攜載納米粒的ECM給藥體系提高多西紫杉醇對腦膠質瘤治療效果的研究.pdf

1、目的：針對大多數化療藥物在腫瘤治療中存在滲透性差和滯留時間短的問題，納米粒作為抗腫瘤藥物載體具有改變藥物在組織中的分布、提高穩(wěn)定性和降低藥物毒性等特點。為了進一步延長藥物在腫瘤部位的滯留時間，本論文將完整的大鼠腦去細胞支架作為藥物儲庫吸附載藥納米粒，從而實現藥物在腫瘤部位的長效滯留。論文中還制備了一種具有腫瘤粘附性及穿透性的新型陽離子納米粒，包載經典的抗腫瘤藥物多西紫杉醇，該載藥納米粒與去細胞支架相互粘附形成多個微型藥物儲庫，并分別對它

2、們進行了質量評價，旨在為臨床提供一種新的高效低毒制劑。同時，為了克服血腦屏障的存在阻礙許多對病灶區(qū)有治療作用的藥物如抗癌藥、抗生素和肽類等的進入，我們采用瘤內注射的給藥方式將吸附有載藥納米粒的支架勻漿后直接注射在腫瘤部位，使藥物高濃度的聚集在病灶區(qū)，以顯著提高治療效果。本論文在課題組前期研究基礎上，利用創(chuàng)新制備的維生素E琥珀酸酯-接枝-（ε-多聚賴氨酸）聚合物自組裝形成的納米粒結合去細胞支架技術，探索攻克抗腫瘤藥物對于腦膠質瘤高復發(fā)、低

3、療效的治療瓶頸。
　　方法：⑴利用維生素E琥珀酸酯-接枝-（ε-多聚賴氨酸）聚合物自組裝的制劑技術制備載藥納米粒，通過粒徑、Zata電位和包封率的測定，制備出符合注射要求的載藥納米粒制劑。⑵根據課題組成熟的去細胞支架制備方法，以符合要求的制備方法與工藝條件制備健康大鼠的腦去細胞支架。以去細胞支架的形態(tài)、去細胞化的程度及主要成分等作為考察指標，制備出符合實驗要求的去細胞支架。⑶在pH值和藥物含量等參數相同的條件下，通過HPLC法測量

4、不同時間點藥物的含量，考察不同制劑間藥物的累積釋放量及釋放時間，結合納米粒在去細胞支架復合物中的體外釋放行為，確定藥物在納米粒及去細胞支架復合物中的釋放形式。⑷通過細胞水平上腫瘤球的穿透和生長抑制實驗，模擬體內腫瘤的生長情況，考察納米粒結合去細胞支架的復合物抑制腫瘤生長的作用。⑸采用課題組成熟的腦膠質瘤建模方法建立C6/SD大鼠腦膠質瘤模型，通過實時在體示蹤不同制劑組藥物在腫瘤部位注射后不同時間點(3 d、7 d、14 d)的分布情況，

5、考察納米粒對腫瘤組織的穿透性及去細胞支架作為藥物儲庫延長藥物在腫瘤部位的作用時間。⑹以C6/SD大鼠腦膠質瘤為模型，將包載多西紫杉醇的納米粒粘附去細胞支架的復合物（DTX-NPs-dBECM complex）為治療藥物，通過單次瘤內注射載藥量相同的不同制劑進行抗腫瘤治療。通過考察腫瘤體積抑制率、大鼠生存時間以及HE染色變化等指標評價抗腫瘤效果；通過免疫組化法測定Ki67、Caspase3和CD31等腫瘤相關蛋白的含量，探索DTX-NPs

6、-dBECM復合物的抗腫瘤機制。
　　結果：①制備的載藥納米粒平均粒徑為32 nm，納米粒對稱分布，分散均勻，形態(tài)圓整，穩(wěn)定性好。本實驗制備的多西紫杉醇納米粒帶正電，其 Zata電位為17.7 mV，載藥量為3.99％，包封率達73.37%。②制備的去細胞支架形態(tài)完整，去細胞化完全，較好的保留了纖維連接蛋白、層粘連蛋白、IV型膠原和粘多糖等細胞外基質成分。③體外釋放實驗證明納米粒作為藥物載體可以起到緩釋作用，而去細胞支架吸附載藥納

7、米粒進一步的延長了藥物的釋放時間。④細胞水平的腫瘤球實驗證明制備得到的納米粒具有較強的腫瘤穿透能力，結合了去細胞支架的納米粒復合物能更好的促進藥物進入腫瘤深部，吸附納米粒的去細胞支架復合物制劑組較單純溶液組和單純納米粒組均顯示明顯的抑制腫瘤生長的作用。⑤體內的示蹤實驗表明瘤內注射不同制劑后，在相同時間點，吸附納米粒的去細胞支架復合物制劑組相較于溶液組與納米粒組腫瘤部位具有更高濃度的藥物聚集，并且藥物釋放的時間更長。⑥體內實驗證明，攜載納

8、米粒的去細胞支架給藥體系可以非常有效地提高多西紫杉醇在腫瘤部位的濃度和滯留時間，對腦膠質瘤的生長有顯著抑制作用。
　　結論：建立了一種新型的遞送系統(tǒng)，使用dBECM作為藥物儲庫，延長可穿透的DTX-NPs在腫瘤治療中的保留時間。通過體外實驗表明，不論從單層細胞模型或膠質瘤球模型中均證明C6細胞對DTX-NPs-dBECM復合物的攝取是呈現時間依賴性的，并且DTX-NPs-dBECM復合物比游離DTX溶液或DTX-NPs顯示出更強的