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文檔簡介
1、本論文對乙偶姻在細菌體內的分解代謝相關的未知蛋白AcoX進行了NCBI序列比對,對其性質及功能進行了預測,并以Pseudomonas putida KT2440的基因組為模板,克隆表達了acoX基因,并對純化后的AcoX進行了圓二色譜分析。
NCBI中將AcoX注釋為NADK,NADK家族的氨基酸序列上有兩段高度保守的序列:GGDG模序和Gly-rich模序。但通過對九個物種的典型的AcoX氨基酸序列比對發(fā)現,它僅有保守的
2、GGDG模序以及自己獨特的保守序列,而沒有Gly-rich模序。因此認為AcoX不是NADK,并進一步用實驗進行了證明。
以P.putida KT2440的基因組為模板,根據其acoX序列設計引物,克隆表達acoX基因,并用鎳螯合親和層析法對AcoX進行了純化,得到的純化蛋白用圓二色譜對其二級結構進行分析,分析結果表明,AcoX為α螺旋和β折疊混合型。
本論文還以Bacillus subtilis168的基因
3、組為模板,根據其acoA序列設計引物,進行PCR擴增,克隆表達了acoA基因,并對其進行純化,用純化后的蛋白進行了E1的酶活驗證,實驗沒有檢測到酶活,暗示了E1是由E1α亞基和E1β亞基共同編碼的,β亞基對E1的正確折疊起到不可替代的作用。
另外,本論文還以葡萄糖為底物,用氣相色譜檢測產物,實驗表明,在葡萄糖發(fā)酵過程中,首先產生乙偶姻,然后會有少量的2,3-丁二醇產生,但在較短的時間內,2,3-丁二醇產生后又首先被耗盡,實
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