氨基酸和藥物的毛細管電泳手性分離新體系研究.pdf

1、手性物質對映體在人類的生命過程中具有重要的作用，很多與人類生命息息相關的物質，如蛋白質、多肽、氨基酸以及手性藥物等均具有一個或多個手性中心。不同對映異構體的光學活性和立體構象不同，而在生命體內表現(xiàn)出不同的生理活性和藥理活性。因此，對映體的手性分離在生命科學及其它相關領域均具有重要的意義。 毛細管電泳（CE）手性分離是分析化學領域重要的研究課題之一。在手性分離中，CE具有高效、快速、易自動化、操作模式多、試劑及樣品用量少等優(yōu)點，目

2、前已發(fā)展成為一種重要的分離分析技術，在生物、化學、醫(yī)藥、環(huán)保和食品等領域中得到了廣泛應用。 本論文采用CE技術，對氨基酸、手性藥物青霉胺和磷酸苯丙派林對映體的手性分離進行了詳細研究，分別建立了氨基酸、青霉胺和磷酸苯丙派林對映體的CE手性分離新體系。論文的主要研究內容包括以下四部分： 1. 建立了一種CE手性分離青霉胺對映體的新方法，以磺化-β-環(huán)糊精（S-β-CD）為手性選擇劑，采用CE技術對2，4-二硝基氯苯衍生的青霉

3、胺對映體的手性分離進行了詳細研究。確定的最佳分離條件為：電泳緩沖液的組成為25 mmol/L S-β-CD，50 mmol/L硼砂（pH 9.5）；毛細管柱溫為20 ℃；分離電壓為20 kV。并考察了在大量D-青霉胺存在下，測定微量L-青霉胺的可能性。當D-青霉胺中，L-青霉胺的含量在0.3～2.0﹪范圍內時，其濃度與吸光度之間呈現(xiàn)良好的線性關系(R＝0.9995)，應用該法對市售的D-青霉胺藥片進行光學純度分析，測得其光學純度大于99

4、.7﹪。 2. 建立了一種采用CE技術，手性分離磷酸苯丙哌林對映體的新方法。以10 mmol/L羥丙基-γ-環(huán)糊精（HP-γ-CD）為手性選擇劑，在100 mmol/L Tris-H3PO4（pH 3.0）緩沖溶液中，對磷酸苯丙哌林對映體的手性分離進行了研究，25 min內實現(xiàn)了基線分離, 分離度達2.03。并考察了該方法的檢測限和線性范圍，發(fā)現(xiàn)磷酸苯丙哌林對映體的濃度在0.5～10 mg/L范圍內與吸光度之間呈現(xiàn)良好的線性關系

5、。將其應用于血清樣品分析，獲得了滿意的結果。實驗還嘗試采用場放大堆積方法，對磷酸苯丙哌林對映體進行在柱富集，使磷酸苯丙哌林對映體的檢測靈敏度提高了23倍。 3. 以新型手性表面活性劑馬來海松酸三鈉（SFPA）為手性選擇劑，采用膠束電動毛細管色譜（MECC）技術，對萘-2，3-二甲醛（NDA）衍生氨基酸對映體的手性分離進行了詳細研究。分別考察了緩沖溶液的類型、濃度和pH值，SFPA濃度以及毛細管柱溫、分離電壓和毛細管有效長度等因素

6、對手性分離的影響，確立了最佳的分離條件。發(fā)現(xiàn)在選擇的最佳條件下，色氨酸（Trp）和犬尿氨酸（Kyn）均得到了基線分離，而4-甲基-苯丙氨酸（4-M- Phe ）、苯丙氨酸（Phe）、精氨酸（Arg）和β-苯丙氨酸（β-Phe）也得到不同程度的分離。增長毛細管有效長度時，后四種氨基酸的分離度有所增加，但依然沒有實現(xiàn)基線分離。實驗還進一步考察了采用此法測定DL- Trp、DL-Kyn對映體純度的可能性，表明該法可以應用于對映體雜質大于2﹪的

7、光學純度檢驗。 4. 以新型手性表面活性劑2-[(3-脫氫松香酰胺丙基)二甲氨基]-1-乙磺酸鹽（DPDA-ES）為手性選擇劑，采用MECC技術，對NDA衍生氨基酸對映體的手性分離進行了詳細研究。分別考察了DPDA-ES的濃度，緩沖液的類型、pH值及濃度，毛細管柱溫、分離電壓和毛細管有效長度等因素對手性分離的影響。在優(yōu)化了實驗條件后，當毛細管有效長度為50 cm時，β-Phe、 Trp 和Kyn對映體得到了基線的分離，分離度分別