羊肉成熟過程中細胞自噬對細胞凋亡的影響機制.pdf

1、肉在人類飲食結構中是不可缺少的食品，也是人類獲取動物性蛋白質的重要來源。我國具有數目眾多的奶山羊，其中關中奶山羊是我國奶山羊當中的著名品種之一，且奶山羊在失去奶用價值后，重復利用其肉用價值是目前奶山羊企業(yè)非常關心的問題。嫩度是決定羊肉品質最重要的因素之一，而淘汰奶山羊大多是成年山羊，其肉嫩度品質的提高更是肉品企業(yè)面臨的關鍵技術問題。本試驗以本地特色的關中奶山羊為研究對象，深入探討骨骼肌細胞中細胞自噬對細胞凋亡的影響機制以及對羊肉的嫩化機

2、制。具體試驗內容和結果如下:
　　1.檢驗奶山羊肉成熟過程中伴隨著細胞自噬的發(fā)生。本研究取正常奶山羊背長條肌(LD)肉樣放置在4℃下，分別取其0、1、3、5天的肉樣提取胞漿蛋白進行研究，對細胞自噬主要指標Becline-1和LC3蛋白的表達進行Western blot檢測。結果顯示，第1、3、5天樣品中Becline-1和LC3蛋白的表達量均顯著高于第0天，證明了羊肉成熟過程中伴隨著細胞自噬的發(fā)生。
　　2.驗證雷帕霉素(R

3、PA)及3-甲基腺嘌呤(3-MA)處理對細胞自噬的作用。本研究以生理鹽水孵育處理作為對照，以細胞自噬誘導劑雷帕霉素及其抑制劑3-甲基腺嘌呤孵育處理奶山羊背長條肌肉樣，并經由Western blot檢測Beclin-1及LC3蛋白的表達量。結果顯示，雷帕霉素處理組中Becline-1和LC3的蛋白表達量均顯著高于對照組，而3-甲基腺嘌呤處理組結果則相反，證明了雷帕霉素及3-甲基腺嘌呤孵育處理可以調節(jié)奶山羊骨骼肌細胞的細胞自噬。
　　

4、3.驗證細胞自噬對細胞凋亡的影響。本研究用雷帕霉素及3-甲基腺嘌呤處理奶山羊背長條肌肉樣，以生理鹽水孵育處理作為對照，經Western blot檢測細胞凋亡標志蛋白Caspase-3與Cleaved Caspase-3蛋白的表達量。結果顯示，雷帕霉素處理組中Caspase-3及Cleaved Caspase-3的蛋白表達量均顯著高于對照組，而3-甲基腺嘌呤處理組結果則相反，證明了雷帕霉素及3-甲基腺嘌呤孵育處理可以通過調節(jié)奶山羊骨骼肌細

5、胞的細胞自噬進而調控其細胞凋亡。
　　4.檢驗雷帕霉素及3-甲基腺嘌呤處理對奶山羊肌肉嫩度的影響。本研究經雷帕霉素及3-甲基腺嘌呤處理奶山羊肉樣，以生理鹽水孵育處理作為對照，通過Western blot檢測肌間線蛋白表達量。結果顯示，經雷帕霉素處理后，奶山羊骨骼肌細胞的肌間線蛋白的降解程度高于對照組，而經3-甲基腺嘌呤處理則得到相反結果。說明可以通過奶山羊骨骼肌細胞的細胞自噬來調節(jié)其肉的嫩度。
　　5.檢驗雷帕霉素及3-甲基

6、腺嘌呤處理對奶山羊骨骼肌細胞凋亡的兩條通路的影響。本試驗經雷帕霉素及3-甲基腺嘌呤處理奶山羊背長條肌肉樣，以生理鹽水孵育處理作為對照，通過Western blot檢測死亡受體通路當中Fas、Fas-L、Caspase-8蛋白的表達與線粒體通路當中Caspase-9、Bcl-2、Bax及胞漿內細胞色素C蛋白的表達。結果表明，雷帕霉素處理組的Fas、Fas-L、Bax/Bcl-2及細胞色素C蛋白的表達量明顯高于對照組，Caspase-8和C