簡(jiǎn)介：目的優(yōu)化新型納米非病毒載體PCLPEGCHITOSAN和PEI600CYD在體外與質(zhì)粒的復(fù)合條件。評(píng)價(jià)這兩種非病毒載體對(duì)于骨關(guān)節(jié)相關(guān)細(xì)胞的細(xì)胞毒性。研究其與質(zhì)粒組成的復(fù)合物對(duì)于骨關(guān)節(jié)相關(guān)細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)染效率，并對(duì)此過(guò)程中質(zhì)粒的運(yùn)動(dòng)情況和分布情況進(jìn)行探索。為這些納米非病毒基因輸送體系進(jìn)一步用于骨關(guān)節(jié)疾病的基因治療給予參考。方法1在體外利用凝膠電泳方法確定非病毒載體與質(zhì)粒復(fù)合的最小氮磷比（NP）。2利用動(dòng)態(tài)光散射粒徑測(cè)量?jī)x確定復(fù)合物在不同氮磷比、不同緩沖溶液體系下粒徑的變化情況。3分別從健康雄性SD大鼠的骨髓中分離得到骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCS），膝關(guān)節(jié)中分離得到滑膜細(xì)胞和軟骨細(xì)胞。利用MTT實(shí)驗(yàn)，來(lái)確定非病毒載體PEI600CYD分別對(duì)于這三種細(xì)胞的細(xì)胞毒性。4將帶有綠色熒光蛋白基因的質(zhì)粒（PEGFP）同PCLPEGCHITOSAN和PEI600CYD進(jìn)行復(fù)合后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，然后利用流式細(xì)胞分析技術(shù)定量統(tǒng)計(jì)轉(zhuǎn)染效率。5分別利用量子點(diǎn)和熒光素兩種不同的標(biāo)記方法對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行標(biāo)記，并利用激光共聚焦顯微鏡觀察復(fù)合物轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，質(zhì)粒在細(xì)胞中的分布情況。結(jié)果1凝膠電泳結(jié)果顯示非病毒載體PCLPEGCHITOSAN與PEGFP復(fù)合的最小氮磷比為41，同時(shí)PCLCHITOSAN與PEGFP復(fù)合的最小氮磷比也為41，而CHITOSAN與PEGFP復(fù)合的最小氮磷比則為11。2動(dòng)態(tài)光散射實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示非病毒載體PCLPEGCHITOSAN與PEGFP復(fù)合而成的復(fù)合物的粒徑隨著氮磷比的增大而減小，并且這些復(fù)合物在NAAC緩沖體系和DMEM緩沖體系中，粒徑基本一致，相對(duì)穩(wěn)定。3MTT實(shí)驗(yàn)顯示，非病毒載體PEI600CYD對(duì)于原代軟骨細(xì)胞，原代滑膜細(xì)胞，原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞毒性要明顯小于非病毒載體PEI25KDA。4利用熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，PCLPEGCHITOSAN同PEGFP在氮磷比為32時(shí)組成的復(fù)合物對(duì)于293T細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率明顯不及LIPO2000。5利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，PEI600CYD的對(duì)于原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和原代軟骨細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率要明顯高于LIPO2000，而LIPO2000對(duì)于原代滑膜細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率要明顯高于PEI600CYD。6利用量子點(diǎn)標(biāo)記技術(shù)和熒光素標(biāo)記技術(shù)分別標(biāo)記PEGFP后發(fā)現(xiàn)，利用PEI600CYD轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后，質(zhì)粒在細(xì)胞核內(nèi)分布的數(shù)量要高于LIPO2000。結(jié)論1聚己內(nèi)酯（POLYCAPROLACTONE，PCL）修飾會(huì)使得殼聚糖（CHITOSAN）對(duì)于PEGFP的復(fù)合能力有所減弱，提高最低復(fù)合氮磷比。而聚乙二醇（POLYETHYLENEGLYCOL，PEG）修飾對(duì)于最低復(fù)合氮磷比則沒(méi)有影響。2DMEM緩沖體系對(duì)于PCLPEGCHITOSAN與PEGFP的復(fù)合物的粒徑基本沒(méi)有影響。3PEI600CYD的細(xì)胞毒性較之PEI25KDA要明顯降低，其轉(zhuǎn)染效率在原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和原代軟骨細(xì)胞上要明顯高于LIPO2000。4PEI600CYD較之LIPO2000，使得PEGFP更加容易進(jìn)入骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞核。

簡(jiǎn)介：目的探討肥大細(xì)胞及TLR4在病毒性心肌炎發(fā)病及發(fā)展過(guò)程中的作用及其作用機(jī)制。方法以柯薩奇病毒B3腹腔注射BALBC小鼠制作病毒性心肌炎模型模型組，N24，不含病毒的EAGLES病毒稀釋液腹腔注射BALBC小鼠作為對(duì)照組（N24），觀察兩組小鼠的一般情況變化，分別于制模后7天、14天、28天取心肌組織，行HE染色、MASSON染色及透射電鏡觀察兩組小鼠心肌病理改變情況，以甲苯胺藍(lán)染色法和透射電鏡檢測(cè)兩組小鼠各時(shí)間點(diǎn)心肌肥大細(xì)胞數(shù)目及脫顆粒情況，用RTPCR及免疫組化法檢測(cè)小鼠心肌TLR4的表達(dá)，將模型組各時(shí)間點(diǎn)肥大細(xì)胞數(shù)目與TLR4MRNA表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果1病毒性心肌炎小鼠模型建立小鼠腹腔注射CVB3后，出現(xiàn)掉毛、體重減輕等一般情況改變HE染色顯示心肌水腫、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯，各時(shí)間點(diǎn)病理積分較對(duì)照組明顯增高（P＜005）MASSON染色模型組第28天心肌血管周?chē)靶募￠g質(zhì)內(nèi)大量藍(lán)色膠原沉積，膠原容積分?jǐn)?shù)增加，與第7天、第14天模型組及對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義ALLP＜005。透射電鏡下觀察，模型組心肌排列紊亂，心肌細(xì)胞核變形。2肥大細(xì)胞數(shù)目及形態(tài)甲苯胺藍(lán)染色顯示模型組各時(shí)間點(diǎn)心肌肥大細(xì)胞數(shù)目較對(duì)照組明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005透射電鏡下可見(jiàn)模型組肥大細(xì)胞脫顆粒明顯。3TLR4表達(dá)免疫組化及RTPCR結(jié)果顯示模型組各時(shí)間點(diǎn)心肌TLR4的陽(yáng)性表達(dá)面積及MRNA表達(dá)均高于對(duì)照組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義ALLP＜0054相關(guān)性分析模型組心肌肥大細(xì)胞數(shù)目和TLR4MRNA表達(dá)具有正相關(guān)關(guān)系R20877，P＜005。結(jié)論肥大細(xì)胞及TLR4在小鼠病毒性心肌炎的炎癥反應(yīng)、纖維化過(guò)程中均起重要作用心臟肥大細(xì)胞和TLR4在小鼠病毒性心肌炎發(fā)病過(guò)程中可能起相互促進(jìn)作用。

簡(jiǎn)介：目的ELISA方法一直是臨床診斷HBV感染的傳統(tǒng)手段，通過(guò)檢測(cè)病毒HBVDNA的表達(dá)物HBSAG，HBEAG及應(yīng)答系統(tǒng)HBSAB，HBEAB，HBCAB來(lái)診斷慢性乙肝，并通過(guò)肝功的標(biāo)志物谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT等的水平判斷疾病的進(jìn)展。隨著實(shí)時(shí)熒光定量PCRRTPCR的應(yīng)用，定量測(cè)定HBVDNA可以真實(shí)反映體內(nèi)乙肝病毒感染和復(fù)制及病毒載量情況，更有利于臨床治療和療效觀察。HBVCCCDNA是HBV前基因組RNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物最原始的模板，也是HBV持續(xù)感染的關(guān)鍵因素及HBV復(fù)制最特異的指標(biāo)，但由于其存在于肝細(xì)胞核內(nèi)，限制了其定量檢測(cè)的，有研究指出，肝內(nèi)HBVCCCDNA與血清HBSAG及血清HBVDNA水平顯著相關(guān)，反應(yīng)了HBSAG檢測(cè)的重要性。但是HBV的突變使得HBSAG陽(yáng)性率降低，從而降低了HBSAG的檢測(cè)的靈敏度。通常并不把HBSAG作為慢性乙肝治療的主要檢測(cè)指標(biāo)，DASILVA，LC等觀察21例病人接受乙肝抗病毒治療后的反應(yīng)指出聯(lián)合應(yīng)用HBVDNA及HBEAG在慢性乙肝病人抗病毒治療的監(jiān)測(cè)有重要價(jià)值。本研究通過(guò)酶聯(lián)免疫分析ELISA法及熒光定量PCRFQPCR分別定量檢測(cè)HBV血清學(xué)標(biāo)志物HBVMHBSAG，HBSAB，HBEAG，HBEAB，HBCAB和HBVDNA含量，同時(shí)檢測(cè)肝功能標(biāo)志物ALT水平，探討乙型肝炎病毒HBVDNA含量與血清標(biāo)記物HBEAG、谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT的相關(guān)性及其對(duì)肝病患者診斷和預(yù)后預(yù)測(cè)的意義。方法慢性乙肝患者523例，正常對(duì)照65例。采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)ELISA法檢測(cè)乙肝患者血清學(xué)標(biāo)記物HEPATITISBVIRUSMARKER，HBVM包括HBSAG、HBSAB、HBEAG、HBEAB及HBCAB，其血清學(xué)模型包括以下四種組合，A組HBSAG、HBEAG、HBCAB大三陽(yáng)；B組HBSAG、HBEAB、HBCAB小三陽(yáng)；C組HBSAG、HBCAB；D組HBSAB、HBEAB、HBCAB。實(shí)時(shí)熒光定量PCRFQPCR檢測(cè)血清中HBVDNA含量，酶法測(cè)定血清ALT水平。結(jié)果A組HBVDNA陽(yáng)性率為9255％，明顯高于B組7897％X218960，P結(jié)論HBVDNA含量與乙肝病毒E抗原具有顯著相關(guān)性，HBVM和HBVDNA定量檢測(cè)并聯(lián)合ALT水平對(duì)于臨床乙肝病毒感染、復(fù)制及臨床治療有重要意義。

簡(jiǎn)介：乙型肝炎病毒X蛋白對(duì)人肝癌細(xì)胞系HEPG2中HNF．4Q及NF．KB表達(dá)的影響摘要L目的本實(shí)驗(yàn)研究利用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)使人HEPG2細(xì)胞過(guò)表達(dá)X基因，通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞流式、熒光顯微鏡及PCR、WESTERNBLOT等方法來(lái)探討X基因?qū)ζ銱NF4A及NF．KB表達(dá)的影響從而了解X基因與HNF．4Q、NF．XB及肝癌細(xì)胞的關(guān)系。2方法將HEPG2人肝癌細(xì)胞分為3組轉(zhuǎn)染HBX細(xì)胞組用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將HBX真核表達(dá)載體PCDNA3／HBX瞬時(shí)轉(zhuǎn)入HEPG2細(xì)胞；以轉(zhuǎn)染空載體細(xì)胞組和未轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞組作為對(duì)照組。通過(guò)顯微鏡下觀察對(duì)比肝癌細(xì)胞培養(yǎng)的生長(zhǎng)情況，以細(xì)胞流式及熒光顯微鏡檢測(cè)不同組的肝癌細(xì)胞增殖情況，PCR檢測(cè)各組X基因表達(dá)，HNF4A及NF．KB的RNRNA表達(dá)情況，WESTERNBLOT檢測(cè)NF．KB蛋白的表達(dá)情況，來(lái)探討X基因?qū)ζ銱NF4GT及NF．XB表達(dá)的影響。3結(jié)果3．1一般情況HEPG2肝癌細(xì)胞培養(yǎng)在含10％胎牛血清的培養(yǎng)液中，以脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法分別分成轉(zhuǎn)染HBX細(xì)胞組，轉(zhuǎn)染空載體細(xì)胞組和未轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞組。轉(zhuǎn)染HBX細(xì)胞組的HEPG2肝癌細(xì)胞于37。C孵育72小時(shí)，生長(zhǎng)較其他兩個(gè)組的肝癌細(xì)胞密集。轉(zhuǎn)染空載體細(xì)胞組和未轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞組的細(xì)胞生長(zhǎng)一般，未見(jiàn)異常增殖。3．2各組細(xì)胞的細(xì)胞流式增殖分析及熒光顯微鏡圖像分別將轉(zhuǎn)染HBX細(xì)胞組，轉(zhuǎn)染空載體細(xì)胞組和未轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞組的細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞流式和熒光顯微鏡分析細(xì)胞的增殖情況。細(xì)胞流式增殖分析細(xì)胞流式儀檢測(cè)各組的細(xì)胞增殖情況，轉(zhuǎn)染HBX細(xì)胞組肝癌細(xì)胞處于增殖期DIPG25．68％AT192．21。熒光顯微鏡圖像轉(zhuǎn)染HBX細(xì)胞組的HEPG2肝癌細(xì)胞于37“C孵育72小時(shí)處于增殖期的細(xì)胞比率為O．47。轉(zhuǎn)染空載體細(xì)胞組處于增殖期的細(xì)胞比率為O．28。未轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞組處于增殖期的細(xì)胞比率為0．25。3．3RTPCR法檢測(cè)檢測(cè)肝癌細(xì)胞內(nèi)HNF．4A及NF．KB的基因的表達(dá)。檢測(cè)轉(zhuǎn)染HBX細(xì)胞組，轉(zhuǎn)染空載體細(xì)胞組及未轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞組中肝癌細(xì)胞內(nèi)HNF．4Q及NF．KB基因的表達(dá)情況。轉(zhuǎn)染HBX細(xì)胞組中HNF4A的表達(dá)值為T(mén)HEEFFECTOFHEPATITISBVIRUSXPROTEINTOHNF一4QANDNFKBONHUMANHEPG2HEPATOCARCIMONACELLABSTRACT1PURPOSETHISSTUDYINVESTIGATEDTHEHEPG2LIVERCANCERCELLSWHICHARETRANSECTEDBYXGENEOFLIPOSOME，THENEXPLORETHEEXPRESSIONOFXGENE，HNF4CTANDNF1①THROUGHCELLCULTURE，CELLFLOW,FLUORESCENCEMICROSCOPYANDPCR,WESTERNBLOT．ITISINVESTIGATEDTHERELATIONOFXGENE．HNF一4AANDNFKAPPABINLIVERCANCEL“CELLS。2METHODSTHEHEPG2ADULTLIVERCANCERCELLSAREDIVIDEDINTOTHREEGROUPSTRANSFCCTCDWITHHBXCELLSGROUP，CELLSTRANSFECTEDWITHEMPTYVECTORGROUPANDUNTRANSFECTEDHEPG2CELLSASCONTROLGROUP．CONTRASTTOLIVERCANCERCELLSGROWTHBYMICROSCOPICOBSERVATION，THEPROLIFERATIONOFHEPATOMACELLSBYCELLFLOWANDFLUORESCENCEMICROSCOPYTODETECTDIFFERENTGROUPS．THEEXPRESSIONOFXGENE。HNF4QANDNFKBNUCLEARRNAAREDETECTEDBYPCRINEACHGROUP．THEEXPRESSIONOFNFKBNUCLEARPROTEINISDETECTEDBYWESTERNBLOTTOEXPLORETHERELATIONSHIPBETWEENTHEXGENEANDNFRD3．3RESULTS3．1GENERALHEPG2CELLSWERECULTUREDINMEDIUMCONTAINING10％FETALBOVINESERULN．THEGROWTHOFLIVERCANCERCELLSINTRANSFECTEDXGENEGROUPGROWTHBETTERTHANTHEOTHERTWOGROUPSAT37℃10％FETALBOVINESERUWLFOR72HOURS．3．2EACHGROUPOFCELLSSTREAMINGPROLIFERATIONANALYSISANDFLUORESCENCEMICROSCOPYIMAGESTHEFLOWCELLPROLIFERATIONASSAYTHEHEPG2CELLSWHICHISINTHETRANSFECTEDHBXGROUPAREDETECTEDTHECASEOFPROLIFERATIONUNDER37。CIN6WELLPLATESANDINCUBATEDFOR72HOURS．THERATEOFPROLIFERATIONISTHATDIP32IS5．68％AT192．21INTHEHEPALOMACELLS．FLUORESCENCEMICROSCOPYIMAGESTHERATEOFPROLIFERATIONISTHATTRANSFECTEDHEPG2CELLSIS0．47INCUBATEDAT37℃FOR72HOURS．ITISMORETHANOTHERTWOGROUPS．3．3THEEXPRESSIONOF姐盯．4CTANDNFKBDETECTEDBYRTPCRMETHODINLIVERCANCEREELIS．THEEXPRESSIONVALUEOFHBXTRANSFECTEDGROUPIS0．24，ANDTHEEXPRESSIONOFNFKB

簡(jiǎn)介：研究之一影響重型病毒性肝炎預(yù)后的因素分析目的研究影響重型病毒性肝炎預(yù)后的因素方法312例患者入院后行肝功能、血清膽紅素、PT、PTA、腎功能、AFP、載脂蛋白AIB100等檢測(cè)及觀察其各種并發(fā)癥結(jié)果該組病死率為622﹪病原學(xué)仍以HBV感染為主占965﹪混合感染病死率高有肝昏迷肝腎綜合癥消化道出血感染等并發(fā)癥者病死率高血清膽紅素越高PT及PTA愈低、血清載脂蛋白水平低病死率越高結(jié)論重癥病毒性肝炎有肝昏迷、肝腎綜合癥及消化道出血等并發(fā)癥者病死率高SB、PT、APOAI、B100對(duì)重型病毒性肝炎預(yù)后影響較大研究之二重型病毒性肝炎患者血小板參數(shù)檢測(cè)對(duì)其出血估計(jì)和預(yù)后評(píng)估目的了解重型病毒性肝炎患者血小板4項(xiàng)參數(shù)檢測(cè)結(jié)果對(duì)出血及預(yù)后評(píng)估的意義方法采用COULTERJT型血細(xì)胞分析儀檢測(cè)148例重型病毒性肝炎患者血小板計(jì)數(shù)PLATELETCOUNTPLT平均血小板體積MEANPLATELETVOLUMMPV血小板壓積PLATECRITPCT和血小板體積分布寬度PLATELETVOLUMDISTRIBUTIONWIDTHPDW結(jié)果重型病毒性肝炎患者的PLT、MPV、PCT、PDW均顯著降低P001和P005且PLT、MPV、PCT與凝血酶原時(shí)間有明顯相關(guān)性出血組與非出血組PLT、PCT、MPV差異有顯著性P001死亡組與存活組PLT、PCT差異亦有顯著性P001結(jié)論血小板4項(xiàng)參數(shù)檢測(cè)對(duì)重型病毒性肝炎出凝血異常的判斷及預(yù)后評(píng)估有重要價(jià)值研究之三血清載脂蛋白AI、B100與重癥肝病患者預(yù)后的關(guān)系目的了解血清載脂蛋白AI、B100在重癥肝病患者中的意義方法采用火箭免疫電泳法檢測(cè)急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、重型病毒性肝炎共170例和健康獻(xiàn)血員65例血清載脂蛋白AI、B100含量結(jié)果1各肝病組血清APOAI、B100含量均顯著低于對(duì)照組126±012GL和082±013GLP0001和P001和P0052APOAI、B100含量隨病情加重而逐漸降低重型病毒性肝炎組血清APOAI、B100均顯著低于急性肝炎組、慢性肝炎組和代償期肝硬化組P001和P0053重型病毒性肝炎和晚期肝硬化組血清APOAI、B100含量與凝血酶原活動(dòng)度PTA呈正相關(guān)P0005和P005結(jié)論血清APOAI、B100含量可作為一項(xiàng)肝臟合成功能、損傷程度和估計(jì)預(yù)后的較好指標(biāo)

簡(jiǎn)介：中南大學(xué)博士學(xué)位論文重組逆病毒載體介導(dǎo)HSVTK自殺基因的調(diào)控性研究及在乳腺癌基因治療中的應(yīng)用姓名曾趙軍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專(zhuān)業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師胡維新20040501博士學(xué)位論文中文摘要GCV轉(zhuǎn)變成為一一種有毒的代謝產(chǎn)物，從而殺死乳腺癌細(xì)胞。用MCF／TRE／HSVTK／TETON細(xì)胞接種SCID小鼠建立人乳腺癌SCID小鼠模型，DOX誘導(dǎo)7天腹腔內(nèi)注射GCV治療23天后發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組比較乳腺癌SCID小鼠經(jīng)DOXGCV治療后，腫瘤體積明顯減小，生長(zhǎng)受抑，組問(wèn)比較有顯著性差異P005；HE染色發(fā)現(xiàn)治療組腫瘤有局部壞死，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。RTPCR結(jié)果顯示DOX誘導(dǎo)后腫瘤組織HSVTK表達(dá)較明顯。結(jié)果顯示在DOX的誘導(dǎo)作用下，GCV對(duì)可調(diào)控性自殺基因乳腺癌SCID小鼠有顯著治療作用。在此基礎(chǔ)上，將逆轉(zhuǎn)錄病毒載體PREVTRE、PREVTRE／TK、PREVTET0N等通過(guò)微乒乓轉(zhuǎn)染法導(dǎo)入包裝細(xì)胞PA317中，分別以HYGROMYCINB、G418篩選克隆細(xì)胞，濃縮克隆細(xì)胞上清收集病毒。以重組逆轉(zhuǎn)錄病毒PREVTRE／TK為例在不同時(shí)間及不同丁酸鈉濃度下，檢測(cè)分析經(jīng)篩選獲得陽(yáng)性克隆的細(xì)胞上清有無(wú)HSVTK基因的表達(dá)及如何獲得高滴度的重組病毒液。收集以上逆轉(zhuǎn)錄病毒上清并以差速離心法濃縮病毒上清，經(jīng)初步純化所得即為重組逆轉(zhuǎn)錄病毒。以重組逆轉(zhuǎn)錄病毒REVTRE／HSVTK感染宿主細(xì)胞MCF一7并經(jīng)HYGROMYCINB篩選后，進(jìn)行SOUTHERN印跡雜交檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)該重組病毒能夠?qū)⒛康幕蛘系剿拗骷?xì)胞基因組中。重組逆轉(zhuǎn)錄病毒REVTRE／HSVTK和逆轉(zhuǎn)錄病毒REVTETON感染的MCF7細(xì)胞經(jīng)HYGROMYCINB和G418篩選后用半定量RTPCR方法檢測(cè)了不同DOX濃度誘導(dǎo)下HSVTK基因的表達(dá)，以MTT法檢測(cè)不同DOX濃度下GCV對(duì)此細(xì)胞的殺傷作用。獲得的細(xì)胞陽(yáng)性克隆在DOXLGG／ML濃度誘導(dǎo)，GCV為2IRTG／ML作用48H后流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期的變化及分析細(xì)胞凋亡情況。分11

簡(jiǎn)介：目的構(gòu)建出具有轉(zhuǎn)染后能表達(dá)活性的骨形態(tài)形成蛋白7的重組腺病毒。將已構(gòu)建好的重組腺病毒直接導(dǎo)入腎纖維化大鼠腎臟，觀察其抗腎纖維化的作用，為腺病毒介導(dǎo)BMP7的進(jìn)一步基因治療提供可靠的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)；同時(shí)對(duì)照研究三七總皂甙對(duì)腎間質(zhì)纖維化和BMP7的影響與機(jī)制。方法無(wú)菌級(jí)雄性SD大鼠64只隨機(jī)分為四組（1）假手術(shù)組（S）大鼠手術(shù)剖腹后僅游離左側(cè)輸尿管但不結(jié)扎。（2）單側(cè)輸尿管梗阻組（U）大鼠行手術(shù)剖腹，分離并于腎盂下結(jié)扎左側(cè)輸尿管。（3）BMP7治療組（B）大鼠行手術(shù)剖腹，自結(jié)扎處以上的輸尿管逆行注射包含無(wú)菌生理鹽水BMP7病毒的混合液，注射后局部壓迫片刻并隨即于注射處上方結(jié)扎輸尿管，在兩處結(jié)扎之間離斷輸尿管。（4）三七總皂甙治療組（P）大鼠行手術(shù)剖腹，分離并于腎盂下結(jié)扎左側(cè)輸尿管，術(shù)后每晚給予三七總皂甙（PNS）腹腔注射1次每只大鼠每次注射100MGKG。S組、B組和U組同時(shí)給予同樣劑量的蒸餾水，腹腔注射。造模后第7、14、21、28D每組處死四只大鼠，取左側(cè)腎臟進(jìn)行病理切片觀察，并作指標(biāo)檢測(cè)。以免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)腎組織中ΑSMA蛋白的表達(dá)水平，以逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)技術(shù)檢測(cè)TGFΒ1的表達(dá)水平。結(jié)果光鏡下觀察，HE及MASSON染色S組未見(jiàn)異常。HE染色可見(jiàn)U組、B組及P組各時(shí)相點(diǎn)大鼠腎臟腎小球均無(wú)明顯變化。U組術(shù)后第7天腎小管擴(kuò)張明顯，上皮細(xì)胞變性、水腫、甚至壞死，腎間質(zhì)大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，間質(zhì)寬度明顯增加，偶見(jiàn)萎縮腎小管；第14天上述病變加重，可見(jiàn)彌漫的腎小管基底膜增厚皺縮，小管基底膜不同程度斷裂，皮質(zhì)及外髓萎縮的腎小管較多，間質(zhì)中大量淋巴單核細(xì)胞浸潤(rùn)，纖維化較明顯。MASSON染色可見(jiàn)U組術(shù)后7天腎小管擴(kuò)張，腎間質(zhì)寬度增加，膠原纖維增加，染色加深此后，病變逐漸加重。P組與B組平行相比腎小管間質(zhì)病變程度明顯減輕，腎間質(zhì)相對(duì)面積明顯減少P結(jié)論（1）單側(cè)輸尿管結(jié)扎可以快速建立腎臟細(xì)胞轉(zhuǎn)分化和間質(zhì)纖維化動(dòng)物模型。（2）在本課題研究中，將治療基因BMP7成功、高效地轉(zhuǎn)移到腎臟的病灶部位，能夠明顯減輕腎間質(zhì)纖維化，下調(diào)TGFΒ1的表達(dá)，從而發(fā)揮其在單側(cè)輸尿管結(jié)扎模型中對(duì)腎臟的保護(hù)作用，延緩和抑制了腎間質(zhì)纖維化的發(fā)展。BMP7并能有效抑制腎小管間質(zhì)炎性細(xì)胞計(jì)數(shù)和小管間質(zhì)損傷。（3）PNS能有效減輕UUO大鼠腎小管間質(zhì)的損傷，抑制ΑSMA和TGFΒ1的表達(dá)。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)研究中費(fèi)用低廉，毒副作用較少。但對(duì)于BMP7影響的研究，將在進(jìn)一步試驗(yàn)中進(jìn)行。

簡(jiǎn)介：分類(lèi)號(hào)密級(jí)學(xué)號(hào)2011409030單位代碼10759石河子大學(xué)石河子大學(xué)碩士學(xué)位論文炎癥因子與輕度認(rèn)知功能障礙的相關(guān)性及藥物干預(yù)研究學(xué)位申請(qǐng)人吳倩吳倩指導(dǎo)教師黃剛黃剛教授教授申請(qǐng)學(xué)位門(mén)類(lèi)級(jí)別醫(yī)學(xué)碩士醫(yī)學(xué)碩士學(xué)科、專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)內(nèi)科學(xué)內(nèi)科學(xué)研究方向冠心病臨床與基礎(chǔ)研究冠心病臨床與基礎(chǔ)研究所在學(xué)院醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)院中國(guó)新疆石河子2014年5月CRELATIONBETWEENINFLAMMATYFACTMILDCOGNITIVEIMPAIRMENTMCITREATMENTSONMCIADISSERTATIONSUBMITTEDTOSHIHEZIUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFTHEDEGREEOFMASTEROFMEDICINEBYWUQIANINTERNALMEDICINEDISSERTATIONSUPERVISPROFHUANGGANGMAY2014

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簡(jiǎn)介：本文主要探討瀘州地區(qū)嬰幼兒社區(qū)獲得性病毒性肺炎的病原學(xué)、各病毒性肺炎的臨床特征、發(fā)病年齡與病毒分布關(guān)系、檢出月份與病毒分布關(guān)系、X線特點(diǎn)以及免疫功能變化，包括免疫球蛋白IGG、IGA、IGM，T淋巴細(xì)胞亞群CD3、CD4、CD8及CD4CD8等。經(jīng)實(shí)驗(yàn)得出1病毒感染是瀘州地區(qū)嬰幼兒肺炎的主要病原，以單一病毒感染為主，依次為RSV、IFV、ADV、PIV、CMV；混和病毒感染依次為IFVPIV、IFVRSV、ADVPIV、ADVIFV、PIVRSV。病毒病原譜不同于其他地區(qū)，表現(xiàn)出地區(qū)差異性。2病毒性肺炎各有其臨床特點(diǎn)①RSV肺炎以6月以下小兒常見(jiàn)，發(fā)熱輕，喘憋重，肺部易聞干、濕羅音，X線以片狀影為主，多并有肺氣腫。②IFV肺炎以6月～3歲小兒多見(jiàn)，發(fā)熱、咳嗽重，喘息易見(jiàn)，常伴腹瀉，肺部易聞細(xì)濕羅音，X線以片狀影、斑點(diǎn)狀影為主。③ADV肺炎以6月～3歲小兒多發(fā)，發(fā)熱、中毒癥狀重，常有腹瀉，肺部體征出現(xiàn)晚，早期以粗濕羅音為主，細(xì)濕羅音后出現(xiàn)，X線表現(xiàn)為肺紋增粗、模糊，斑點(diǎn)狀影為主。④PIV肺炎以1歲～3歲多見(jiàn)，發(fā)熱輕，咳嗽不劇，肺部可聞干、濕羅音，X線以小片狀影為主。⑤CMV肺炎以1歲～3歲為多，除一般肺炎癥狀外，常伴肝功異常，X線肺紋增粗、模糊，片狀影為主。3病毒性肺炎患兒細(xì)胞免疫變化主要表現(xiàn)為T(mén)淋巴細(xì)胞亞群紊亂，CD3↓、CD4↓、CD4CD8↓、CD8↑，而體液免疫無(wú)明顯改變。

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簡(jiǎn)介：目的通過(guò)建立輪狀病毒腹瀉模型小鼠，并給予茜草藤、烏梅、甘草組成的顆粒干預(yù)，觀察茜草藤、烏梅、甘草顆粒對(duì)輪狀病毒腹瀉小鼠表現(xiàn)、腸粘膜病理改變及IGA含量、血清TNFΑ、腸道NFΚB含量及緊密連接蛋白變化情況，研究茜草藤、烏梅、甘草顆粒對(duì)輪狀病毒（RV）腹瀉作用的機(jī)制。方法MTT方法檢測(cè)茜草藤、烏梅、甘草顆粒對(duì)MK2細(xì)胞毒性及對(duì)RV的體外抑制。將120只乳鼠隨機(jī)分為正常組、模型組和干預(yù)組，模型組和干預(yù)組小鼠經(jīng)口腔給予015ML的RV液，正常組小鼠給予等量生理鹽水。造模后1天，干預(yù)組小鼠每日2次給予25MGML的茜草藤、烏梅、甘草顆粒溶液01ML，模型組及正常組給予等量生理鹽水。取小腸組織作病理、電鏡觀察，免疫組化技術(shù)檢測(cè)腸道緊密連接蛋白OCCLUDIN及ZO1。ELISA方法檢測(cè)腸粘膜IGA、核轉(zhuǎn)錄因子ΚB（NFΚB）、血清中腫瘤壞死因子?。═NF?。?。SPSS170軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果1在茜草藤、烏梅、甘草顆粒溶液安全濃度范圍內(nèi)，隨溶液濃度升高，RV感染的MK2細(xì)胞的存活率升高。2病理及電鏡改變正常組腸粘膜結(jié)構(gòu)正常；模型組大量空泡變性，絨毛壞死不明顯，刷狀緣結(jié)構(gòu)整齊；干預(yù)組空泡樣改變較模型對(duì)照組減輕，刷狀緣結(jié)構(gòu)整齊。3腸粘膜中IGA第二至第五天正常組較模型組及干預(yù)組升高，第4天至第5天干預(yù)組較模型組升高；4血清TNFΑ模型組與干預(yù)組第1天起較正常組升高，第3天至第4天達(dá)高峰。干預(yù)組第3日至第6日較模型組下降；5腸道NFΚB模型組與干預(yù)組第1天起較正常組升高，第3天至第4天達(dá)高峰。第3日至第6日干預(yù)組較模型組下降。6緊密連接蛋白光密度第一天，三組沒(méi)有顯著差異；第三天，模型組較干預(yù)組與正常組顯著下降；第六天模型組較正常組與干預(yù)組下降。結(jié)論1茜草藤、烏梅、甘草顆粒可以抑制RV對(duì)細(xì)胞的破壞作用；促進(jìn)緊密連接結(jié)構(gòu)的恢復(fù)，保護(hù)腸粘膜屏障；2促進(jìn)腸粘膜IGA的分泌；3抑制NFΚB的活化，減少細(xì)胞因子產(chǎn)生，通過(guò)這些，茜草藤、烏梅、甘草顆粒減輕輪狀病毒腹瀉的臨床表現(xiàn)并縮短其病程。

簡(jiǎn)介：蘇州大學(xué)博士學(xué)位論文雙調(diào)控溶瘤腺病毒攜帶超抗原SEA基因治療前列腺癌基礎(chǔ)研究姓名賀厚光申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專(zhuān)業(yè)泌尿外科指導(dǎo)教師嚴(yán)春寅；韓從輝201012III對(duì)照組，表明DU145細(xì)胞與淋巴細(xì)胞共同培養(yǎng)的過(guò)程中轉(zhuǎn)染SEA基因的腫瘤細(xì)胞相對(duì)未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞更易被淋巴細(xì)胞捕獲殺傷，對(duì)淋巴細(xì)胞有一定的趨化作用；ELISA檢測(cè)TNF和IL2分泌量實(shí)驗(yàn)組均高于對(duì)照組。結(jié)論結(jié)論成功構(gòu)建了表達(dá)超抗原SEA基因的雙調(diào)控選擇增殖型溶瘤腺病毒SG504SEA。證明其具有體外刺激淋巴細(xì)胞對(duì)前列腺癌細(xì)胞的殺傷作用，對(duì)腫瘤細(xì)胞周?chē)募?xì)胞因子分泌存在促進(jìn)作用?！娟P(guān)鍵詞關(guān)鍵詞】前列腺癌；超抗原SEA；溶瘤腺病毒作者作者賀厚光指導(dǎo)老師指導(dǎo)老師嚴(yán)春寅韓從輝

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多抗病毒治療前后HIV-AIDS患者精漿中HIV RNA水平及傳播風(fēng)險(xiǎn)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文EB病毒感染、P53和P16表達(dá)與鼻腔、咽淋巴環(huán)非霍奇金氏淋巴瘤的關(guān)系姓名吳麗莉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)病理學(xué)指導(dǎo)教師馬大烈戴益民200151第二軍醫(yī)大學(xué)一碩士論文RELATIONSHIPBETWEENEBVINFECTION，EXPRESSIONSOFP53P16ANDNONHODGKIN’SLYMPHOMAINTHENASALCAVITYANDPHARYNGEALWALDEYER’SRINGABSTRACTOBJECTIVEATOOBSERVETHEPRESENCEOFEPSTEINBARRVIRUEEBVANDEXPRESSIONSOFP53ANDP16INNONHODGKIN’SLYMPHOMANHLOFTHENASALCAVITYANDPHARYNGEALWALDEYER’SRING；BTOINVESTIGATOTHECORRELATIONBETWEENTHEMMETHODSINSITUHYBRIDIZATIONWASUSEDTODETECTEBVDNAANDP16MRNAANDIMMUNOHISTOCHEMICALSTAININGWASUSEDTOEXAMINOTHEEXPRESSIONSOFCD45RO，CD20，CD56，LMPL，P53ANDP16IN36CASESINSITUPERWASUSEDTOREDETECTEBVDNAIN5CASOSWHOSEEBVDNAWASNEGATIVEBYINSITUHYBRIDIZATIONRESULTSPOSITIVEEXPRESSIONRATESOFCD45RO，CD56，CD20，LMPI，EBVDNA，P53，P16ANDP16MRNAWERE528％，222％，472％，278％，611％，194％，222％AND306％EBVDNAINONECASEWASPOSITIREBYINSITUPERPOSITIVEEXPRESSIONRATESOFEBVDNAINTNHLWERESIGNIFLEANTLYHIGHERTHANINBNHL。、P005CONCLUSIONAHIGHERPERCENTAGEOFEBVINFECTIONWASPRESENTINNHLOFTHENASALCAVITYANDPHARYNGEALWALDEYER’SRINGESPECIALLYINT／NKNHLEBVINFECTIONWASNOTSIGNIFICANTLYASSEEIATEDWITHP53ANDP16OXPRESSIONSINNHLKEYWERDSEPSTEINBARRVIRUS，LMPI，P53，P16，NHL，INSITUPER，IMMUNOHISTOCHEMISTRY，INSITUHYBRIDIZATIOFF3