有關物質分析中HPTLC與HPLC的相關性研究.pdf

1、反相高效液相色譜法（RP-HPLC）是藥物有關物質控制的最重要的方法之一。在建立RP-HPLC方法時，需要對色譜系統(tǒng)的分離能力進行驗證。通?？梢酝ㄟ^與其具有不同分離原理的其它分析方法，如正相高效液相色譜法、高效薄層色譜法（HPTLC）、高效毛細管電泳法（HPCE）等建立關聯，對RP-HPLC方法的有效性作出評價。本論文通過對3種喹諾酮類抗生素有關物質HPTLC與RP-HPLC方法分離能力的相關性研究，探討如何利用HPTLC作為互補方法，

2、驗證RP-HPLC系統(tǒng)的分離能力。全文內容概括如下：
　　一、以加替沙星及其有關物質為例，建立HPTLC與HPLC相關性分析方法。
　　1、建立加替沙星有關物質HPTLC分析方法
　　基于試驗設計的理念，建立和優(yōu)化了分析加替沙星及其8種有關物質的HPTLC方法。利用均勻設計從22種薄層展開常用溶劑中初篩展開劑系統(tǒng)，再利用中心組合設計對各展開劑組分比例進行優(yōu)化，確定的最優(yōu)展開劑為：甲醇：1，2-二氯乙烷：氨水：乙腈(V/

3、V/V/V)=2.8：7.2：0.5：0.5。所建立的HPTLC方法：采用MERK高效硅膠GF254薄層板（10×10cm），用水：甲醇（V/V=20：80）預洗后，于110度活化1h；采用3mm條帶狀點樣，點樣10μL；室溫展開；采用UV掃描方式檢測，檢測波長為292 nm。
　　2、HPTLC-MS方法分析加替沙星有關物質
　　利用TLC-MS接口技術建立HPTLC-MS的分析方法，獲得了各有關物質的Q1質譜數據；確定各

4、雜質的準分子離子峰，并對其主要質譜峰進行歸屬。HPTLC-MS方法中質譜條件為：ESI正離子檢測模式，加熱管溫度420℃；噴霧針電壓4.5kV，錐孔電壓為120V，m/z掃描范圍為100～500；洗脫流動相為水：甲醇=50∶50；流速：0.3ml/min。每個樣品可在90s內完成分析。
　　3、HPLC-MS方法分析加替沙星有關物質
　　采用HPLC-MS方法分析加替沙星及其8種有關物質，獲得了各有關物質的Q1質譜數據；確定

5、各雜質的準分子離子峰，并對其主要質譜峰進行歸屬。HPLC-MS方法：采用Phenomenex C18(150×4.6 mm,5μm)色譜柱；流動相為10 mmol/L醋酸銨溶液（醋酸調PH=4.3）：甲醇(V/V)=78∶22；柱溫30℃；檢測波長為292 nm；流速為0.4mL/min；進樣10μL。質譜條件： ESI正離子檢測模式；加熱管溫度420℃；噴霧針電壓4.5kV；錐孔電壓為120V，m/z掃描范圍為100～500。

6、　　4、利用MassWorks軟件建立HPTLC-MS與HPLC-MS質譜數據的相關性
　　利用MassWorks軟件分別對加替沙星及其8種有關物質在HPTLC-MS和HPLC-MS分析中獲得的準分子離子峰進行校正，計算校正后同位素峰形曲線的相似度，得出不同方法中同一物質的最小相似度值，作為HPTLC與HPLC相關性分析的閾值（97％），以實現在HPLC與HPTLC系統(tǒng)中對元素組成相同的物質的相互相關。
　　二、通過對洛美沙

7、星和環(huán)丙沙星降解產物的分析，進一步驗證HPTLC與HPLC相關性分析方法
　　分別建立了分析洛美沙星和環(huán)丙沙星諸降解混合溶液的HPTLC-MS和HPLC-MS方法，按上述方法將各雜質的準分子離子峰進行MassWorks校正后，計算峰形校正曲線的相似度，洛美沙星的10個降解雜質在HPTLC和HPLC色譜圖中可以逐一得到對應；環(huán)丙沙星在HPTLC-MS和HPLC-MS分析中可檢測到的3個有關物質在兩種色譜系統(tǒng)中也得到了逐一對應。