ的誘導培養(yǎng)基中暗培養(yǎng)10天后,轉(zhuǎn)接到添加0.5mg/l 6-BA的再生培養(yǎng)基中光周期培養(yǎng)約20天,可以獲得57.1﹪的芽再生率,為最適再生培養(yǎng)條件.將含擬南芥逆境誘導轉(zhuǎn)基因DREB1A基因的植物雙元表達載體pBI-DREB1A導入根癌農(nóng)桿菌LBA4404,農(nóng)桿菌介導法遺傳轉(zhuǎn)化地被菊花'White Snow'葉盤,經(jīng)PCR和PCR-Southern檢測,DREB1A基因已整合到轉(zhuǎn)化植株的基

4、因組中.遺傳轉(zhuǎn)化過程中,預培養(yǎng)2d后,將OD<,600>為0.5~0.7的農(nóng)桿菌菌液稀釋30倍后侵染葉盤10min,再共培養(yǎng)2d,有利于獲得最高遺傳轉(zhuǎn)化效率.用'White Snow'10葉齡扦插生根幼苗為試材,分別采用自然失水脅迫和PEG脅迫處理,環(huán)境條件為溫度23±2℃、空氣相對濕度30±3﹪、光照約10μmol.m<-2>s<'-1>.在劃分不同處理萎蔫指數(shù)的基礎(chǔ)上,測定了鮮樣質(zhì)量保持率、葉片水勢、葉片溶質(zhì)滲透熱、MDA含量、SO

5、D和CAT活性等指標.結(jié)果表明:萎蔫指數(shù)劃分的主要形態(tài)特征因脅迫方法而異.自然失水脅迫中,脅迫8h為幼苗恢復極限;在恢復極限內(nèi)復水,幼苗鮮樣質(zhì)量保持率、葉片水勢、MDA含量、SOD以及CAT活性都得到了規(guī)律性的結(jié)果.PEG脅迫處理中,與脅迫濃度呈正相關(guān)的指標有鮮樣質(zhì)量保持率、葉片溶質(zhì)滲透勢、MDA含量以及SOD活性,而葉片水勢和CAT活性卻沒有發(fā)現(xiàn)規(guī)律性結(jié)果.20﹪PEG脅迫處理4h內(nèi)復水,能夠正?；謴?其復水期間的鮮樣質(zhì)量保持率、葉片