蜂蜜中有機活性組分檢測的色譜方法學研究.pdf

1、中國是世界養(yǎng)蜂大國，也是世界蜂蜜生產大國，另外還是蜂蜜出口量最大的國家。蜂蜜中含有多種營養(yǎng)物質，具有保健功能，深受人們的歡迎。蜂蜜中的很多成分都直接影響著它的顏色、香氣、口感和保健功效，而其中的有機活性組分會直接影響其營養(yǎng)價值及其抗菌，抗氧化等生物性功能。為了更好的評價蜂蜜的品質，本文采用色譜技術（高效液相色譜及高效毛細管電泳）建立了蜂蜜中低分子量黃酮、有機酸和水溶性維生素類化合物的毛細管電泳及高效液相色譜分離分析方法。
　　本研

2、究主要內容包括：⑴黃酮是蜂蜜中的重要活性成分，通過直接紫外檢測毛細管區(qū)帶電泳法開發(fā)了來自不同地理來源的許多蜂蜜中的類黃酮的分析方法。在25kV的分離電壓下，使用20mM硼酸鹽作為運行緩沖液在pH=8.4下在5min內完全分離包括蘆丁、槲皮素、山奈酚和楊梅酮的四種典型黃酮類化合物。對于四種類黃酮獲得了在2.0-500mg/L的范圍內的良好的線性關系，并且檢測限范圍為1.17至1.76mg/L。四種類黃酮的回收率在80％-107％的范圍內。

3、應用該方法分離測定了中國河南省12個養(yǎng)蜂場蜂蜜樣品中的黃酮類化合物。在許多蜂蜜樣品中僅檢測到蘆丁和槲皮素，其可以作為鑒定來自不同地理來源的蜂蜜的標記物。⑵采用毛細管電泳法，通過場放大樣品注射技術（FASI）建立了7種有機酸的分析檢測方法，對影響FASI的參數進行系統(tǒng)研究，包括pH、注射時間、水柱長度、緩沖液濃度等。在最佳條件下檢測靈敏度明顯增強，各組分富集倍數可增加7-72倍。酒石酸、原兒茶酸、綠原酸、草酸、沒食子酸、檸檬酸和香草酸的檢

4、測限分別為0.56、0.26、0.85、0.90、0.65、0.52和0.55mg/L。該方法成功應用于來自河南省不同地市蜂場的14種蜂蜜實際樣品的檢測。⑶采用響應曲面法，設計三因素三水平的Box-Behnken的試驗,對影響毛細管電泳分離水溶性維生素B1、B3、B5、B6及維生素C的主要影響因素(緩沖溶液的濃度、分離電壓和柱溫)進行了研究,以五種維生素中的最大分離度和最長保留時間為響應函數,建立了相應的數學模型,得到了它們的最佳分離條

5、件為：17mmol/L的硼砂電泳緩沖液、15 kV電壓、19℃柱溫，并在最優(yōu)的分離條件下，3分鐘內可快速分離蜂蜜樣品中的五種水溶性維生素。⑷建立了同時檢測維生素 C和多巴胺的高效液相色譜-電化學檢測法。其中高效液相色譜的色譜柱采用Diamonsil C18(2)5μ150×4.6mm色譜柱，并以體積比為74:24:2的0.05mol/L磷酸二氫鈉、0.02mol/L檸檬酸和甲醇的混合液為流動相，設定檢測波長為280nm，流速為1mL/m

6、in。在室溫條件下，維生素 C的線性范圍在高效液相色譜和電化學檢測器中分別為2-200μmol/L和0.05-200μmol/L，檢出限分別為1.68μmol/L和0.03μmol/L；多巴胺在高效液相色譜和電化學檢測器中分別為2-200μmol/L和0.05-200μmol/L，檢出限分別為1.25μmol/L和0.01μmol/L。高效液相色譜-電化學檢測器聯(lián)用的方法更為簡便靈敏度和準確率更高，且選擇性更好。⑸建立了可靠，靈敏的反相

7、高效液相色譜-電化學檢測（HPLC-ECD）方法測定蜂蜜中三種有機酸類電化學活性化合物（沒食子酸、綠原酸、咖啡酸）。色譜分離在反相 C18柱上進行，流動相由4%的醋酸水溶液（pH=4.0）和甲醇組成，通過電流檢測，使用工作電位為+0.80V的玻碳電極進行梯度洗脫。該方法的線性，精度，精度和定量和檢測限已被驗證。在優(yōu)化條件下，電化學校準曲線的線性回歸分析顯示出良好的線性關系，在0.005 mg/L-6.0 mg/L的線性范圍內，峰面積與濃