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文檔簡介
1、蛋白A親和介質純化抗體是目前最為常用的抗體純化制備手段之一,具有純度高、回收率高等優(yōu)點,但是其保存要求和制備成本也較高且實際的結合效能不高。改造蛋白A的結構,提高抗體結合的效能,是降低抗體純化成本的重要途徑。
現(xiàn)有的重組蛋白A和天然蛋白A實際結合抗體的摩爾數(shù)低于所含抗體結合結構域的數(shù)目,未發(fā)揮出理論結合量,理論分析可能是因為蛋白A原始結構域連接區(qū)很短,結構域結合抗體后體積增大,空間位阻限制了全部結構域同時結合抗體。如果加長結構
2、域連接區(qū)并提高彈性,就能夠減少空間位阻效應,提高結構域同時結合抗體的能力,從而提高蛋白A親和介質的載量??贵w分子在自然中進化出了能夠結合各種大小的抗原的能力。分子模擬發(fā)現(xiàn)Fab和Fc結構域間連接區(qū),即鉸鏈區(qū)較長,富含脯氨酸,其結構更具靈活性,用抗體中的鉸鏈連接蛋白A的結構域理論上能夠起到減少空間位阻從而增加抗體結合效能的作用。
本論文設計了用抗體鉸鏈區(qū)連接蛋白A抗體結合結構域的6種變體蛋白A,利用分子克隆的方法,構建了6個重組
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