在線蛋白二維液相色譜儀的構建及應用.pdf

1、通過對高效液相色譜儀的改進，構建了新型的在線蛋白二維液相色譜分離裝置。經過對該裝置的調試和加工，組裝成適合蛋白質組學研究的多功能多維自動化液相色譜儀器，也是一個可與任何液相色譜儀相匹配的獨立的輔助設備，并將其命名為“色譜專家”，在此基礎上，初步實現了該儀器裝置的在線蛋白單柱二維液相色譜功能。 第一章為文獻綜述：詳細介紹了二維及其多維液相色譜法及其儀器的發(fā)展狀況，分析了目前報道的二維及其多維液相色譜儀器裝置的優(yōu)缺點，提出了改進儀器

2、裝置的設想和方案，對自動化的二維及其多維色譜儀器裝置做了簡要的總結。 第二章為實驗方法，包括本論文所涉及的所有實驗所需的各種儀器和試劑，以及各類酶的活性測定方法、SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳方法及其蛋白含量測定方法。 第三章首次構建了一種在線單柱蛋白二維液相色譜分離裝置并命名“色譜專家”?！吧V專家”具有收集一維餾分并在線進樣到二維中去，在線緩沖溶液交換，收集餾分可以低溫4℃保存而且可以高溫水浴加熱的功能。同時以單柱二維液

3、相色譜法為例對該儀器裝置的運行原理做了深入的探討。利用具有疏水功能機理的弱陽離子交換柱在該儀器上成功實現了對多種標準蛋白的單柱二維液相分離，最后對標準蛋白在該儀器上單柱二維液相分離的質量回收率和活性回收率進行了測試，獲得了較好的結果。 第四章利用構建的在線蛋白二維液相色譜分離裝置，以商品的WCX—HIC雙機理柱，分別對牛胰腺中的胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶進行2D—LC-1C分離純化，經過SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳和薄層掃描測定，均獲