基于EGFR為靶點的2-氨基-苯并[d]噻唑衍生物的設計、合成與抗NSCLC活性初探.pdf

1、目的：目前用于治療非小細胞肺癌的EGFR小分子抑制劑已經(jīng)發(fā)展到了第三代，并且這三代傳統(tǒng)的抑制劑多以中嘧啶或喹啉母核藥物較多，因此這些類型的化合物所涉及的知識產(chǎn)權問題較多，而苯并噻唑母核應用于EGFR領域較少，部分先導化合呈現(xiàn)良好抗腫瘤活性，且相關知識產(chǎn)權糾紛較少。此外還具有抗菌抗炎等多種藥理作用。本文以化合物4i[7-氯-N-（2,6-二氯苯基）苯并[d]噻唑-2-胺]為先導化合物，EGFR為靶點，設計合成了一系列2-氨基-苯并噻唑衍生

2、物，并測試了所有目標化合物對野生型 EGFR高表達的細胞與突變型 EGFR高表達的細胞的抑制活性，根據(jù)初篩結(jié)果進一步探究驗證目標化合物的抗腫瘤活性。根據(jù)實驗結(jié)果，探究構效關系，為了進一步尋找臨床上治療非小細胞肺癌的有效低毒小分子抑制劑奠定基礎。
　　方法：⑴以2-氨基-苯并噻唑為原料，以威廉姆遜合成法，胺的鹵代反應及?；磻群铣闪?0個2-氨基-苯并噻唑衍生物，通過 ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR、UV、IR等進行了

3、結(jié)構確認。⑵采用MTT法，測試了目標化合物在10μM濃度下對beas-2b（肺正常細胞）的影響（即毒性作用），結(jié)果顯示A，B， C類對beas-2b(肺正常細胞）基本無毒性作用。進一步地，對所有化合物進行抗腫瘤初篩，涉及的細胞種類包括A431，A549, H1975, HCC827, H1650；并在10μM，1μM，0.5μM，0.1μM，0.01μM濃度下，測試已篩選出的化合物的IC50值。⑶采用流式細胞分析法，檢測化合物對A431

4、, A549兩種細胞的促凋亡和周期阻滯作用，采用細胞遷移實驗測試了化合物B7對腫瘤細胞的侵襲阻滯作用。⑷在1μM，5μM，10μM下，利用Western Blot法檢測化合物B7對EGFR相關通路蛋白EGFR/p-EGFR，ERK/p-ERK，AKT/p-AKT表達的影響。⑸用分子對接方法模擬活性最優(yōu)化合物B7與 EGFR的結(jié)合模型，觀察其結(jié)合模式；⑹采用ELISA法對所有化合物進行抗炎初篩，涉及指標為IL-6，TNF-α。
　　

5、結(jié)果：①共合成40個苯并噻唑類衍生物，其中未見報道化合物有25個，所有化合物均通過ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR、UV，IR等進行結(jié)構確認。②MTT結(jié)果顯示，目標化合物對正常細胞均無毒性，對所測試的腫瘤細胞中A431, A549均顯示出抑制活性，以B1, B3, B7, B10,C1, C2較好，B7最為突出；對H1975, HCC827,H1650幾乎無作用。流式結(jié)果顯示，在10、20μM時, B7對細胞的促凋亡作用和先導

6、化合物相當，且B7對A549和A431有明顯的周期阻滯作用。劃痕實驗顯示，B7在0.01μM時對A549和A431具有明顯的抑制作用，且可持續(xù)至48h。而Western Blot結(jié)果顯示，B7在10μM時對EGFR/p-EGFR，ERK/p-ERK， AKT/p-AKT的表達抑制最明顯，甚至優(yōu)于先導。其分子對接結(jié)果顯示，B7上的硝基與野生EGFR結(jié)合口袋三個氨基酸LYS-745，ASP-855，PHE-723均有結(jié)合作用。③ELISA結(jié)

7、果顯示，對于IL-6, TNF-α兩種因子A1，A2，B2，B11具有較好的抗炎活性，均達到了50％以上，其中以B11最佳，達到了80%以上。
　　結(jié)論：根據(jù)初步抗炎抗腫瘤活性研究以及藥效分析，在對野生型EGFR高表達的細胞與突變型EGFR高表達的細胞的抑制活性中，所有合成的化合物中 B類化合物抑制效果最為顯著，但均對突變型細胞的抑制活性不明顯。對A431與A549的活性以B7最為突出，毒性也小，其相對于先導化合物來說具有一定的選