血栓與止血實驗檢查

1、第一節(jié) 血栓與止血的篩選檢驗,一、一期止血缺陷的篩選檢驗二、二期止血缺陷的篩選檢驗三、纖溶活性增強的的篩選檢驗四、抗凝物質(zhì)檢驗,,一期止血的篩查檢驗,出血時間測定 血小板計數(shù) 束臂試驗 血塊收縮試驗 毛細血管抵抗力試驗,,正常值：（100～300）×109/L,危險,,出 血 時 間 測 定 bleeding time，BT,一、原理： 測定在皮膚受特定條件外傷后，出

2、血自然停止所需的時間即為出血時間。此過程反映了毛細血管與血小板的相互作 用，包括內(nèi)皮下組織與血小板粘附（通過vWF 的作用）、血小板的聚集和釋放等反應(yīng)，以 及PGI2與TXA2的動態(tài)平衡。,二、方法 Ivy法、出血時間測定器法（衛(wèi)生部推薦方法）三、試劑與器材： 1、血壓計，秒表，干凈濾紙 2、出血時間測定器,四、操作： 1、 血壓計袖帶縛于測定上肢的上臂，加壓并維

3、持在40mmHg,兒童減半。 2、在肘前窩下5cm處的尺側(cè)做局部消毒 后，將測定器垂直貼于皮膚表面，按下按 鈕，同時啟動秒表，移開測定器。 3 、每隔30s,用干凈濾紙吸去流出的血液，直 至流血自然停止，并記錄秒表讀數(shù)。,五、參考值 ： 2.5-9.5 min六、臨床意義： 延長： 1、出血時間延長見于血小板減少癥

4、 2、 血小板功能異常 3、血管性血友病 4、血管壁異常 5、某些嚴(yán)重的凝血因子缺乏 縮短：高凝狀態(tài)和血栓性疾病,血小板檢測,一、血小板生存時間檢測二、血小板相關(guān)抗體檢測三、血小板粘附試驗四、血小板聚集試驗五、血小板第3因子有效性檢測六、血小板膜糖蛋白檢測七、血小板活化指標(biāo)檢測（血漿β-TG、PF4、血 小板P選擇素檢測）,,,,誘

5、聚劑,PPP,PRP,,,,,,,,,,,,,,血 小 板 聚 集 試 驗platelet aggregation tset，PAgT,,臨床意義： 血小板無力癥、巨大血小板綜合癥、血小板貯存池病、低（無）纖維蛋白原血癥、肝硬化、使用血小板抑制劑等。 高凝狀態(tài)、血栓形成性疾病、糖尿病、口服避孕藥、人工瓣膜移植術(shù)、吸煙等。,聚集率減低,聚集率增高,質(zhì)量控制：1.采血要順利，避免

6、組織液混入，抗凝劑使用合理（不用 EDTA抗凝） 2.采集后3h內(nèi)室溫下完成 3.試驗前十天停用一切抑制血小板聚集的藥物；試驗前禁食 高脂類食物 4.注意PRP：800~1000r/min離心10min PLT(200~400)X109/L PPP ：3000r/min離心20min

7、 PLT＜20X109/L,血 小 板 粘 附 試 驗 platelet adhension test,PAdT,原理： 受檢者血液一定速度通過一定量玻璃珠的塑料管，測定通過玻璃珠前后血液中血小板數(shù)的差值，即為粘附于玻珠和塑料管的血小板數(shù)，由此可計算出其占血小板總數(shù)的百分比，即為血小板粘附率。方法：玻球法、玻璃濾器法、玻珠法,臨床意義：

8、血管性血友病、巨大血小板綜合癥、血小板無力癥、肝硬化、MDS、急性白血病、服用抗血小板藥物等 見于血栓前狀態(tài)和血栓性疾病、妊高癥、口服避孕藥等,粘附率減低,粘附率增高,二期止血缺陷的篩選檢驗,全血凝固時間測定 活化部分凝血活酶時間測定 血漿凝血酶原時間測定,活 化 部 分 凝 血 活 酶 時 間 測 定 activated partial thromboplastin time，APTT,

9、一、原理,APTT,,,,Ca2+腦磷脂,白陶土,,Ca2+腦磷脂,部分凝血活酶,二、操作 （一）APTT手工法(試管法） 血漿0.1ml＋APTT試劑各0.1ml +CaCl20.1ml （混勻計時） 結(jié)果觀察：緩慢傾斜試管，觀察液體流動狀態(tài)，流動

10、 停止停止計時 參考值 25～45s (二）儀器法,,37℃溫浴,,,,APTT,延長,縮短,因子VIII、IX、XI活性減低,高凝狀態(tài),,,,,,三、臨床意義,肝素抗凝監(jiān)測,APTT糾正試驗,于患者血漿中分別加入1/4 的正常新鮮血漿、硫酸鋇吸附血漿、正常血清，再作APTT試驗。 硫酸鋇吸附血漿 VIII、XI、XII 正常血

11、清 IX、XI、XII 新鮮血漿 VIII、IX、XI、XII,血友病甲,血友病乙,FⅪ缺乏,正常血漿,硫酸鋇吸附血漿 （缺Ⅸ）,正常血清(缺Ⅷ),APTT糾正試驗----血友病,糾正,不糾正,糾正,糾正,糾正,糾正,不糾正,,,,患者血漿,,糾正,糾正,凝血酶原時間測定Prothrombin time ，PT一、原理,,,,Ca2+

12、腦磷脂,PT,,,組織因子,Ca2+ 磷脂,1、直接報告患者及正常對照的PT秒數(shù) 2、報告凝血酶原時間比值（PTR） PTR=受檢者PT（秒）/正常對照PT（秒） 3、報告國際標(biāo)準(zhǔn)化比值（INR） INR=PTRISI,二、報告方式,PT,延長,縮短,因子II、V、VII、X、Fg活性減低,高凝狀態(tài),,,,,三、臨床意義,口服雙香豆素類抗凝藥物監(jiān)測,要

13、保證止凝血檢驗的質(zhì)量 必須做好以下十點：,1. 采血須順利，盡量用大號針頭，動作要輕柔； 2. 標(biāo)本用加蓋有刻度標(biāo)記的塑料試管或硅化管收 集 ；3. 抗凝劑用109mmol/L的枸櫞酸鈉，抗凝劑與 血液的比例為1:9；,當(dāng)Hct 增高>55% 或<25% 時，務(wù)必對抗凝劑用量或濃度進行調(diào)整：抗凝劑用量(ml)=0.00185x全血量(ml)x[1-Hct(%)],4

14、. 標(biāo)本采集至檢驗時間PT＜4小時，APTT＜2 小時，一些因子活性檢測要求即刻試驗；5.使用儀器推薦或配套的試劑，使用時嚴(yán)格按照說 明書，注意有效期和穩(wěn)定性；6. 反應(yīng)溫度控制在（37±1）℃；7. 手工操作必須做正常對照，復(fù)管檢測；8. 正確使用正常對照血漿及參比血漿；9. 每天堅持室內(nèi)質(zhì)控，積極參加室間質(zhì)評；10.建立本實驗室的參考范圍。,凝血因子檢驗,一、凝血酶原消耗試驗及

15、其糾正試驗二、簡易凝血活酶生成試驗及糾正試驗三、血漿因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ促凝活性檢測四、血漿因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ促凝活性檢測五、凝血因子Ⅹ III定性試驗和亞基抗原檢測,纖溶活性篩選檢驗,優(yōu)球蛋白溶解時間血清纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物檢測血漿D-二聚體檢測血漿硫酸魚精蛋白副凝固試驗,血清纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物測定fibrin/fibrinogen product，F(xiàn)DP,一、原理： 膠乳凝集法：在受檢血清

16、中加入特異性抗纖維蛋白（原）D、E片段抗體標(biāo)記的膠乳顆粒懸液，如果血清中含有纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物（FDP），特別是D、E片段，即可發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，導(dǎo)致膠乳顆粒凝集。,二、臨床意義： 1、血清FDP輕度增高10-40mg/L，見于急性靜脈血栓、急性心梗、嚴(yán)重肺 炎大手術(shù)后、惡性腫瘤、休克等。 2、血清FDP明顯增高>40mg/L，見于原發(fā)性纖溶癥、DIC、M3、應(yīng)用鏈激酶等溶栓治療時。,血漿D

17、-二聚體測定D-Dimer,一、原理： 1、膠乳凝集法 2、ELISA法二、臨床意義： 1、DIC時呈陽性或明顯增高，另見深靜脈血栓、心梗、肺栓塞、重癥肝炎等 2、可作為原發(fā)纖溶和繼發(fā)纖溶鑒別的重要依據(jù)。,生理性抗凝蛋白檢驗,一、抗凝血酶檢測 1、血漿抗凝血酶活性檢測 2、血漿抗凝血酶抗原檢測二、蛋白C檢測 1、血漿蛋白C活性檢測 2、血漿蛋白C抗原檢測

18、三、血漿蛋白S抗原檢測四、組織因子途徑抑制物檢測,病理性抗凝物質(zhì)檢驗,一、復(fù)鈣交叉試驗二 、凝血酶時間檢測及甲苯胺藍糾正試驗三、普通肝素和低相對分子質(zhì)量肝素檢測四、凝血因子Ⅷ抑制物檢測五、狼瘡抗凝物質(zhì)的篩選試驗和確診試驗,凝血酶時間測定及甲苯胺藍糾正試驗 thrombin time,TT一、原理:,,凝血酶,,TT,二、結(jié)果判斷： 正常人凝血酶時間一般在16-18s，超過正常對照3s或在20

19、s以上視為延長；如正常對照在20s以上，則超過5s為延長。 加甲苯胺藍后TT明顯縮短，與未加甲苯胺藍的TT比較相差5s以上，視為糾正。,TT延長,血漿抗凝物質(zhì)增多,纖維蛋白原異常,甲苯胺藍能糾正,甲苯胺藍不能糾正,,,,,鏈激酶、尿激酶溶栓治療監(jiān)測指標(biāo),纖維蛋白原異常,高纖維蛋白原血癥為心腦血管血栓形成的獨立危險因素。,量,增高,嚴(yán)重肝病營養(yǎng)不良DIC,減低,老年人、慢性感染腫瘤、應(yīng)激、口服避孕藥期間等,