柿子單寧對大腸桿菌及蘋果銹果病毒抑制效果研究.pdf

1、近年來，由病毒直接或間接引起的食品安全問題持續(xù)發(fā)生，嚴重影響了人類的健康生活。由于病毒本身的特征和抗病毒藥物研究方法的局限性，使抗病毒藥物的開發(fā)更困難。柿單寧來源廣泛，具有經濟價值高、綠色無污染的特點。已有研究證實，柿單寧對12種不同病毒具有較強的抑制作用，在食品安全領域具有較好的研究價值和廣闊的應用前景。
　　本研究以柿子單寧提取物為原料，研究其對大腸桿菌及蘋果銹果病毒（RNA病毒）的抑制效果。研究內容及結果如下:
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2、柿子單寧對大腸桿菌的抑制效果研究
　　(1)采用試劑盒的方法從帶有氨芐青霉素抗性基因的大腸桿菌中提取質粒DNA，并做瓊脂糖凝膠電泳對質粒DNA進行鑒定，提取到了大腸桿菌質粒DNA。
　　(2)將柿子單寧與大腸桿菌混合培養(yǎng)，進行大腸桿菌質粒DNA的轉化試驗及柿子單寧與轉化前的大腸桿菌質粒DNA充分接觸后再轉化試驗，通過觀察大腸桿菌菌落的生長狀況分析得到:柿子單寧對大腸桿菌細胞無明顯抑制效果，而對大腸桿菌質粒DNA有明顯地抑制作

3、用。并且，僅當大腸桿菌質粒DNA存在于大腸桿菌細胞外并與柿單寧充分接觸時，柿子單寧對大腸桿菌質粒DNA有抑制作用。
　　(3)分別進行原液、2x、4x、8x、16x、32x、64x、128x、256x、512x、1024x的柿單寧濃度和1min、1.5min、2min的柿單寧作用時間對大腸桿菌質粒DNA的影響研究試驗，結果表明:當離體的大腸桿菌質粒DNA與柿單寧接觸時，不同濃度的柿單寧對大腸桿菌質粒DNA的抑制程度不同。當柿單寧濃

4、度≥0.0005％時，柿單寧濃度越大，其對大腸桿菌質粒DNA的抑制強度越大;當柿單寧濃度≥0.02％時，大腸桿菌質粒DNA完全破壞;當柿單寧濃度＜0.0005％時，對大腸桿菌質粒DNA無抑制作用;柿單寧在不同作用時間下對大腸桿菌質粒DNA的抑制作用無差異顯著性。
　　2柿子單寧對蘋果銹果病毒（RNA病毒）的抑制效果研究
　　(1)從蘋果幼嫩枝條的韌皮部位提取總RNA，采用反轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR，即RNA-cDNA-

5、PCR擴增-瓊脂糖凝膠電泳)方法檢測并驗證，提取到了蘋果銹果病毒。
　　(2)采用柿子單寧與蘋果銹果病毒的cDNA進行PCR擴增及RT-PCR方法進行柿單寧對蘋果銹果病毒（RNA病毒）的影響研究試驗，結果表明:對照蒸餾水對整個試驗不存在影響;柿單寧對cDNA和蘋果銹果病毒均有抑制作用;柿單寧對cDNA的抑制強度隨柿單寧濃度的增大而增強;當柿單寧濃度≥0.19％時，cDNA完全破壞;當柿單寧濃度≤0.15％時，此抑制作用隨著柿單寧濃

6、度的降低而減弱。
　　(3)研究在0.50％、0.25％、0.17％、0.13％的柿單寧濃度和30s、1min、2min、4min、6min的作用時間條件下，柿單寧對蘋果銹果病毒的抑制作用，結果表明:柿單寧作用時間對蘋果銹果病毒基本上沒有影響，柿單寧濃度對蘋果銹果病毒有影響;當柿單寧濃度≤0.17％時，柿單寧對蘋果銹果病毒的抑制作用隨柿單寧濃度的增大而增強;當柿單寧濃度在≥0.25％時，蘋果銹果病毒完全破壞。
　　(4)采用

7、柿子單寧原液（柿單寧含量為1.5％）進行柿子單寧對蘋果銹果病毒的影響研究試驗，在PCR擴增時的柿單寧濃度為0.036％。根據(jù)柿單寧濃度對cDNA的影響研究結果，0.036％的柿單寧濃度對cDNA沒有抑制作用，因此，可以忽略在試驗柿單寧對蘋果銹果病毒的影響研究過程中柿單寧對cDNA的抑制作用。
　　柿子單寧對大腸桿菌質粒DNA及蘋果銹果病毒（RNA病毒）均有抑制作用，當柿單寧濃度≥0.25％時，大腸桿菌質粒DNA及蘋果銹果病毒完全破