北豆根及刺五加提取物對正常小鼠血液流變學作用的比較

1、<p>　　北豆根及刺五加提取物對正常小鼠血液流變學作用的比較</p><p>　　劉 蔚，車玲，孔華麗，劉 潔，溫筱煦，孫 玲，馮端浩</p><p>　　(中國人民解放軍總醫(yī)院第二附屬醫(yī)院藥劑科，北京 100091)</p><p>　　摘要 目的 研究比較北豆根提取物及刺五加提取物對小鼠血液流變學的作用。方法 實驗一小鼠分別給予濃度為0.25

2、g·ｍｌ-1和1.0g·ｍｌ-1的北豆根提取物，實驗二小鼠分別給予濃度為0.25g·ｍｌ-1和1.0g·ｍｌ-1的刺五加提取物(n=12,ig)，連續(xù)給藥3wk，并設(shè)生理鹽水組和維生素E組作為對照。血細胞分析儀進行常規(guī)血細胞測定，熒光偏振法測定紅細胞膜流動性和微粘度。結(jié)果 北豆根提取物可使平均血細胞容積（MCV）顯著降低，血小板數(shù)量（PLT）顯著升高，低濃度北豆根可顯著增加紅細胞數(shù)量（RBC），高

3、濃度北豆根可顯著降低白細胞數(shù)量（WBC）；低濃度北豆根可顯著增加紅細胞膜流動性，降低微粘度，而高濃度北豆根的作用不明顯。高濃度刺五加提取物可顯著性增加血小板數(shù)量（PLT）及紅細胞膜流動性，降低微粘度，低濃度刺五加的作用不明顯。結(jié)論 一定濃度的北豆根提取物及刺五加提取物可以增加紅細膜流動性，從而降低血液粘度，改善血液流變學指標。</p><p>　　關(guān)鍵詞 北豆根；刺五加；血液流變學；紅細胞膜流動性；微粘度&l

4、t;/p><p>　　Comparative Studies on Extracts from Radix Rhizoma Menispermi and</p><p>　　Radix Acanthopanacis senticosi in Influencing Mice Blood Rheology</p><p>　　LIU Wei , CHE Ling ,

5、KONG Huali , FENG Duanhao, et al. </p><p>　　(The Second Hospital Affiliated to PLA General Hospital,Beijing 100091,China)</p><p>　　Abstract Objective To study the effect of Rhizoma Menisperm

6、i and Acanthopanax senticosus extracts on blood rheological changes in mice.Methods The first study two groups of mice were administrated by different doses of Rhizoma Menispermi extracts (0.25,1.0g·ｍｌ-1,n=12,ig) f

7、or 3wk. The second study two groups of mice were administrated by different doses of Acanthopanax senticosus extracts (0.25,1.0g·ｍｌ-1,n=12,ig) for 3wk. NS and vitamin E were set as controls. Blood ingredients were d

8、etermined</p><p>　　Key Words Rhizoma menispermi; Acanthopanax senticosus; hemorheology; erythrocyte membrane fluidity; microviscosity</p><p>　　北豆根是防己科植物蝙蝠葛Menispermum dauric-um DC.的根莖，是一種較常用的中藥

9、，在臨床上已廣泛應(yīng)用，主要作用是抑菌消炎、鎮(zhèn)咳祛痰、肌松和抗心率失常等?，F(xiàn)已有成藥北豆根片問世，功效為清熱解毒、消腫止痛，可用于治療氣管炎等[1]。實驗證明，北豆根水提取物（RMW）和醇提取物（RME）對腫瘤細胞具有廣譜的抑制作用，并能誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡，而北豆根多糖成分（RMP）雖沒有抑瘤作用，但有免疫調(diào)節(jié)作用[2]。據(jù)文獻報道，北豆根里的蝙蝠葛堿阻滯Ca2+通道，抑制血小板激活，亦可參與血小板聚集的抑制，此作用對改善心肌缺血、防止血栓

10、形成，阻抑血小板活性增高所致冠心病和動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展、治療缺血性心臟病誘發(fā)的心律失常，具有一定的意義[3]。</p><p>　　中藥刺五加是五加科植物刺五加Ａｃａｎ ｔｈｏｐａｎａｘｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ(Ｒｕｐｒ.ｅｔＭａｘｉｍ)Ｈａｒｍｓ的根和根莖,在我國使用已久?！侗静菥V目》稱刺五加“補中益氣,久服輕身耐老”。刺五加屬滋補性中藥,具有扶正固本、補腎健脾、益智安神的功效,主治脾腎陽虛、體虛乏力、腰膝酸

11、軟、食欲不振[4]。實驗研究表明,刺五加能夠降低全血低切、中切和高切黏度以及血漿黏度,抑制血栓形成,從而改善血液流變學指標[5,6]?，F(xiàn)代臨床和藥理動物研究表明刺五加在急性腦梗死、冠心病等心腦血管病的治療方面顯示出良好的前景。</p><p>　　本文觀察比較了北豆根及刺五加提取物對小鼠血液流變學的作用，為它們在心腦血管方面的臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。</p><p><b>　　1

12、材料與方法</b></p><p>　　1.1儀器 K-4500型血細胞分析儀（日本東亞公司）;熒光分光光度計（日本日立公司,F-4000型）;離心機(上海醫(yī)療器械廠)。</p><p>　　1.2藥物與試劑:1,6-二苯基-1,3,5-己三烯（DPH,美國Sigma 公司,批號:103F -0483）;淋巴細胞分離液(TBD生物技術(shù)發(fā)展中心,批號:20020320),北豆根

13、（北京琪景飲片廠,批號:051185），刺五加(北京海淀藥品批發(fā)公司, 批號:051185)，維生素E（北京化學試劑公司, 批號:051073）,其余所用試劑均為分析純。</p><p>　　1.3藥物制備 分別稱取北豆根及刺五加各500g，用5000mL蒸餾水浸泡2h后加蒸餾水煎煮3次，過濾，合并3次濾液，加熱濃縮至500mL，使每毫升煎劑含生藥1g，煎劑原液為高濃度。單取100mL煎劑原液加蒸鎦水稀釋4倍制

14、成低濃度提取物，置4℃冰箱備用。稱取60mg維生素E加食用油100mL,混勻配成油溶液為陽性對照，置4℃冰箱備用。</p><p>　　1.4動物 昆明種鍵康小鼠購自軍事醫(yī)學科學院實驗動物中心(實驗動物使用許可證號:SYXK11-00-0025),體質(zhì)量（26±2）g,雌雄各半，適應(yīng)環(huán)境2d后進行實驗。</p><p>　　1．5實驗分組與給藥</p><p

15、>　　1.5.1 北豆根實驗 48只小鼠隨機分為4組，正常對照組（0.9%氯化鈉注射液）,陽性對照組(維生素E),低濃度組(北豆根煎劑低劑量,0.25g/mL), 高濃度組(北豆根煎劑原液,1g/mL),灌胃給藥，每日1次，每次0.5 ml/只,連續(xù)給藥21d。</p><p>　　1.5.2 刺五加實驗 48只小鼠隨機分為4組，正常對照組（0.9%氯化鈉注射液）,陽性對照組(維生素E),低濃度組(

16、刺五加煎劑低劑量, 0.25g/mL), 高濃度組(刺五加煎劑原液, 1g/mL),灌胃給藥，每日1次，每次0.5 ml/只,連續(xù)給藥21d。</p><p>　　1．6 血常規(guī)測定 于停藥次日將小鼠摘眼球取全血20uL，k3Ek3EDTA抗凝。用血細胞分析儀進行血液成分檢測。</p><p>　　1．7 紅細胞膜脂流動性的測定 于停藥次日將小鼠摘眼球取全血，10g/L肝素抗凝,用

17、淋巴細胞分離液分離得到RBC,參照文獻[7]制備紅細胞懸液并稀釋至1×107 mL –1,配制DPH熒光探針并標記，在37℃ 孵育30min，熒光偏振法測定。測定參數(shù)：激發(fā)波長（EX）354nm，發(fā)射波長（EM）430nm，根據(jù)下列公式分別計算偏振度（P），膜脂流動性（LFU）和微粘度（η）：P=（Iv –Ih）/（Iv+Ih）式中Iv為起偏器和檢測器光軸均在垂直方向的光強度，Ih為起偏器光軸在垂直方向，檢測器光軸在水平方向的

18、光強度。LFU=(P最大/Pr -1)/Pr 式中P最大=0.5, Pr為P的實測值。η=2Pr/（0.46-Pr）式中0.46為常數(shù)。</p><p>　　1．8 統(tǒng)計學處理方法 組間數(shù)據(jù)用配對t檢驗,采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件完成。</p><p><b>　　2 結(jié)果</b></p><p>　　2．1北豆根及刺五加提取物對小鼠

19、外周血象的影響</p><p>　　表1結(jié)果顯示：陽性對照藥維生素E可顯著性升高正常小鼠外周血的紅細胞（RBC）計數(shù)（P<0.01）,北豆根提取物可使平均血細胞容積（MCV）顯著降低（P<0.05），血小板計數(shù)（PLT）顯著升高（P<0.01），低濃度北豆根可顯著增加紅細胞計數(shù)（RBC）（P<0.05），高濃度北豆根可顯著降低白細胞計數(shù)（WBC）（P<0.05）；與正常對照組比較，高

20、濃度刺五加提取物可顯著性增加血小板計數(shù)（PLT）（P<0.05）。</p><p>　　表1 北豆根及刺五加提取物對小鼠外周血象的影響(x±s)</p><p>　　Table 1 Effect of RM and RAS extracts on mice peripheral blood count(x±s)</p><p>　　組別

21、 N WBC/×109·L-1 RBC/×1012·L-1 MCV/fL-1 PLT/109·L-1</p><p>　　正常對照 12 4.50±1.91 9.20±0.57 52.13±1.58 1179.67±155.80&

22、lt;/p><p>　　維生素E 12 4.80±1.79 10.10±0.56** 51.41±1.60 1118.00±160.57</p><p>　　低濃度北豆根 12 4.16±2.82 9.72±0.20* 50.08±

23、0.87* 1699.00±191.92**</p><p>　　高濃度北豆根 12 3.76±2.40* 9.20±0.38 49.09±0.91** 1794.73±226.15**</p><p>　　正常對照 12 4.58±1.19 9

24、.17±0.41 56.34±1.20 1015.45±239.86</p><p>　　維生素E 12 4.88±1.79 10.07±0.55** 55.40±1.60 968.00±160.56</p><p>　　低濃度刺五加 12

25、 4.42±1.69 9.10±0.86 54.84±2.68 1102.78±178.05</p><p>　　高濃度刺五加 12 4.81±1.07 9.30±0.55 55.61±1.44 1129.90±161.30*</p>&l

26、t;p>　　*P<0.05, **P<0.01,與正常組比較</p><p>　　2．2北豆根及刺五加提取物對小鼠紅細胞膜脂流動性的影響</p><p>　　表2結(jié)果顯示，與正常對照組比較，北豆根提取物低濃度組可明顯增加小鼠LFU，降低η，北豆根提取物高濃度組的作用不明顯。刺五加提取物高濃度組顯著增加小鼠LFU，顯著降低η（P<0.05），刺五加提取物低濃度組的作用

27、不明顯。同樣條件下，維生素E使LFU明顯增加，η顯著降低(P<0.05)。</p><p>　　表2 北豆根及刺五加提取物對小鼠紅細胞膜脂流動性和微粘度的影響(x±s)</p><p>　　Table 1 Effect of RM and RAS extracts on mice LFU and microviscosity(x±s)</p><

28、;p>　　組別N LFU/mPa·s-1 η/mPa·s-1 </p><p>　　正常對照 12 1.560±0.064 5.023 ±0.395</p><p>　　維生素E 12 1.727±0.

29、179* 4.551±0.263*</p><p>　　低濃度北豆根 12 1.715±0.179** 4.487±0.191**</p><p>　　高濃度北豆根 11 1.604±0.177 4.733±0.202<

30、;/p><p>　　正常對照12 1.531±0.156 5.227±0.586</p><p>　　維生素E12 1.695±0.112* 4.736±0.263*</p><p>　　低濃度刺五加12 1.562±0.199 5.183±0

31、.723</p><p>　　高濃度刺五加12 1.606±0.104* 5.030±0.233*</p><p>　　*P<0.05,**P<0.01,與正常組比較</p><p><b>　　3討論</b></p><p>　　血液流變學是一門新興的學科，主要研

32、究全血以及血細胞，尤其是紅細胞、白細胞、血小板的流變特性，血管的力學特性以及微循環(huán)血液流變學，肺循環(huán)血液流變學等。血液的正常流動是維持生命活動的重要前提，在人體內(nèi)任何一個有生命的細胞、組織、器官若得不到良好的血液供給，其生理功能將很快下降，甚至發(fā)生不可逆轉(zhuǎn)的改變，最終導(dǎo)致機體的死亡。血液流變性質(zhì)的異常將會引起機體血液循環(huán)障礙，其中尤以血液粘度為重要因素，諸多研究表明，像高血壓、缺血性疾病甚至癌癥等，雖有諸多治病因素，但均與血液粘度異常有

33、關(guān)[8,9]。維生素E是經(jīng)典的抗氧化劑，能健全生物膜，保護血細胞。</p><p>　　本實驗中將維生素E作為陽性對照，結(jié)果表明維生素E能提高紅細胞膜脂流動性、降低微粘度，并能增加紅細胞計數(shù)，顯示出良好的改善血液流變學指標的作用[10,11]。相同實驗條件下，北豆根提取物低濃度組（0.25g/ml）與生理鹽水組相比均可明顯增加紅細胞膜脂流動性、降低紅細胞膜微黏度（P<0.01），北豆根提取物高濃度組（1.0

34、g/ml）對紅細胞膜脂流動性及微黏度沒有作用。刺五加提取物高濃度組（1.0g/ml）可以顯著增加小鼠紅細胞膜脂流動性、降低微粘度，刺五加提取物低濃度組（0.25g/ml）的作用不明顯，說明不同種類的中藥都有各自特定的治療劑量，提示臨床應(yīng)掌握好恰當?shù)氖褂脛┝俊?lt;/p><p>　　同時在我們的實驗中還發(fā)現(xiàn)，在對小鼠血液成分檢測中，與生理鹽水組比較，北豆根水提物低高濃度二個劑量組均可顯著增加小鼠的血小板數(shù)量（PLT）

35、，顯著降低平均血細胞容積（MCV），其中低濃度組還可顯著增加小鼠的紅細胞數(shù)量（RBC），此結(jié)果是否提示北豆根可以用于血小板低下的患者，還有待進一步的實驗證明。北豆根提取物高濃度組可顯著降低小鼠的白細胞數(shù)量（WBC），與文獻報道[12]北豆根可以抑制炎性滲出和血細胞向炎癥部位聚集（趨化）相一致，白細胞減少時，神疲乏力，容易感染，結(jié)合紅細胞膜流動性數(shù)據(jù)結(jié)果，高濃度北豆根提取物對LFU無影響，提醒臨床在北豆根的使用過程中，并不是濃度越高效果就

36、越好，有的中藥濃度高了不僅沒有療效，反而副作用增加，因此臨床使用應(yīng)嚴格掌握適應(yīng)癥，選取合適的劑量，適宜的療程，并在用藥過程中注意血常規(guī)的檢測。</p><p>　　在對小鼠血常規(guī)檢測中，刺五加提取物有輕微增加小鼠WBC、RBC及PLT的趨勢，其中對PLT的作用較顯著。在中醫(yī)學上，刺五加為補益類中藥，臨床上可用來治療</p><p>　　白血球減少癥，具有活血作用可提高骨髓造血功能，本文實驗

37、結(jié)果也初步證實了刺五加的活血養(yǎng)血作用。</p><p>　　以上研究結(jié)果為北豆根及刺五加辯證施治血淤癥提供了實驗依據(jù)，提示北豆根</p><p>　　及刺五加在心腦血管病和微循環(huán)障礙防治方面均具有一定的應(yīng)用前景，同時在臨床應(yīng)用中還要注意其使用劑量、療程、適應(yīng)癥及可能出現(xiàn)的不良反應(yīng)，做到安全、合理、有效地利用中藥資源。當然這些研究結(jié)果僅限于一種正常的動物，有一定的局限性，未來更深入的研究必將

38、有助于對其藥理作用的全面認識。</p><p><b>　　參考文獻</b></p><p>　　1.高學敏.中藥學[M] 北京:人民衛(wèi)生出版社,2000:532.</p><p>　　2.梁文杰，劉東青，北豆根提取物對小鼠和人淋巴細胞及巨噬細胞作用的體外實驗研究[J] 中國免疫學雜志，2005:21（1）,56.</p>&l

39、t;p>　　3.李儀奎,姜名瑛,李銳等.中國藥理學,1992:70-71.</p><p>　　4.王志睿,林敬明,張忠義.刺五加化學成分與藥理研究進展.中藥材,2003,26(8):603-606.</p><p>　　5.睢大員,韓叢成,于曉風,等.刺五加葉皂苷對高脂血癥大鼠血脂代謝的影響及其抗氧化作用.吉林大學學報(醫(yī)學版),2004,30(1):56-59.</p>

40、;<p>　　6.陶明飛,楊衛(wèi)東.刺五加注射液對家兔血液流變學的影響.中國血液流變學雜志,2004,14(2):166-168.</p><p>　　7. Shinitzky M,Barenholz Y.Fluidity parameters of lipid regions determined by fluorescence polarization. Biochem Biophys

41、Acta,1978,515（4）:367-371.</p><p>　　8. 熊立凡 金大明.現(xiàn)代一般檢驗與臨床實踐[M].上海科學技術(shù)文獻出版社,1999:41</p><p>　　9. 趙春亭，趙子文.臨床血液流變學[M].人民衛(wèi)生出版社,1997:84</p><p>　　10.馬東志.維生素E對血液流變學的影響[J].河南醫(yī)藥信息，2003，01：32<

42、;/p><p>　　11.李愛陽,吳麗萍,郭麗君等.維生素E對實驗性動脈粥樣硬化家兔血液流變學的影響[J].白求恩醫(yī)科大學學報,2000,26(02):155</p><p>　　12.劉國.超劑量服用北豆根致不良反應(yīng)一例.泰山醫(yī)學院學報,2001,22(2):100.</p><p>　　13.李輝,劉春峰,楊秀峰.北豆根的現(xiàn)代研究概況.中國醫(yī)藥研究,2005,6:3