簡介：目的丙型肝炎病毒HEPATITISCVIRUSHCV感染是一個(gè)全球性健康問題迄今全球約有1720億HCV感染者目前仍無有效的防治方法。因此開發(fā)有效的預(yù)防和治療性HCV疫苗就成了一個(gè)亟待解決的問題。E2蛋白是HCV最重要的中和靶抗原可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生HCV的中和抗體但因其能與人CD81分子結(jié)合使B細(xì)胞激活的正常信號傳導(dǎo)通路發(fā)生變化導(dǎo)致B淋巴細(xì)胞的異常激活和增殖紊亂從而產(chǎn)生免疫抑制作用而可能不適合用作疫苗的靶抗原?，F(xiàn)已證明HCVE2蛋白中與CD81分子結(jié)合的位點(diǎn)包括E2蛋白的481491及544551位氨基酸殘基對這兩個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行突變使之不再結(jié)合人CD81分子而仍然保持其天然構(gòu)型和中和表位。故這種結(jié)構(gòu)優(yōu)化的HCVE2蛋白有望成為丙肝疫苗的有效靶抗原。腺病毒以其廣泛的宿主范圍、極高的轉(zhuǎn)染效率、高水平表達(dá)外源基因且誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生針對目的蛋白的免疫應(yīng)答、上調(diào)抗原提呈細(xì)胞協(xié)同刺激因子的表達(dá)、無插入突變性等優(yōu)點(diǎn)成為極具應(yīng)用前景的基因轉(zhuǎn)移載體。因此本實(shí)驗(yàn)利用ADEASY腺病毒載體系統(tǒng)構(gòu)建、包裝重組腺病毒RADE2、RAD△E2RECOMBINANTADENOVIRUSE2、RECOMBINANTADENOVIRUS△E2并且對RADE2誘導(dǎo)的特異性免疫應(yīng)答進(jìn)行了研究為丙型肝炎疫苗的研制探索新的途徑。方法1目的基因的擴(kuò)增與鑒定以PEGFPDHCVE1E2為模板擴(kuò)增E2目的基因。將擴(kuò)增產(chǎn)物與PGEMT載體連接轉(zhuǎn)化感受態(tài)菌ECOLIDH5Α提取質(zhì)粒進(jìn)行PCR、酶切鑒定及測序篩選重組子。2真核表達(dá)質(zhì)粒PCDNA30E2的構(gòu)建將鑒定正確的質(zhì)粒PGEMTE2用適當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切酶酶切膠回收目的片段并與經(jīng)相同酶切的PCDNA30質(zhì)粒載體連接。經(jīng)轉(zhuǎn)化、篩選、PCR和酶切鑒定構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒PCDNA30E2。3突變質(zhì)粒PCDNA30△E2的構(gòu)建分別在HCV481491及544551位氨基酸殘基序列中隨機(jī)選擇預(yù)突變位點(diǎn)486AA的半胱氨酸預(yù)突變?yōu)楸奖彼?44、545AA的脯氨酸分別預(yù)突變?yōu)榱涟彼?、丙氨酸各設(shè)計(jì)一對突變引物然后分別以PCDNA30E2為模板進(jìn)行一步法PCR介導(dǎo)的突變反應(yīng)得到兩種獨(dú)立含有各自突變位點(diǎn)的突變質(zhì)粒PCDNA30△E2①、PCDNA30△E2②然后再用下段序列的突變引物以PCDNA30△E2①為模板再次進(jìn)行PCR突變反應(yīng)得到上下段序列同時(shí)含有突變位點(diǎn)的質(zhì)粒PCDNA30△E2③。4重組穿梭質(zhì)粒的構(gòu)建將PGEMTE2、PCDNA30△E2用恰當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切酶雙酶切回收純化目的片段并與經(jīng)同樣酶切的腺病毒穿梭質(zhì)粒PADTRACKCMV連接經(jīng)轉(zhuǎn)化、篩選、PCR和酶切鑒定構(gòu)建重組穿梭質(zhì)粒PADTRACKCMVE2、PADTRACKCMV△E2。5重組腺病毒質(zhì)粒的構(gòu)建將重組穿梭質(zhì)粒PADTRACKCMVE2、PADTRACKCMV△E2分別用內(nèi)切酶PMEⅠ線性化利用ADEASY系統(tǒng)經(jīng)兩步法在大腸桿菌BJ5183中與骨架載體PADEASY1同源重組構(gòu)建重組腺病毒質(zhì)粒PADE2、PAD△E2。用PACⅠ酶切鑒定將陽性質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)ECOLIDH5Α挑取陽性克隆以堿裂解法大量提取重組質(zhì)粒并用聚乙二醇POLYETHYLENEGLYCOLPEG沉淀法進(jìn)行純化。6重組腺病毒的包裝與擴(kuò)增將重組腺病毒質(zhì)粒PADE2、PAD△E2分別用內(nèi)切酶PACⅠ線性化以陽離子脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞并觀察綠色熒光蛋白GREENFLUESCENTPROTEINGFP的表達(dá)。凍融法收集初代病毒液。取初代病毒液感染293細(xì)胞進(jìn)行第二輪擴(kuò)增同法進(jìn)行第三、四輪大量擴(kuò)增大量收集第四代病毒液用腺病毒純化試劑盒進(jìn)行純化。7重組腺病毒滴度測定待293細(xì)胞在96孔板中生長至7080％匯合時(shí)以不同稀釋倍數(shù)的各代病毒液感染細(xì)胞培養(yǎng)48H后以GFP陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)法測定病毒滴度病毒滴度熒光細(xì)胞數(shù)病毒液的稀釋倍數(shù)病毒液量。8用PCR、RTPCR分別對重組腺病毒進(jìn)行鑒定同時(shí)用第三代重組腺病毒RADE2感染293細(xì)胞2448H后收集細(xì)胞WESTERNBLOT法檢測HCVE2的表達(dá)。9同法擴(kuò)增并純化本室前期構(gòu)建的AD并測定病毒滴度。10用堿裂解法從轉(zhuǎn)化的DH5Α大腸桿菌中提取質(zhì)粒PCDNA3E2用聚乙二醇沉淀法進(jìn)行純化。11動(dòng)物實(shí)驗(yàn)將68周齡雄性BALBC小鼠隨機(jī)分為4組分別為RADE2實(shí)驗(yàn)組、PCDNA30E2陽性對照組、AD陰性對照組和PBS空白對照組。疫苗采用股四頭肌注射其中RADE2組和AD組每間隔2周免疫一次共免疫兩次PCDNA30E2組和PBS組每間隔3周免疫一次共免疫3次。末次免疫后3周每組3只小鼠取脾臟制備淋巴細(xì)胞懸液用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒CELLCOUNTINGKIT8CCK8進(jìn)行淋巴細(xì)胞增殖活性和特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞CYTOTOXICTLYMPHOCYTECTL殺傷活性的檢測。結(jié)果1成功構(gòu)建了質(zhì)粒PGEMTE2限制性酶切鑒定及測序結(jié)果與預(yù)期值相符。2成功構(gòu)建了真核表達(dá)質(zhì)粒PCDNA30E2及三種突變質(zhì)粒PCDNA30△E2其中PCDNA30△E2①包含的預(yù)突變位點(diǎn)486AA的半胱氨酸預(yù)突變?yōu)楸奖彼嵛挥贖CV481491AA序列中PCDNA30△E2②包含的預(yù)突變位點(diǎn)544及545AA的脯氨酸分別預(yù)突變?yōu)榱涟彼?、丙氨酸位于HCV544551AA序列中PCDNA30△E2③同時(shí)包含上述兩段序列中的突變位點(diǎn)。3成功構(gòu)建重組穿梭質(zhì)粒PADTRACKCMVE2、PADTRACKCMV△E2PCR鑒定及限制酶切分析證明符合預(yù)期設(shè)計(jì)。4成功構(gòu)建重組腺病毒質(zhì)粒PADE2、PAD△E2用PACⅠ酶切均得到約30KB的大片段和一個(gè)45KB的小片段。5成功包裝并擴(kuò)增純化重組腺病毒RADE2、RAD△E2。6重組腺病毒RADE2、RAD△E2①③初代至第四代病毒滴度分別為22104PFUML、40107PFUML、10108PFUML、75108PFUML25104PFUML、10107PFUML、265108PFUML、60108PFUML30104PFUML、41107PFUML、37108PFUML、95108PFUML18104PFUML、40106PFUML、67107PFUML、39108PFUML。7PCR對重組腺病毒RADE2、RAD△E2病毒液鑒定RTPCR對第三代重組腺病毒RADE2、RAD△E2感染的293細(xì)胞鑒定1％瓊脂糖凝膠電泳均檢測到特異性目的條帶三代RADE2病毒液感染293細(xì)胞2448H后提取細(xì)胞總蛋白WESTERNBLOT檢測到細(xì)胞中有E2蛋白的表達(dá)。8小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)分別以滅活的重組腺病毒RADE2病毒液和刀豆蛋白ACONCANAVALINACONA體外刺激淋巴細(xì)胞檢測細(xì)胞增殖活性。其中陽性對照CONA刺激時(shí)各組均檢測到淋巴細(xì)胞非特異性增殖以RADE2病毒液刺激時(shí)各組未見到顯著的特異性淋巴細(xì)胞增殖。9小鼠脾臟特異性CTL殺傷活性經(jīng)單因素方差分析表明以重組腺病毒感染的SP20作為靶細(xì)胞時(shí)ADE2組、AD組及PCDNA30E2組均與PBS組有差別ADE2組、AD組與PCDNA30E2組也有差別P＜005但是ADE2組、AD組兩組無差別以PCDNA30E2轉(zhuǎn)染SP20作為靶細(xì)胞時(shí)各組間均無差別P＞005。結(jié)論本研究利用ADEASY腺病毒載體系統(tǒng)構(gòu)建、包裝重組腺病毒RADE2、RAD△E2為丙型肝炎疫苗的研制奠定了基礎(chǔ)。

簡介：目的本研究采集正常產(chǎn)婦抗凝臍帶血樣本進(jìn)行人巨細(xì)胞病毒HUMANCYTOMEGALOVIRUSHCMV分離和鑒定分析探討合肥地區(qū)HCMV先天性感染的分子流行病學(xué)特征和病毒糖蛋白B基因型別。為進(jìn)一步研究其致病性、免疫性以及研制HCMV亞單位疫苗提供依據(jù)。方法從臨床采集正常順產(chǎn)婦年齡在1938歲的臍帶血樣本160例按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分別作如下處理1HCMV先天性感染的實(shí)驗(yàn)室檢測HCMV病毒分離將樣本接種至人胚成纖維細(xì)胞HF上觀察CPECYTOPATHICEFFECTCPE對分離得到的病毒株應(yīng)用間接免疫熒光法INDIRECTIMMUNOFLUESCENCEASSAYIFA鑒定后體外培養(yǎng)病毒并提取DNA采用PCR檢測HCMVIE和UL83基因。同時(shí)應(yīng)用PP65抗原血癥的方法直接檢測臍帶血白細(xì)胞樣本中HCMVPP65抗原。記錄分析結(jié)果確定合肥地區(qū)新生兒HCMV先天性感染率。2HCMV先天性感染臨床分離株的基因型分析通過限制性片段長度多態(tài)性分析RFLP對RSAI和HINFI酶切位點(diǎn)的突變情況進(jìn)行分析對PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化后測序并且使用MEGA40軟件用鄰接法NEIGHBJOINING構(gòu)建進(jìn)化樹。3建立隨訪檔案HCMV先天性感染臨床資料的收集與分析對HCMV先天性感染的新生兒建立隨訪檔案對其進(jìn)行回顧性調(diào)查以及遠(yuǎn)期臨床追蹤調(diào)查特別是基因變異較大的新生兒應(yīng)該作為首選隨訪對象。結(jié)果1HCMV先天性感染的實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果從臨床采集的160份樣本中經(jīng)病毒分離鑒定后得到陽性樣本40份病毒分離陽性率為250％PP65抗原血癥的方法得到陽性樣本39份陽性率為244。分析結(jié)果后確定合肥地區(qū)HCMV先天性感染率約為250。2HCMV先天性感染臨床分離株的基因型分析應(yīng)用RFLP分析結(jié)果顯示40例陽性標(biāo)本均為GB2型未見其他型別。同時(shí)發(fā)現(xiàn)該基因型已有變異其中HEFEI01HEFEI03和HEFEI21標(biāo)本分別有24795個(gè)28個(gè)927和30個(gè)突變位點(diǎn)993。MEGA40軟件繪制的系統(tǒng)發(fā)育樹顯示所有的臨床樣本與HCMVAD169株在同一個(gè)側(cè)枝上但是HEFEI01HEFEI03和HEFEI21三株臨床樣本變異很大與HCMVGB2型的進(jìn)化距離較遠(yuǎn)。3建立隨訪檔案HCMV先天性感染臨床資料的收集與分析HEFEI21分離株的新生兒出生時(shí)出現(xiàn)早產(chǎn)胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩出生時(shí)低體質(zhì)量出生時(shí)體重僅22千克符合宮內(nèi)發(fā)育遲緩的診斷標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)論1對160例正常順產(chǎn)婦所娩新生兒的抗凝臍帶血進(jìn)行HCMV較系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室檢測和鑒定初步確定合肥地區(qū)正常順產(chǎn)婦所娩新生兒HCMV先天性感染率的基線數(shù)據(jù)約為2502對于鑒定為HCMV先天性感染的樣本分別命名為HEFEI01HEFEI40。HCMV先天性感染的GB基因序列比對及進(jìn)化樹分析表明合肥地區(qū)正常順產(chǎn)婦所娩新生兒HCMV先天性感染的基因型別均為GB2型未見其他型別。3同時(shí)發(fā)現(xiàn)HEFEI01HEFEI03和HEFEI21三例臨床標(biāo)本分離病毒株基因變異很大變異最大的HEFEI21分離株的新生兒出生時(shí)體重僅22千克。4今后開展臨床隨訪調(diào)查時(shí)應(yīng)該將基因變異較大的新生兒作為首選的隨訪對象。

簡介：中國圖書資料分類法分類號單位代碼10660R73735學(xué)號S080334貴陽醫(yī)學(xué)院貴陽醫(yī)學(xué)院2011屆臨床醫(yī)學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位材料臨床醫(yī)學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位材料臨床論文部分臨床論文部分人乳頭狀瘤病毒人乳頭狀瘤病毒在外陰惡性腫瘤中在外陰惡性腫瘤中感染感染情況的情況的研究研究研究生朱向陽導(dǎo)師楊英捷教授年級2008級專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)2011年05月29日貴陽醫(yī)學(xué)院2011屆碩士研究生畢業(yè)論文0目錄摘要??????????????????????1前言??????????????????????2材料與方法????????????????????3結(jié)果??????????????????????7討論??????????????????????11參考文獻(xiàn)?????????????????????13英文摘要?????????????????????16致謝??????????????????????17略縮詞表?????????????????????18論文原創(chuàng)性聲明??????????????????19綜述??????????????????????20附臨床能力考核有關(guān)材料臨床輪轉(zhuǎn)考核表按時(shí)間順序?qū)W術(shù)活動(dòng)情況表按時(shí)間順序臨床能力考試及學(xué)位答辯情況表

簡介：既往乙肝病毒感染的彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者利妥昔單抗聯(lián)合化療乙肝病毒再激活及臨床分析⑧論文作者簽名竭盛指導(dǎo)教師簽名金盜論文評閱人1亟堂進(jìn)圭堡醫(yī)垣楦趔吏紅主金醫(yī)瞳評閱人2童自匿主堡醫(yī)亟逝選太堂醫(yī)堂院隨屆筮二醫(yī)院評閱人3佟紅墊圭廷醫(yī)垣逝塹太堂醫(yī)堂院附屬箍二醫(yī)院評閱人4評閱人5答辯委員會主席毖瞳紅塾攮逝江太堂匡堂醫(yī)隨屬箍三醫(yī)院委員1邁丞民塾攮逝塹太堂匡堂院隨屬』L童醫(yī)醫(yī)委員2筮苤夔塾援逝迤太堂醫(yī)堂陵隨屬箍三醫(yī)醫(yī)委員3直遄蘭塾援逝江省史醫(yī)暄委員4重漁蓬塾援逝塹太堂醫(yī)堂暄隨屬筮二醫(yī)院委員5浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文致謝致謝三年前，初次接觸血液科，為這個(gè)科室濃厚的學(xué)術(shù)氛圍和主任的淵厚知識所吸引，決然選擇了血液科作為自己的人生目標(biāo)。在這里，我認(rèn)識了很多新朋友，度過了人生中很重要的一段時(shí)期。在這三年里，我慢慢了解了自身的優(yōu)缺點(diǎn)，了解了自己想要的是什么，如何去應(yīng)對困難，一點(diǎn)點(diǎn)走向成熟。感謝很多人陪伴我一起走過這三年。首先要感謝我的導(dǎo)師金潔教授，您跟病人耐心、細(xì)致而富于人文關(guān)懷的溝通、嚴(yán)謹(jǐn)而清晰的臨床思維、一絲不茍的敬業(yè)態(tài)度、不斷學(xué)習(xí)的熱情是我學(xué)J的榜樣。感謝您對我臨床和論文上付出的心血和汗水。希望您身體健康，工作順利感謝浙醫(yī)一院血液科錢文斌教授、孟海濤主任、麥文淵主任、佟紅艷主任、黃健老師、俞文娟老師、婁引軍老師、徐偉來老師、李穎老師、王敬瀚老師等醫(yī)護(hù)人員在臨床學(xué)習(xí)及論文寫作中予的支持和幫助感謝一起共同奮斗的陳菲菲博士、陳健博士、路莎莎博士、陰秀峰博士、胡超博士、余夢霞博士、朱志娟碩士、金晶碩士、李晨瑩碩士等在論文寫作中對我的無私幫助和支持感謝輪轉(zhuǎn)過的各個(gè)大內(nèi)科的老師、師兄師姐對我臨床工作的指點(diǎn)，在這些科室，我度過了充實(shí)而愉快的研究生輪轉(zhuǎn)生活感謝答辯委員會和參加論文評閱的專家老師們?yōu)檎撐乃鞯闹笇?dǎo)和幫助，你們的肯定幫助我順利畢業(yè)最后，感謝我的父母、我的親人對我學(xué)業(yè)給予的無限支持

簡介：A型流感病毒是一類重要的、具有高度傳染性的病原體。它引發(fā)了每一年的季節(jié)性流感，造成了1918年、1957年、1968年和2009年的流感大爆發(fā)。此外，有些H5N1流感病毒株具有跨種族傳播和可能引起類似1918年大規(guī)模流感的能力，加大了潛在的危險(xiǎn)性。A型流感病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS1A是一個(gè)關(guān)鍵的毒力因子，在病毒繁殖周期中起著至關(guān)重要的作用。它通過拮抗干擾素ΑΒ調(diào)節(jié)宿主細(xì)胞抗病毒狀態(tài)，利用細(xì)胞的機(jī)制進(jìn)行自身RNA加工、蛋白合成和顆粒的形成，以及抑制宿主的免疫機(jī)制和凋亡反應(yīng)等發(fā)揮作用。NS1A通常分為兩個(gè)結(jié)構(gòu)域，一個(gè)是RNA結(jié)合區(qū)RBD，另一個(gè)是受體蛋白結(jié)合區(qū)ED。ED和許多宿主因子有相互作用，而RBD的主要作用是結(jié)合病毒的DSRNA，同時(shí)也能結(jié)合其它因子。RBD、ED以及它們各自的復(fù)合物晶體已經(jīng)得到解析，但是由于缺乏全長結(jié)構(gòu)的信息使得RBD和ED之間的關(guān)系仍然無法確定。先前解析得到的全長結(jié)構(gòu)只能用于詳細(xì)說明DSRNA的隔離，但也留下許多未曾解決的問題，如RBD和ED之間的關(guān)系、RBD結(jié)合DSRNA的本質(zhì)和后果。這些問題只能通過解析有生物學(xué)功能的全長結(jié)構(gòu)來回答。我們解析了野生型和3個(gè)根據(jù)生理功能進(jìn)行突變的APR834H1N1NS1A全長結(jié)構(gòu)。它首次描述了RBD和ED之間存在的功能關(guān)系。結(jié)合結(jié)晶學(xué)、生化分析和熒光光譜學(xué)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，我們闡明了NS1A在溶液中的構(gòu)象，同時(shí)也展示了相應(yīng)的生物學(xué)功能。

簡介：蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文注意缺陷多動(dòng)障礙患兒漢字認(rèn)知事件相關(guān)電位的研究姓名謝娜申請學(xué)位級別碩士專業(yè)神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師董選20090401注意缺陷多動(dòng)障礙患兒漢字認(rèn)知的事件相關(guān)電位研究中文摘要結(jié)論一、N2波幅與漢字語義啟動(dòng)的難度成正相關(guān)，ADHD兒童完成相同的語義啟動(dòng)任務(wù)需比正常兒童投入更多的心理資源，本研究漢字相關(guān)N2和不相關(guān)P3波幅可成為監(jiān)測ADHD認(rèn)知水平的量化指標(biāo)，并能對ADHD的診斷及療效的評估提供一定的幫助；二、腦電生物反饋治療后漢字認(rèn)知ERP表現(xiàn)為相關(guān)N2波幅降低，不相關(guān)P3潛伏期縮短，研究提示腦電生物反饋能改善ADHD的注意缺陷能力，提高ADHD工作記憶能力及漢字認(rèn)知速度，降低患兒漢字認(rèn)識難度。關(guān)鍵詞注意缺陷多動(dòng)障礙ADHD語義啟動(dòng)事件相關(guān)電位EI心腦電生物反饋治療視聽整合持續(xù)操作測試IVACPTIL作者謝娜指導(dǎo)老師董選

簡介：該實(shí)驗(yàn)選用HCMV特異性抗原替代活病毒以自體樹突細(xì)胞DC作為抗原呈遞細(xì)胞與淋巴細(xì)胞在體外共同培養(yǎng)來誘導(dǎo)病毒特異性T細(xì)胞的活化和增殖因?yàn)槲闯墒斓腄C可以攝取抗原分化成熟并通過MHCⅠ類和MHCⅡ類途徑向淋巴細(xì)胞呈遞抗原誘導(dǎo)其活化DC作為抗原呈遞細(xì)胞需要抗原的存在而當(dāng)前HCMV抗原多來自病毒感染的細(xì)胞培養(yǎng)或人工合成的多肽工作量較大而且得率很低因此我們選用生物工程的方法即用含HCMVPP65基因的載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌在菌體內(nèi)合成即65抗原該實(shí)驗(yàn)分為兩個(gè)部分主要內(nèi)容和結(jié)果如下1HCMV特異性T細(xì)胞的體外誘導(dǎo)與增殖2HCMVPP65蛋白的表達(dá)

簡介：點(diǎn)擊查看更多糖皮質(zhì)激素對流感病毒感染小鼠嗅覺障礙干預(yù)作用研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：人類乙型肝炎病毒屬嗜肝DNA病毒科至少有4種亞型AYW、ADR、AYR和ADW其中ADR亞型是中國人的主要流行株其基因組DNA已被克隆全長32KBP與其他3種亞型在DNA水平和蛋白水平具有一定差異目前對中蛋白在乙型肝炎病毒生活周期中的功能及與其它乙型肝炎病毒蛋白間的相互作用尚不清楚轉(zhuǎn)基因技術(shù)是研究基因功能的理想方法建立表達(dá)中蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠將為中蛋白功能的研究提供理想的動(dòng)物模型該研究采用已經(jīng)構(gòu)建了的含有CMV啟動(dòng)子和PRES2S基因ADR亞型開放閱讀框的PRES2S基因表達(dá)載體PCDNA3S2S酶切鑒定證實(shí)載體構(gòu)建成功DNA測序證實(shí)插入的PRES2S基因序列與報(bào)道的序列一致上述結(jié)果表明目的基因不但可以在轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)穩(wěn)定地遺傳而且可以在轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)表達(dá)目的蛋白該品系轉(zhuǎn)基因小鼠的建立為研究乙型肝炎病毒中蛋白的功能及基于中蛋白的治療性DNA疫苗提供了一個(gè)候選的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?

簡介：第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文攜帶干擾素一13基因的腺病毒治療結(jié)肝轉(zhuǎn)移小鼠模型的實(shí)驗(yàn)研究腸癌THETHERAPEUTICEFFECTOFADENOVIRUSEXPRESSINGINTERFERONPONCOLONCANCERHEPATICMETASTASESINMICE姓名導(dǎo)師專業(yè)名稱申請學(xué)位培養(yǎng)單位鄭濤楊甲梅教授外科學(xué)I臨床醫(yī)學(xué)碩士學(xué)位第二軍醫(yī)大學(xué)東方肝膽外科醫(yī)院第二軍醫(yī)大學(xué)東方肝膽外科醫(yī)院二。一二年五月獨(dú)創(chuàng)性聲明ILLLLLFLLJ／JLLLIILLLUIJIJLLFLRLFLURLFJPFJJY2111141本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。學(xué)位論文作者簽名琦確日期易垃年∥月午日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)聲明本人完全了解第二軍醫(yī)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，第二軍醫(yī)大學(xué)有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版。允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)第二軍醫(yī)大學(xué)可以將學(xué)位論文全文或部分內(nèi)容編入中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫、中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫等數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索?？梢圆捎糜坝　⒖s印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書翩虢彤鬈B物，1年G旯貝蓀1＼日4／名、、，躲辦者年儲諺文乙敝么位期學(xué)日

簡介：點(diǎn)擊查看更多呼吸道合胞病毒致大鼠腎病彈性蛋白酶基因表達(dá)與蛋白尿相關(guān)性研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：南華大學(xué)南華大學(xué)2012屆碩士學(xué)位論文屆碩士學(xué)位論文H2S對甲醛損傷大鼠學(xué)習(xí)記憶和認(rèn)對甲醛損傷大鼠學(xué)習(xí)記憶和認(rèn)知功能的改善作用及其機(jī)制知功能的改善作用及其機(jī)制學(xué)位申請人莊元元導(dǎo)師及職稱唐小卿副教授專業(yè)名稱生理學(xué)論文評閱人論文評閱人姜志勝（教授、博導(dǎo)，南華大學(xué)）袁中華（教授、碩導(dǎo)，南華大學(xué)）答辯委員會答辯委員會答辯主席胡弼（教授、碩導(dǎo)，南華大學(xué)）答辯委員唐朝克（教授、博導(dǎo)，南華大學(xué)）謝明（教授、碩導(dǎo)，南華大學(xué)）陳臨溪（教授、碩導(dǎo)，南華大學(xué)）田紹文（副教授、碩導(dǎo)，南華大學(xué)）本工作承蒙本工作承蒙國家自然科學(xué)基金國家自然科學(xué)基金81071005國家自然科學(xué)基金國家自然科學(xué)基金30770740資助

簡介：基因轉(zhuǎn)錄水平上的調(diào)控對基因的表達(dá)至關(guān)重要，甚至對機(jī)體的發(fā)育也起到極大的作用?；虮磉_(dá)的調(diào)控過程主要發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平上，轉(zhuǎn)錄因子通過其特定的結(jié)構(gòu)域與染色體或其他蛋白質(zhì)相結(jié)合，起到對基因轉(zhuǎn)錄的促進(jìn)或阻礙作用。鋅指蛋白是一類具有手指狀結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄因子，在基因表達(dá)調(diào)控、細(xì)胞分化、胚胎發(fā)育、增強(qiáng)植物抗逆性等方面具有重要的作用。鋅指蛋白ZBTB20由741個(gè)編碼氨基酸組成，N端含有POZ結(jié)構(gòu)域（通常介導(dǎo)蛋白間的相互作用），C端含有5個(gè)C2H2鋅指結(jié)構(gòu)域（通常介導(dǎo)DNA的結(jié)合），與已知的POZ鋅指蛋白BCL6和PLZF有3040％的同源性1。利用ZBTB20基因特異性敲除小鼠模型，本實(shí)驗(yàn)室揭示了ZBTB20基因在個(gè)體發(fā)育、物質(zhì)代謝和神經(jīng)調(diào)控等方面有重要的生理功能26。盡管如此，關(guān)于ZBTB20的生物學(xué)功能、其調(diào)控的下游靶基因以及介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路仍有許多未明之處。重組腺病毒是非整合型雙鏈DNA病毒，因而無插入突變，無致癌性，它具有感染分裂期和非分裂期細(xì)胞的能力，且易于構(gòu)建、濃縮和純化，出毒率較高。我們前期的研究提示ZBTB20在肝臟物質(zhì)代謝、肝癌的發(fā)展中具有重要作用，因此具有肝臟靶向性的腺病毒表達(dá)載體無疑是我們進(jìn)一步研究ZBTB20在肝臟的生物學(xué)功能及其作用機(jī)制的首選工具，于是我們構(gòu)建了ZBTB20的過表達(dá)腺病毒和干擾腺病毒兩種重組腺病毒，以便從正反兩方面進(jìn)行ZBTB20的生理和病理功能的研究。我們將帶有FLAG標(biāo)簽的ZBTB20的CDNA片段（ZBTB20FLAG）克隆至PADTRACKCMV載體，并轉(zhuǎn)化至細(xì)菌內(nèi)，使該重組載體與ADEASY質(zhì)粒進(jìn)行同源重組，從而獲得重組腺病毒載體ADZBTB20。之后轉(zhuǎn)染293細(xì)胞進(jìn)行包裝，并進(jìn)行三輪擴(kuò)增，經(jīng)濃縮純化后檢測病毒滴度。我們利用ZBTB20肝臟特異性敲除小鼠的原代肝細(xì)胞和肝臟組織模型，于離體和在體兩個(gè)水平鑒定所制備的重組腺病毒ADZBTB20介導(dǎo)的ZBTB20RNA和蛋白的表達(dá)情況并利用報(bào)告基因技術(shù)檢測過表達(dá)的ZBTB20蛋白的功能活性。另一方面我們將CMVZBTB20SHRNA片段克隆至PADTRACKCMV載體，同樣將該重組載體與ADEASY質(zhì)粒進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)同源重組，從而獲得重組腺病毒載體ADZBTB20SHRNA。之后轉(zhuǎn)染293細(xì)胞進(jìn)行包裝，并進(jìn)行三輪擴(kuò)增，經(jīng)濃縮純化后檢測病毒滴度。我們采用ZBTB20正常表達(dá)小鼠的原代肝細(xì)胞和肝臟組織模型，于離體和在體兩個(gè)水平鑒定所制備的重組腺病毒ADZBTB20SHRNA對內(nèi)源性ZBTB20RNA和蛋白的干擾效果。最后結(jié)果表明本研究所構(gòu)建的ADZBTB20重組腺病毒可以介導(dǎo)ZBTB20的過表達(dá)并具備轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性，ADZBTB20SHRNA重組腺病毒能干擾ZBTB20的表達(dá)，為今后研究ZBTB20的相關(guān)生物學(xué)功能奠定了基礎(chǔ)。

簡介：第一軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文EB病毒與胃腸道腫瘤相關(guān)性研究姓名劉換新申請學(xué)位級別碩士專業(yè)病理指導(dǎo)教師丁彥青20030531EB病毒與胃腸道腫瘤相關(guān)性研究研究生劉換新導(dǎo)師丁彥青教授中文摘要EPSTEINBARREBV病毒是一種分布廣泛、人群感染率頗高的人類DNA皰疹病毒，幾乎所有25歲以上的成年人都能檢測到EBV抗體。EBV是傳染性單核細(xì)胞增多癥的主要致病因素，在多種人類良性或惡性病變中都能檢測到該病毒的存在，如口腔粘膜白斑，炎性假瘤，BURKITT淋巴瘤，鼻咽癌，胃癌，霍奇金病HODGKIN’SDISEASELID和非霍奇金淋巴瘤以及其他一些器官的淋巴上皮樣腫瘤。大多數(shù)EBV相關(guān)腫瘤陽性率都較低，或僅在某些地域發(fā)生率較高。許多學(xué)者的研究已證實(shí)部分胃癌與EBV相關(guān)，但由于地區(qū)差異和檢測方法的特異性和敏感性不同，EBV相關(guān)胃癌的比例各國報(bào)道有較大差異，美國和德國報(bào)道陽性率為1618％，國內(nèi)報(bào)道為1．6％10．3％；對于食道癌及大腸癌與EBV的相關(guān)性研究，國內(nèi)外亦有報(bào)道，但迄今尚無定論。分子生物學(xué)方法在EB病毒相關(guān)性疾病的診斷和監(jiān)測中作用越來越突出。運(yùn)用原位雜交檢測活檢組織中的EB病毒編碼RNA即EBERS被認(rèn)為是確認(rèn)某一疾病是否與EB病毒相關(guān)的金標(biāo)準(zhǔn)，LMPI免疫組化和PCR方法也被常規(guī)地用于隱性感染的檢測，因此，本課題擬運(yùn)用原位雜交結(jié)合免疫組化和PCR，闡明EB病毒與胃腸道腫瘤的相關(guān)性。我們收集了257例胃腸道腫瘤組織，全部為石蠟包埋塊，包括52例食道癌及癌旁組織28例，75例胃癌及癌旁組織40例，130例大腸腫瘤及正常大腸粘膜組織30例。所有的標(biāo)本都分別進(jìn)行了原位雜交、PCR和免疫組化檢測，然后運(yùn)用SPSSL0．0對檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。研究發(fā)現(xiàn)，75例胃癌中7例原位雜交陽性，占9．3％，另有11例14．7％PCR陽性，4例5．3％免疫組化陽性；癌旁組織PER檢測3例陽性，占7．5％，而原位雜交及免疫組化檢測均為陰性，二者有顯著性差異；食道癌組織中3例5．8％PCR反應(yīng)陽性，癌旁組織2例陽性7．1％；3

簡介：慢性阻塞性肺疾病CHRONICOBSTRUCTIVEPULMONARYDISEASES，COPD是呼吸系統(tǒng)疾病中最常見的疾病之一，由于患病人數(shù)多，死亡率高，COPD目前居全球死亡原因的第4位，在經(jīng)濟(jì)發(fā)展不平衡和人口日趨老齡化的今天，已成為全球眾多發(fā)展中國家重要的人群健康問題。在中國，呼吸疾病COPD為主要組成部分在農(nóng)村位列死因第三位，在城市位列第四位。然而很大一部分COPD患者早期無明顯臨床表現(xiàn)，很多COPD患者在確診時(shí)病情已發(fā)展到中重度，治療效果并不理想。COPD患病人數(shù)多，病死率高及社會經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)重，目前已成為重要的公共衛(wèi)生問題。但目前人們對其認(rèn)識和重視不夠社會各界包括臨床醫(yī)生，尤其是非呼吸科?？漆t(yī)師，對COPD的認(rèn)識和重視不夠是普遍存在的問題，作為COPD診斷和治療的重要依據(jù)的肺功能檢測也不夠普及，在部分省市二級醫(yī)院以上COPD診斷中肺功能檢查的比例僅18％。本課題通過對上海市兩個(gè)區(qū)下轄四個(gè)社區(qū)居民進(jìn)行現(xiàn)場調(diào)查來研究上海市社區(qū)人群COPD患病率以及影響COPD在社區(qū)人群中分布的因素，研究還在上海市部分社區(qū)全科醫(yī)生中開展了有關(guān)COPD知識的問卷調(diào)查，以初步了解社區(qū)醫(yī)生對COPD的認(rèn)知水平。研究分為以下二個(gè)部分。第一部分上海部分地區(qū)社區(qū)人群慢性阻塞性肺疾病COPD的流行病學(xué)調(diào)查目的了解上海部分地區(qū)社區(qū)人群慢性阻塞性肺疾病COPD的患病率及影響COPD在社區(qū)人群中分布的因素，為在社區(qū)人群中開展COPD的預(yù)防和控制提供基礎(chǔ)信息和策略依據(jù)。方法采用針對性抽樣方法，抽取上海市長寧區(qū)和嘉定區(qū)所轄的北新涇社區(qū)、周家橋社區(qū)、程家橋社區(qū)、江橋社區(qū)為研究現(xiàn)場。再以整群抽樣的方法隨機(jī)抽取12個(gè)居委為研究點(diǎn)，以抽到的研究點(diǎn)中所有40歲以上的社區(qū)戶籍居民為研究對象。參考BURDENOFOBSTRUCTIVELUNGDISEASEBOLD問卷自行制定流行病學(xué)調(diào)查問卷，由經(jīng)培訓(xùn)的調(diào)查員對符合本次研究定義的調(diào)查對象進(jìn)行面對面問卷，并做相應(yīng)的體格檢查。再由呼吸科專業(yè)技術(shù)人員對受調(diào)查居民進(jìn)行肺功能檢測，以FEV1FVC＜70％為COPD的診斷依據(jù)，結(jié)合呼吸道病史做出COPD診斷。結(jié)果研究共調(diào)查1252名社區(qū)居民，資料完整且肺功能檢查質(zhì)控合格者1216人，從中獲得確診的COPD患者104人，研究人群總患病率為86％。男性COPD患病率為119％，女性為49％，男性COPD患病率高于女性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義X21908P＜0001。研究發(fā)現(xiàn)，社區(qū)人群COPD患病率分布可能與下列五項(xiàng)因素有關(guān)，分別為吸煙1058，95％CI6791650、家族史4374，95％CI25757430、兒童期呼吸道感染史2104，95％CI10384266、職業(yè)粉塵暴露39123，95％CI9260165292和廚房通風(fēng)狀況差1392，95％CI8382312結(jié)論上海部分地區(qū)COPD患病率86％，男性COPD患病率為119％，女性為49％，男性COPD患病率高于女性。而吸煙、家族史、兒童期呼吸道感染史、職業(yè)粉塵暴露、廚房通風(fēng)狀況差是COPD的危險(xiǎn)因素。第二部分部分社區(qū)全科醫(yī)師對慢性阻塞性肺疾病COPD的認(rèn)知度目的調(diào)查上海部分社區(qū)全科醫(yī)師對慢性阻塞性肺疾病COPD的認(rèn)知水平，了解短期培訓(xùn)對改善社區(qū)醫(yī)生COPD診療知識的效果，為開展COPD相關(guān)知識和臨床診療培訓(xùn)提供依據(jù)。通過短期培訓(xùn)提高全科醫(yī)師對慢性阻塞性肺疾病COPD的認(rèn)識水平。方法對上海市上海市長寧區(qū)和嘉定區(qū)所轄的北新涇、周家橋、程家橋和江橋4個(gè)社區(qū)的全科醫(yī)師開展COPD知識問卷調(diào)查，并在調(diào)查的基礎(chǔ)上進(jìn)行短期培訓(xùn)，進(jìn)而比較培訓(xùn)前、后社區(qū)醫(yī)生有關(guān)COPD知識的改善情況。問卷共包含10個(gè)有關(guān)COPD診療的題目，每題1分，總分10分。結(jié)果1培訓(xùn)前，社區(qū)全科醫(yī)師COPD認(rèn)識水平平均得分410±118及格率為115％。培訓(xùn)后，社區(qū)全科醫(yī)師COPD認(rèn)識水平平均個(gè)人得分790±090及格率為100％。研究顯示年齡、文化程度、從醫(yī)年限、技術(shù)職稱、工作崗位可能影響全科醫(yī)師對慢性阻塞性肺疾病COPD的認(rèn)知2培訓(xùn)前各試題的正確率很低，全科醫(yī)師對各題的正確率都不超過60％，培訓(xùn)后全科醫(yī)師對各題的正確率都超過60％。通過短期培訓(xùn)全科醫(yī)生對慢性阻塞性肺疾病COPD的認(rèn)識水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0001結(jié)論上海的社區(qū)全科醫(yī)師對慢性阻塞性肺疾病COPD的認(rèn)知較低，通過短期培訓(xùn)可以有效提高社區(qū)全科醫(yī)師對COPD的認(rèn)識水平。