豬傳染性胃腸炎病毒S蛋白在畢赤酵母中的分泌表達及免疫原性分析.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩89頁未讀 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、豬傳染性胃腸炎(Transmissible gastroenteritis,TGE)是一種急性、高度接觸性傳染病,以嘔吐、嚴重腹瀉、脫水為特征,各種年齡的豬只都可以發(fā)病,5周齡以下仔豬的病死率最高,給養(yǎng)豬業(yè)造成了較大的損失。TGE的病原體為豬傳染性胃腸炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus ofswine,TGEV),該病毒是冠狀病毒科冠狀病毒屬成員。在眾多對TGEV研究的基礎上,本研究就TGEV

2、在豬睪丸細胞(ST)上的增殖特點的認識、花青素體外抗TGEV的試驗研究、TGEV纖突糖蛋白在畢赤酵母中的分泌表達及免疫原性分析三個部分對TGEV展開研究。
   第一部分:豬傳染性胃腸炎病毒的增殖特點的認識。
   本試驗復蘇和傳代培養(yǎng)了TGEV宿主細胞-ST,測定TGEV的半數細胞培養(yǎng)物感染劑量(TCID50),以便于病毒感染毒性的定量,顯微鏡下觀察TGEV吸附ST細胞后引起的細胞病變現(xiàn)象,免疫過氧化物酶單層試驗(IP

3、MA)進一步認識TGEV的增殖規(guī)律。細胞病變觀察結果顯示,TGEV侵染ST細胞后可引起具有“種”的特異性的細胞病變,引起細胞核變形或碎裂,甚至導致細胞的完全破壞,IPMA證明TGEV蛋白質的合成在胞漿內。
   第二部分:花青素體外抗豬傳染性胃腸炎病毒的試驗研究。
   在已測定TGEV的TCID50的基礎上,利用細胞形態(tài)學觀察方法,具體研究了花青素對ST細胞的毒性及花青素對TGEV的直接滅活、治療作用。結果表明:花青素

4、在ST細胞上最大安全濃度為0.002g/ml(純度5%),即1mg/ml為實際花青素的最大安全濃度;花青素在ST細胞上對抗TGEV的最佳用量為0.002g/ml500μl;起到治療作用的花青素用量為0.002g/ml500μl、375μl,但是花青素只是在ST細胞感染TGEV一定時間內對該病毒起到了治療作用,而且體外試驗結果不能完全等同于體內的治療效果,所以體內抗病毒效果有待于進一步試驗加以驗證。
   第三部分:豬傳染性胃腸炎

5、病毒纖突糖蛋白在畢赤酵母中的分泌表達及免疫原性分析。
   根據GenBank上豬傳染性胃腸炎病毒纖突糖蛋白S全基因序列設計一對引物,并在5’引物和3’引物中引入EcoRⅠ、NotⅠ酶切位點,經PCR擴增出長2.2kb的目的基因S(其中包含A、B、C、D四個主要抗原位點),克隆于pBS-T載體,克隆載體TS經EcoRⅠ、NotⅠ雙酶切,S基因與pPIC9k載體連接,測序驗證陽性克隆,SalⅠ線性化重組穿梭質粒pPIC9k-S,電

6、轉化GS115感受態(tài),G418篩選和PCR鑒定得到陽性重組子,1%甲醇誘導表達,誘導后上清經SDS-PAGE電泳、免疫印跡和薄層凝膠掃描分析,并利用離子交換技術和膜超濾方法純化目的蛋白,將純化后的蛋白免疫兩周齡BALB/c小鼠。SDS-PAGE電泳表明,S蛋白以可溶性形式分泌表達于胞外,且表達產物的分子量約為82000,與理論推測的分子量一致。免疫印跡結果證明,S蛋白可被TGEV豬陽性血清識別,且具有良好的免疫原性。純化蛋白免疫小鼠后,

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論