簡(jiǎn)介：北京化工大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的作品成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。作者簽名肆日期絲生皇遂關(guān)于論文使用授權(quán)的說(shuō)明學(xué)位論文作者完全了解北京化工大學(xué)有關(guān)保留和使用學(xué)位論文的規(guī)定，即研究生在校攻讀學(xué)位期間論文工作的知識(shí)產(chǎn)權(quán)單位屬北京化工大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤(pán)，允許學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以允許采用影印、縮印或其它復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。口論文暫不公開(kāi)或保密注釋本學(xué)位論文屬于暫不公開(kāi)或保密范圍，在一年解密后適用本授權(quán)書(shū)。／嗍E暫不公開(kāi)或保密論文注釋本學(xué)位論文不屬于暫不公開(kāi)或保密范圍，適用本授權(quán)書(shū)。日期蘭絲上這日期一ⅫF笙，上絲基于情感認(rèn)知模型的交互式?jīng)Q策方法摘要決策者的情感認(rèn)知在進(jìn)行復(fù)雜多目標(biāo)決策過(guò)程中起著關(guān)鍵的作用，如果能夠使計(jì)算機(jī)掌握決策者的決策情感認(rèn)知規(guī)律，對(duì)于提升計(jì)算機(jī)輔助多目標(biāo)決策的能力和水平具有重要的意義。論文提出一種融合了性格特征、心境狀態(tài)和情感狀態(tài)的多層情感認(rèn)知模型，描述決策者對(duì)于復(fù)雜決策問(wèn)題的情感認(rèn)知決策過(guò)程。運(yùn)用分層情感認(rèn)知模型構(gòu)建集感性和理性于一身的虛擬人，取代決策者的直接參與，輔助計(jì)算機(jī)完成對(duì)多目標(biāo)優(yōu)化問(wèn)題的交互決策求解。論文的主要工作如下．將性格特性、心境狀態(tài)和情感狀態(tài)進(jìn)行融合，構(gòu)建分層的情感模型；然后基于認(rèn)知心理學(xué)和情感計(jì)算方法，通過(guò)模糊推理實(shí)現(xiàn)對(duì)外界激勵(lì)信號(hào)的認(rèn)知評(píng)價(jià)，獲取其對(duì)情感模型的影響程度，從而建立了情感認(rèn)知評(píng)價(jià)模塊；最后將以上兩者相結(jié)合，形成了分層情感認(rèn)知模型；將分層情感認(rèn)知模型應(yīng)用于多目標(biāo)決策問(wèn)題，建立了情感交互式?jīng)Q策方法，實(shí)現(xiàn)決策過(guò)程無(wú)人直接參與的情感交互決策求解，并充分體現(xiàn)了決策者的主觀偏好；通過(guò)線性和非線性多目標(biāo)決策問(wèn)題的數(shù)值實(shí)例，對(duì)情感交互式?jīng)Q策方法進(jìn)行了應(yīng)用和驗(yàn)證，表明所提出的情感交互式?jīng)Q策方法能夠替代決策者參與決策過(guò)程，驗(yàn)證了其有效性。

簡(jiǎn)介：背景艾滋?。ˋCQUIREDIMMUNEDEFICIENCYSYNDROME，AIDS）是嚴(yán)重威脅人民健康的公共衛(wèi)生問(wèn)題，隨著高效抗反轉(zhuǎn)錄病毒治療HIGHLYACTIVEANTIRETROVIRALTHERAPY，HAART的推廣，艾滋病抗病毒治療取得了一定的成效，但迄今為止仍無(wú)有效的方法徹底清除艾滋病毒HUMANIMMUNODEFICIENCYVIRUS，HIV。近年來(lái)，細(xì)胞因子在AIDS的發(fā)病過(guò)程及其抗病毒治療中的作用受到日益關(guān)注?？茖W(xué)家們已發(fā)現(xiàn)了多種細(xì)胞因子參與抗HIV病毒免疫應(yīng)答和免疫重建，并提出其中一些細(xì)胞因子可能成為加強(qiáng)抗HIV病毒效果的輔助治療手段。IL27是HIV研究領(lǐng)域一個(gè)較新的細(xì)胞因子，已有體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)IL27在HIV1病毒感染中可能存在一定的治療價(jià)值，但I(xiàn)L27相關(guān)的臨床研究較少。本文將研究HIV感染者IL27及其受體的表達(dá)情況及其在艾滋病發(fā)病機(jī)制和HAART抗病毒治療免疫反應(yīng)中的作用。目的研究HIV感染者IL27和它的受體表達(dá)情況及其與正常人的區(qū)別HAART對(duì)IL27和它的受體表達(dá)的影響分析HIV感染者IL27及其受體GP130與CD4T細(xì)胞數(shù)、HIVRNA病毒載量的關(guān)系，IL27與TH1細(xì)胞因子IFNΓ和TH2細(xì)胞因子IL4的關(guān)系，進(jìn)一步探索艾滋病的發(fā)病機(jī)制和免疫重建機(jī)制。方法從2012年12月到2013年3月來(lái)湘雅二醫(yī)院艾滋病專(zhuān)科門(mén)診就診并準(zhǔn)備啟動(dòng)HAART治療的HIV感染者AIDS患者中選取34例納入本研究，并定期隨訪收集HAART治療開(kāi)始前（0月），開(kāi)始治療6月、12月的血標(biāo)本。同時(shí)隨機(jī)選取健康體檢者27例作為健康對(duì)照組。使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ENZYMELINKEDIMMUNOSBENTASSAY，ELISA檢測(cè)血漿中IL27、IFNΓ、IL4的濃度，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血CD3CD4T細(xì)胞數(shù)、外周血單個(gè)核細(xì)胞PERIPHERALBLOODMONONUCLEARCELL，PBMC中CD4細(xì)胞表面GP130的表達(dá)情況，HIV實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定外周血中HIVRNA病毒載量，RTPCR和瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)GP130MRNA的表達(dá)。對(duì)以上所測(cè)得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理和相關(guān)性分析。結(jié)果HIV感染未治療者血漿中IL27的平均濃度明顯低于正常人，開(kāi)始HAART治療后IL27的濃度逐漸升高，治療6月及12月后血漿中IL27濃度明顯高于未治療前。HIV感染者PBMC中CD4細(xì)胞表面GP130表達(dá)水平明顯低于正常人，隨著HAART抗病毒治療的進(jìn)行，可逆轉(zhuǎn)這種情況，使GP130的表達(dá)逐漸增加治療6月、12月時(shí)CD4細(xì)胞表面GP130表達(dá)水平明顯高于未治療前。通過(guò)RTPCR、瓊脂糖凝膠電泳半定量檢測(cè)GP130MRNA的表達(dá)水平證實(shí)了細(xì)胞表面GP130表達(dá)趨勢(shì)的變化。IL27濃度與CD4細(xì)胞表面GP130表達(dá)水平成正相關(guān)IL27和它的受體GP130均與CD4T細(xì)胞數(shù)成正相關(guān)、與血漿HIVRNA病毒載量成負(fù)相關(guān)。HIV感染者血漿IFNΓ濃度隨著治療時(shí)間的延長(zhǎng)越來(lái)越高，IL4的濃度隨著治療時(shí)間的延長(zhǎng)越來(lái)越低，其濃度水平都在向正常人群靠近。在HIV感染者中IL27濃度的變化趨勢(shì)與IFNΓ一致，與IL4相反。結(jié)論1、首次觀察到HIV病毒感染者血漿IL27濃度低于健康人群，且隨著HAART抗病毒治療，IL27的濃度逐漸升高同時(shí)觀察到HIV病毒感染者IL27的受體GP130在CD4T細(xì)胞表面的表達(dá)水平明顯低于健康人群，隨著HAART抗病毒治療時(shí)間的延長(zhǎng)，這種受體表達(dá)受損可以逐漸恢復(fù)。2、發(fā)現(xiàn)HIV病毒感染者外周血IL27的濃度及其受體GP130的表達(dá)與血漿HIVRNA水平成負(fù)相關(guān)，與CD3CD4T細(xì)胞數(shù)量成正相關(guān)。提示血漿中的IL27對(duì)HIV感染者可能具有保護(hù)效應(yīng)，IL27及其受體GP130可能參與了HIV的發(fā)病機(jī)制及抗病毒免疫反應(yīng)機(jī)制。3、IL27的濃度變化和IFNΓ與IL4的濃度變化存在一定的關(guān)系，提示IL27在HIV病毒感染中以炎性作用為主，且可能與TH1TH2細(xì)胞因子失衡有關(guān)。

簡(jiǎn)介：病毒性心肌炎是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)病名，按中醫(yī)進(jìn)行辨證分型，歷來(lái)極不一致，至于臨床報(bào)導(dǎo)及臨床應(yīng)用中的辨證分型更是多種多樣，為此有必要對(duì)本病的證型開(kāi)展較為統(tǒng)一的規(guī)范化的研究。目的本文從病證角度，通過(guò)文獻(xiàn)研究，結(jié)合專(zhuān)家問(wèn)卷調(diào)查，探討病毒性心肌炎的證候及癥狀分布特點(diǎn)，規(guī)范病毒性心肌炎的常見(jiàn)中醫(yī)辨證分型及每一證型的主要辨證指標(biāo)。方法利用計(jì)算機(jī)檢索與人工檢索相結(jié)合，在充分研究大量文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，對(duì)照中醫(yī)規(guī)范化標(biāo)準(zhǔn)化證候、癥狀名稱(chēng)，對(duì)病毒性心肌炎證候及癥狀進(jìn)行系統(tǒng)整理，保留累積頻次的第25百分位數(shù)P25以上的證型1，制定專(zhuān)家問(wèn)卷表，遴選80位長(zhǎng)期從事中醫(yī)及中西醫(yī)結(jié)合臨床的專(zhuān)家進(jìn)行問(wèn)卷調(diào)查，采用SPSS115統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)回收問(wèn)卷數(shù)據(jù)進(jìn)行錄入、核查，經(jīng)過(guò)T檢驗(yàn)，比較高級(jí)職稱(chēng)專(zhuān)家和中級(jí)職稱(chēng)專(zhuān)家對(duì)上述辨證分型及癥狀、體征認(rèn)識(shí)的一致性；通過(guò)證型之間兩兩比較的方差分析及癥狀體征出現(xiàn)頻數(shù)百分比的統(tǒng)計(jì)分析，保留出現(xiàn)頻次大于一半、百分比大于50％的癥狀或體征2，歸納出此次調(diào)查中病毒性心肌炎的常見(jiàn)證候類(lèi)型及每一證型的主要辨證指標(biāo)。結(jié)果通過(guò)成組T檢驗(yàn)分析，高級(jí)職稱(chēng)專(zhuān)家和中級(jí)職稱(chēng)專(zhuān)家對(duì)上述證候分型及癥狀、體征認(rèn)識(shí)的一致性較高P＞005，方差分析后得出病毒性心肌炎臨床常見(jiàn)的中醫(yī)證候類(lèi)型有氣陰兩傷證、邪毒侵心證、心血瘀阻證、痰阻心脈證、心腎陽(yáng)虛證、心脾兩虛證、陰虛火旺證、陰陽(yáng)兩虛證。其中邪毒侵心證、氣陰兩傷證、心血瘀阻證為主要證候類(lèi)型；痰阻心脈證、心腎陽(yáng)虛證、心脾兩虛證、陰虛火旺證、陰陽(yáng)兩虛證為次要證候類(lèi)型。把出現(xiàn)頻次大于一半、百分比大于50％的癥狀或體征作為主要辨證指標(biāo)2，結(jié)果如下邪毒侵心證發(fā)熱、咽痛、心悸、氣短、乏力、胸悶、或有身熱不揚(yáng)、腹?jié)M、舌質(zhì)紅或暗紅、苔黃或黃膩、脈滑數(shù)或濡數(shù)。氣陰兩傷證心悸、少氣懶言、神疲乏力、頭暈、午后潮熱、五心煩熱、自汗畏風(fēng)、盜汗、口咽干燥、舌淡紅瘦薄、苔薄白、脈細(xì)數(shù)無(wú)力。心血瘀阻證心悸、胸悶、心前區(qū)刺痛或背痛、乏力、唇色紫暗、舌質(zhì)紫暗或有瘀斑瘀點(diǎn)、苔薄白、脈細(xì)澀。痰阻心脈證心悸、氣短、乏力、胸悶痛或背沉而痛、體胖、多痰、身體困重、頭暈、舌質(zhì)暗紅胖大、苔厚膩或滑、脈滑緩。心腎陽(yáng)虛證心悸怔忡、形寒肢冷、精神萎靡、或見(jiàn)下肢浮腫、舌質(zhì)淡、苔白、脈沉遲甚則沉微欲絕。心脾兩虛證心悸、怔忡、神疲乏力、少寐多夢(mèng)、健忘、納少、腹脹、面色淡白或萎黃、舌質(zhì)淡胖、舌苔薄白、脈細(xì)弱。陰虛火旺證心悸不寧、胸悶、心前區(qū)隱痛、心煩、少寐多夢(mèng)、耳鳴、口干咽燥、手足心熱、舌紅或舌尖紅、苔薄黃或少、脈細(xì)數(shù)。陰陽(yáng)兩虛證心悸怔忡、胸中憋悶、乏力、身體消瘦、手足不溫、畏寒、五心煩熱、舌淡嫩瘦薄少津有紅點(diǎn)、少苔或無(wú)苔、脈沉細(xì)無(wú)力。結(jié)論在病毒性心肌炎的辨證分型及每一證型的主要辨證指標(biāo)上，高級(jí)職稱(chēng)專(zhuān)家和中級(jí)職稱(chēng)專(zhuān)家的看法一致性較高P＞005，在8個(gè)常見(jiàn)中醫(yī)證候類(lèi)型中主要證候類(lèi)型為邪毒侵心證、氣陰兩傷證、心血瘀阻證；次要證候類(lèi)型為痰阻心脈證、心腎陽(yáng)虛證、心脾兩虛證、陰虛火旺證、陰陽(yáng)兩虛證。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多柯薩奇B組病毒不同感染狀態(tài)時(shí)IFN-γ水平分析.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文陽(yáng)永憲中圖法分類(lèi)號(hào)R614學(xué)校代碼10661學(xué)號(hào)2011393密級(jí)碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文（專(zhuān)業(yè)學(xué)位）產(chǎn)婦產(chǎn)后早期認(rèn)知功能的影響因素及分析產(chǎn)婦產(chǎn)后早期認(rèn)知功能的影響因素及分析INFLUENCEANALYSISONTHECOGNITIVEFUNCTIONOFPUERPERAINEARLYPOSTPARTUMPERIOD2014年4月姓名名陽(yáng)永憲專(zhuān)業(yè)業(yè)麻醉學(xué)研究方向研究方向臨床麻醉導(dǎo)師師劉興奎劉興奎教授教授指導(dǎo)老師指導(dǎo)老師朱昭瓊朱昭瓊教授教授培養(yǎng)單位培養(yǎng)單位遵義醫(yī)學(xué)院遵義醫(yī)學(xué)院遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文陽(yáng)永憲目錄1論文1中英縮略詞對(duì)照表1中文摘要2英文摘要4前言7材料與方法9結(jié)果12討論17結(jié)論23參考文獻(xiàn)242綜述263致謝354作者簡(jiǎn)介37

簡(jiǎn)介：目的探討中老年原發(fā)性亞臨床型甲狀腺功能減退癥SCH患者是否伴有智力損害及甲狀腺激素替代治療的價(jià)值。方法選擇臨床確診的原發(fā)性亞臨床型甲狀腺功能減退癥老年患者50例，并選擇年齡、性別、教育程度相匹配的正常志愿者25例作為對(duì)照，分別應(yīng)用簡(jiǎn)易精神狀態(tài)測(cè)量表MMSE和劍橋老年人認(rèn)知測(cè)定量表中國(guó)修訂版CAMCOGC檢測(cè)基礎(chǔ)水平的認(rèn)知功能，同時(shí)檢測(cè)甲狀腺激素水平。對(duì)原發(fā)性亞臨床型甲狀腺功能減退癥患者按接診單雙號(hào)順序隨機(jī)分為左旋甲狀腺素替代治療組和安慰劑治療組，干預(yù)半年后重復(fù)上述檢測(cè)。結(jié)果服藥前老年亞甲減患者的FT3、FT4雖在正常范圍內(nèi)，但顯著低于正常對(duì)照組P005。安慰劑組服藥后TSH水平變化未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，F(xiàn)T4水平無(wú)明顯改變，F(xiàn)T3，水平略為降低。替代治療組服藥后所有受試者TSH水平均在3個(gè)月內(nèi)恢復(fù)至正常范圍1304±788MIU／LVS204±O65MIU／L，且與正常對(duì)照組TSH水平接近P099；FT3、FT4略高于正常對(duì)照組P005。左旋甲狀腺素替代治療6個(gè)月后TSH10MIU／L患者的CAMCOG總分、記憶、思維及語(yǔ)言分值增加有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；總分小于79分的由5例33％減為2例15％，最低分78分；而TSH10MIU／L患者結(jié)果相似，總分小于79分的由4例40％減為2例20％，最低分77分。安慰劑組中所有患者包括TSH10MIU／L及TSH005，各分測(cè)驗(yàn)除填圖P005外均未顯示有城鄉(xiāng)差別。服藥前亞甲減患者的盯3、FT4雖在正常范圍內(nèi)，但顯著低于正常對(duì)照組PO01；CWLSC中全部亞項(xiàng)分值顯著低于正常對(duì)照組。安慰劑組服藥后TSH水平變化未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，F(xiàn)T4水平無(wú)明顯改變，F(xiàn)T3水平略為降低。替代治療組服藥后所有受試者TSH水平均在3個(gè)月內(nèi)恢復(fù)至正常范圍1371±756MLU／LVS14L±O49MLU／LP0001，TT3和TSH略高于正常對(duì)照組P005。服藥后，替代治療組的CWLSC中除木塊圖以外的¨個(gè)亞項(xiàng)均呈現(xiàn)顯著改善P000，安慰劑治療后亦有5個(gè)亞項(xiàng)有顯著改善PO05。為進(jìn)一步消除安慰劑效應(yīng)的影響，我們對(duì)替代治療組和安慰劑組中每位患者服藥前后認(rèn)知量表分值改善幅度進(jìn)行了比較，結(jié)果顯示兒童及青少年SCH患者接受替代治療后分類(lèi)、領(lǐng)悟、編碼以上FO025、知識(shí)、填圖、言語(yǔ)量表總分、全量表總分以上P0008的改善顯著優(yōu)于接受安慰劑治療者，操作量表的改善不優(yōu)于安慰劑。半年后，替代治療組操作量表、領(lǐng)悟的分值仍偏低于正常對(duì)照組P000，而安慰劑治療后有10個(gè)亞項(xiàng)分值顯著低于對(duì)照組PO04。結(jié)論兒童及青少年亞臨床型甲狀腺功能減退癥患者存在明顯且廣泛認(rèn)知功能損害，替代治療有助于認(rèn)知功能的改善，尤其是言語(yǔ)能力，而操作能力的損傷可能難以恢復(fù)或需要較長(zhǎng)時(shí)間。

簡(jiǎn)介：第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文腺病毒介導(dǎo)的RNA干擾抑制VEGF及ANG2基因表達(dá)治療肺腺癌的實(shí)驗(yàn)研究姓名李白翎申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)外科學(xué)（胸心外科）指導(dǎo)教師黃盛東徐志云20080601獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。學(xué)位論文作者簽名簽字日期2008年4月29日學(xué)位論文使用授權(quán)書(shū)聲明本人完全了解第二軍醫(yī)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤(pán)，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)第二軍醫(yī)大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書(shū)學(xué)位論文作者簽名簽字日期2008年4月29日導(dǎo)師簽名簽字日期2008年4月29日

簡(jiǎn)介：碩士專(zhuān)業(yè)學(xué)位論文論文題目RGD修飾的腺病毒介導(dǎo)ING4和PTEN雙基因?qū)θ税籽〖?xì)胞的抑制作用研究生姓名黃晨指導(dǎo)教師姓名繆競(jìng)誠(chéng)專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)免疫學(xué)研究方向細(xì)胞與分子免疫論文提交日期2014年4月

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多慢病毒介導(dǎo)的血小板特異性表達(dá)FIX基因治療血友病B小鼠的研究.pdf精彩內(nèi)容。

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簡(jiǎn)介：病毒是一類(lèi)嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的病原體。研究表明有60％的疾病是由病毒感染引起的而病毒感染性疾病已成為我國(guó)人口死亡的主要原因之一。新型病毒的不斷出現(xiàn)如人類(lèi)免疫缺陷病毒非典型性肺炎病毒等則對(duì)抗病毒藥物的開(kāi)發(fā)提出更高的要求。病毒是一類(lèi)細(xì)胞內(nèi)病原體其基本結(jié)構(gòu)是核酸和蛋白質(zhì)外殼必須利用活細(xì)胞宿主的各種生物化學(xué)機(jī)制進(jìn)行復(fù)制。病毒的結(jié)構(gòu)、酶和復(fù)制機(jī)制均是抗病毒藥物的作用靶點(diǎn)。但目前臨床所用的抗病毒藥物存在著毒副作用大、作用不徹底等缺陷因此開(kāi)發(fā)新型抗病毒藥物一直藥物研究的熱點(diǎn)之一。從植物中發(fā)現(xiàn)天然抗病毒藥物是開(kāi)發(fā)抗病毒藥物的重要途徑。特別是我國(guó)的傳統(tǒng)中醫(yī)藥和民族民間藥物蘊(yùn)藏著豐富的寶藏在發(fā)掘新型抗病毒有效物質(zhì)和天然藥物方面有著十分廣闊的前景。本研究分兩部分分別研究了揚(yáng)子毛茛和石龍芮抗乙型肝炎病毒以及臭靈丹抗流感病毒和單純皰疹病毒的作用從中發(fā)現(xiàn)了一些具有低毒高效的抗病毒化合物為新型抗病毒藥物的研究奠定了基礎(chǔ)。第一部分、揚(yáng)子毛茛和石龍芮抗乙型肝炎病毒研究乙型肝炎病毒HEPATITISBVIRUSHBV感染嚴(yán)重威脅著我國(guó)人民的生命健康和社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展。目前我國(guó)總?cè)丝诘?0感染或既往感染過(guò)HBV而慢性HBV感染人數(shù)占全世界慢性HBV感染人數(shù)的一半以上。目前臨床一線的抗HBV藥物有拉米夫定干擾素等這些藥物均存在毒副作用及耐藥性等問(wèn)題所以開(kāi)發(fā)新型的抗HBV藥物已成為當(dāng)今國(guó)內(nèi)外新藥研究的熱點(diǎn)。毛茛屬植物在我國(guó)資源豐富產(chǎn)量大一般具有小毒有利濕退黃、溫寒止痛、散寒通滯等功效主要用于治療肝炎、黃疸、瘧疾、偏頭痛、胃痛、扁桃體炎等?，F(xiàn)代藥理研究表明毛茛屬植物具有抗腫瘤、抗菌、抗病毒等活性。我們?cè)诜蛛x純化兩種毛茛屬植物揚(yáng)子毛茛和石龍芮的化合物的基礎(chǔ)上，以HEPG2215細(xì)胞為模型，測(cè)定從揚(yáng)子毛茛和石龍芮提取的共19種化合物的抗HBV活性。樣品由本研究組植化室提供，分別為芹菜素4OAL鼠李糖苷、芹菜素7OΒD葡萄糖4OAL鼠李糖苷、芹菜素8CAL阿拉伯糖苷、芹菜素8CΒD半乳糖苷、小麥黃素7OΒD葡萄糖苷、小麥黃素、木犀草素、東莨菪內(nèi)酯、馬栗樹(shù)皮素、濱蒿內(nèi)酯、阿魏酸、原兒茶酸、小毛茛內(nèi)酯、豆甾4烯36二酮、豆甾醇、二十烷酸、Β谷甾醇、6羥基甲氧基香豆素以及原兒茶醛。藥物對(duì)細(xì)胞的毒性試驗(yàn)胰酶消化細(xì)胞，以1105個(gè)ML濃度接種96孔板，每孔02ML，37℃，5CO2培養(yǎng)24H，待細(xì)胞貼壁后，換用10倍系列稀釋的含藥培養(yǎng)液，每個(gè)樣品配制4種濃度，每濃度各3個(gè)復(fù)孔，同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照。每4天換含樣品的培養(yǎng)基，第12天以MTT法測(cè)定樣品對(duì)細(xì)胞的毒性作用。藥物對(duì)HBV復(fù)制的抑制實(shí)驗(yàn)以LX105個(gè)ML濃度接種96孔板，每孔02ML，37℃，5CO2培養(yǎng)24H，根據(jù)藥物毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選用IC10為最大實(shí)驗(yàn)濃度，共設(shè)3個(gè)劑量組，每濃度各3復(fù)孔，同時(shí)設(shè)立空白細(xì)胞對(duì)照。每4天換含樣品的培養(yǎng)基，第12天收獲培養(yǎng)上清，同時(shí)測(cè)定乙型肝炎表面抗原HEPATITISSURFACEANTIGEN，HBSAG，乙型肝炎E抗原HEPATITISEANTIGEN，HBEAG及HBVDNA。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，6羥基7甲氧基香豆素對(duì)HEPG2215細(xì)胞分泌HBSAG，HBEAG有不同程度的抑制作用，而在實(shí)驗(yàn)濃度下，拉米夫定則無(wú)明顯的抑制作用。我們用定量PCR法測(cè)定了藥物作用后HEPG2215細(xì)胞培養(yǎng)上清中HBVDNA濃度，結(jié)果顯示芹菜素4OAL鼠李糖苷、芹菜素7OΒD葡萄糖4OAL鼠李糖苷、小麥黃素7OΒD葡萄糖苷和小麥黃素對(duì)HEPG2215細(xì)胞HBVDNA的復(fù)制有不同程度的抑制作用，且隨樣品濃度增大其抑制作用增強(qiáng)。為了確證定量PCR試驗(yàn)的準(zhǔn)確性，我們還用斑點(diǎn)雜交法測(cè)定有上述活性樣品處理的HEPG2215細(xì)胞培養(yǎng)上清中HBVDNA，試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了上述4個(gè)樣品對(duì)HBVDNA復(fù)制的抑制作用。由于目前臨床使用的一些抗病毒藥物對(duì)肝臟等重要器官有一定的毒副作用，而研究表明這是由于這些藥物對(duì)線粒體功能的抑制所致。因此，我們采用了多重PCR法測(cè)定樣品處理后HEPG2215細(xì)胞中線粒體高變區(qū)DNA和持家基因ΒACTIN之間的比例，以此確定樣品對(duì)線粒體是否有抑制作用。實(shí)驗(yàn)表明，上述4個(gè)樣品對(duì)HEPG2215細(xì)胞線粒體基因復(fù)制并無(wú)抑制作用，結(jié)果證實(shí)這些樣品的安全性。綜上所述，我們測(cè)定了從揚(yáng)子毛茛和石龍芮中分離出的19種化合物的抗HBV活性，結(jié)果表明芹菜素4OAL鼠李糖苷、芹菜素7DΒD葡萄糖4OAL鼠李糖苷、小麥黃素7OΒD葡萄糖苷和小麥黃素等4個(gè)化合物對(duì)HEPG2215細(xì)胞HBVDNA的復(fù)制有著抑制作用，而6羥基7甲氧基香豆素對(duì)HEPG2215細(xì)胞HBSAG，HBEAG的表達(dá)有一定的抑制作用。我們同時(shí)以臨床使用的拉米夫定作為陽(yáng)性對(duì)照藥，實(shí)驗(yàn)表明，其對(duì)HEPG2215細(xì)胞HBVDNA地復(fù)制有很強(qiáng)的抑制作用，但對(duì)HBSAG，HBEAG表達(dá)基本無(wú)影響。芹菜素4OAL鼠李糖苷、芹菜素7OΒD葡萄糖4OAL鼠李糖苷、小麥黃素7OΒD葡萄糖苷和小麥黃素等4個(gè)化合物均屬黃酮苷類(lèi)化合物，而黃酮苷類(lèi)化合物有著明顯的抗菌、抗病毒和保護(hù)心臟等作用。這些化合物抗HBV的作用機(jī)理還尚待研究，但從其對(duì)HBV作用效果和拉米夫定相比較，其都對(duì)HBVDNA的復(fù)制有抑制作用，而對(duì)HBSAG，HBEAG表達(dá)基本無(wú)影響，因此我們推測(cè)其抗HBV的機(jī)理有可能在于對(duì)DNA聚合酶的抑制作用。總之，揚(yáng)子毛茛顯示出較強(qiáng)的抑制乙型肝炎病毒復(fù)制的活性，有待于進(jìn)一步深入研究并開(kāi)發(fā)成治療乙型肝炎的藥物制劑。本研究首次證實(shí)了毛茛屬植物悠久的治療肝炎的藥用歷史的科學(xué)依據(jù)，揭示了揚(yáng)子毛莨抑制乙型肝炎病毒復(fù)制的物質(zhì)基礎(chǔ)。第二部分、臭靈丹抗病毒研究臭靈丹LAGGERAPTERODONTADCBENTH為云南民間的常用中草藥，本品首載于滇南本草“其味苦、辛、性寒，有毒。陰中之剛也，治風(fēng)熱積毒，臟腑不和。通行十二經(jīng)絡(luò)，發(fā)散瘡癰”。具有清熱解毒、消腫拔膿之功效。據(jù)現(xiàn)代研究資料表明，臭靈丹的主要化學(xué)成分為黃酮類(lèi)化合物、倍半萜類(lèi)化合物等，其具有祛痰和抗腫瘤的作用，用于流行性感冒、呼吸道感染、扁桃體炎、腮腺炎、口腔炎、咽喉炎、支氣管炎、瘧疾等疾病的治療。本研究所用臭靈丹全草采自云南省騰沖縣，由中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所彭華教授鑒定為臭靈丹LAGGERAPTERODONTADCBENTH，藥材存放中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所西南植物化學(xué)及植物資源國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室NO200308LP。用熱水醇提法制備臭靈丹提取物，用三氯化鐵鐵氰化鉀顯色法測(cè)定提取物中總酚含量，并用HPLC法測(cè)定提取物中異綠原酸含量。結(jié)果顯示，臭靈丹提取物中主要成分為酚類(lèi)物質(zhì)，總酚占提取物的530，而異綠原酸占臭靈丹提取物的38，為酚類(lèi)化合物中的主要成分。細(xì)胞長(zhǎng)成單層的96孔板，棄去培養(yǎng)液，加入100TCIDSO病毒液，37℃、5?2下吸附2H，棄去病毒液，加入2倍連續(xù)稀釋的被試樣品，每濃度3孔，37℃、5?2下培養(yǎng)3天，顯微鏡下觀察細(xì)胞病變，記錄病變程度（CYTOPATHICEFFECT，CPE），計(jì)算樣品對(duì)病毒的抑制率及半數(shù)抑制濃度IC50。結(jié)果表明，臭靈丹提取物及異綠原酸體外對(duì)L型單純皰疹病毒和、2型單純皰疹病毒和甲型人流感病毒均有較強(qiáng)的抑制作用，異綠原酸應(yīng)為臭靈丹提取物中抗病毒的主要活性成分。用雞胚法測(cè)定臭炅丹提取物對(duì)流感病毒的抑制作用，將不同稀釋度的藥液分別注射025ML于雞胚中，半小時(shí)后經(jīng)相同途徑注射100EIDSO半數(shù)感染量的病毒01ML，孵育5天。收集尿囊液，測(cè)其血凝效價(jià)滴度。結(jié)果表明，臭靈丹提取物濃度為10MG胚劑量組對(duì)流感病毒有明顯的抑制作用。以滴鼻法感染小鼠致小鼠流感病毒感染模型，并以此測(cè)定臭靈丹提取物對(duì)流感病毒致小鼠出血性肺炎的肺指數(shù)和肺指數(shù)抑制作用，以及對(duì)流感病毒致小鼠病變的保護(hù)作用。本研究表明，臭靈丹提取物及異綠原酸在體外能有效抑制1型單純皰疹病毒和、2型單純皰疹病毒和甲型人流感病毒的復(fù)制，同時(shí)臭靈丹提取物能有效改善甲型流感病毒致小鼠肺炎病變并能顯著降低病毒致小鼠死亡率。本研究為臭靈丹用于治療病毒感染性疾病提供了有力的證據(jù)。

簡(jiǎn)介：冠心病CONARYHEARTDISEASE，CAD的病理基礎(chǔ)是動(dòng)脈粥樣硬化，是目前發(fā)病率和死亡率最高的疾病，其發(fā)病機(jī)制尚未完全明了。動(dòng)脈粥樣硬化有三個(gè)階段病變的起始階段，加速階段和并發(fā)癥階段例如心肌梗死。病毒感染可能會(huì)與一個(gè)或全部過(guò)程有關(guān)，如果病毒感染與疾病的起始階段有關(guān)，那就是動(dòng)脈粥樣硬化的病因。如果感染在已發(fā)生硬化后的加速階段，那就被認(rèn)為是危險(xiǎn)因素。近年來(lái)大量的血清學(xué)、病理學(xué)及動(dòng)物模型等研究提示，病毒感染在AS的發(fā)病過(guò)程中可能起極其重要的作用。目的本課題擬對(duì)CAD忠者心絞痛、心肌梗死、隱匿型病毒近期感染巨細(xì)胞病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒、單純皰疹病毒、柯薩奇病毒狀況進(jìn)行調(diào)查，結(jié)合CKMB心肌損傷指標(biāo)，分析多種病毒感染與CAD近期發(fā)作的關(guān)系。方法1、標(biāo)本來(lái)源2005年8月12月濟(jì)寧市人民醫(yī)院和濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院心內(nèi)科住院的CAD病人231人，其中急性心肌梗死AMI41例，心絞痛79例，隱匿性CAD111例。健康對(duì)照選擇同時(shí)期老干部健康查體者365人。2、血清肌酸肌酶CREATINEKINASE，CK同工酶CKMB檢測(cè)試劑用上海復(fù)星生物技術(shù)公司生產(chǎn)的試劑盒，儀器用日本產(chǎn)AU600型大型生化分析儀。3、近期感染病毒狀況的檢測(cè)用ELISA方法。用人巨細(xì)胞病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒、單純皰疹病毒、柯薩奇病毒等特異抗原包被ELISA板，檢測(cè)患者血清IGM抗體，通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定A值，PN值≧21判斷為陽(yáng)性。計(jì)算不同組別患者感染病毒的陽(yáng)性率，并進(jìn)行組間比較。4、統(tǒng)計(jì)分析全部結(jié)果擬采用SPSS100統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。結(jié)果1、CAD人群HCMV近期感染率顯著高于健康查體人群在對(duì)照組中，365例健康查體人群HCMVIGM的陽(yáng)性率為230％84例，而在231例CAD人群中，HCMVIGM的陽(yáng)性率為411％95例Χ22208，P＜00001。2、CAD人群中流感病毒近期感染率顯著高于健康查體人群。對(duì)照組中流感病毒的陽(yáng)性率為178％65例，而在231例CAD人群中流感病毒的陽(yáng)性率為299％69例Χ2118，P＜0005。3、CAD人群呼吸道合胞病毒、柯薩奇病毒和單純皰疹病毒的陽(yáng)性率同健康查體人群相比無(wú)顯著差異。呼吸道合胞病毒陽(yáng)性率為221％51例Χ2328，P＞005，柯薩奇病毒陽(yáng)性率182％42例Χ2101P＞005，單純皰疹病毒陽(yáng)性率為165％38例Χ2334，P＞005。4、急性CAD病人的HCMVIGM檢出率要顯著高于慢性CAD病人。①與心絞痛組和隱匿性CAD組相比，急性心梗組病人巨細(xì)胞病毒感染陽(yáng)性率585％392％；585％360％有顯著性差異Χ2值分別為404，P＜005和621，P＜0025；②心絞痛組和隱匿性CAD組相比巨細(xì)胞病毒感染陽(yáng)性率無(wú)顯著性差異Χ2119，P＞005；③同其他兩組相比，急性心梗組病人流感病毒感染陽(yáng)性率366％291％；366％279％無(wú)顯著性差異Χ2值分別為108、067，P＞005。5、CKMB陽(yáng)性組CAD人群HCMVIGM檢出率要顯著高于CKMB陰性組CAD人群。根據(jù)CAD病人的CKMB檢測(cè)結(jié)果將231例CAD病人分成CKMB陽(yáng)性組和CKMB陰性組CKMB檢測(cè)值≥18UL的為陽(yáng)性陽(yáng)性組共有104人，陰性組共有127人。兩組病人巨細(xì)胞病毒陽(yáng)性率有顯著性差異512％374％，Χ2403，P＜005；流感病毒感染的陽(yáng)性率無(wú)顯著性差異357％293％，Χ2109，P＞005。6、冠心病病人的病毒感染絕大多數(shù)是多病毒混合感染，且以巨細(xì)胞病毒感染為主。95例HCMVIGM陽(yáng)性人群中有84人血清檢出兩種以上病毒IGM的混合感染率為884％P＜00001，合并三種以上病毒感染的混合感染率為632％P＜00001。其中HCMV合并流感病毒感染陽(yáng)性率663％63例P＜00001，合并呼吸道合胞病毒陽(yáng)性率495％47例P＜00001，合并柯薩奇病毒陽(yáng)性率400％38例P＜00001，合并單純皰疹病毒陽(yáng)性率358％34例P＜00001。而在健康查體人群中HCMVIGM陽(yáng)性合并流感病毒陽(yáng)性的陽(yáng)性率為177％，合并呼吸道合胞病毒陽(yáng)性的陽(yáng)性率為141％，合并柯薩奇病毒陽(yáng)性的陽(yáng)性率為139％，合并單純皰疹病毒陽(yáng)性的陽(yáng)性率為151％。檢出兩種以上病毒IGM的混合感染率為204％，合并三種以上病毒感染的混合感染率為132％。結(jié)論1、CAD人群HCMV近期感染率顯著高于健康查體人群。2、CAD人群中流感病毒近期感染率顯著高于健康查體人群。3、CAD人群呼吸道合胞病毒、柯薩奇病毒和單純皰疹病毒的近期感染率同健康查體人群相比無(wú)顯著差異。4、急性CAD病人的HCMVIGM檢出率要顯著高于慢性CAD病人。5、CKMB陽(yáng)性組CAD人群HCMVIGM檢出率要顯著高于CKMB陰性組CAD人群。6、冠心病病人的病毒感染絕大多數(shù)是多病毒混合感染，且以巨細(xì)胞病毒感染為主。

簡(jiǎn)介：丙型肝炎病毒HEPATITISCVIRUS，HCV的感染呈全球性分布，我國(guó)也屬于HCV感染流行區(qū)。HCV是慢性肝炎、肝炎后肝硬化的主要病因之一，并與原發(fā)性肝細(xì)胞癌的發(fā)生關(guān)系十分密切。HCV非結(jié)構(gòu)蛋白5ANS5A是HCVRNA復(fù)制的重要組成部分。HCVNS5A能通過(guò)多種途徑激活細(xì)胞內(nèi)多種與細(xì)胞增殖有關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子如NFKB、STAT3PCNA等并能抑制由TNFA及P53誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。SURVIVIN是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種凋亡抑制蛋白，是凋亡抑制蛋白家族INHIBITOFAPOPTOSISIAP中的新成員，也是迄今發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的凋亡抑制因子，在人類(lèi)幾乎所有惡性腫瘤中均有明顯的表達(dá)。本研究利用細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HCVNS5A表達(dá)質(zhì)粒P，用免疫細(xì)胞化學(xué)染色方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染HCVNS5A是否成功，再通過(guò)RTPCR和WESTERNBLOTTING檢測(cè)方法探討HCVNS5A對(duì)SURVIVIN基因表達(dá)的影響，了解HCVNS5A促進(jìn)細(xì)胞增殖和抑制細(xì)胞凋亡雙重生物學(xué)效應(yīng)的分子機(jī)制，探討HCV致原發(fā)性肝細(xì)胞癌的發(fā)病機(jī)理。方法1HOVNS5A表達(dá)質(zhì)粒鑒定采用雙酶切方法將P質(zhì)粒進(jìn)行酶切，產(chǎn)物經(jīng)10％瓊脂糖凝膠電泳。2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)染前，在50ML培養(yǎng)瓶上種植5X10HEPG2細(xì)胞，按美國(guó)生命技術(shù)公司提供脂質(zhì)體LIPOFECTIN2000轉(zhuǎn)染程序，將P、P或P質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)胞，24小時(shí)后換為10％胎牛血清培養(yǎng)基，72小時(shí)后收獲。3免疫細(xì)胞化學(xué)染色免疫細(xì)胞化學(xué)法ABC法檢測(cè)HCVNS5A蛋白的表達(dá)，按說(shuō)明書(shū)介紹的方法進(jìn)行。4RTPCR按RNA提取劑TRIZOL試劑說(shuō)明書(shū)，分別提取上述轉(zhuǎn)染細(xì)胞的總RNA，用DNASE消化其中DNA雜質(zhì)。取4UGRNA，用MMLV逆轉(zhuǎn)錄為CDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，1％瓊脂糖凝膠電泳觀察結(jié)果。5WESTERNBLOTTING取上述各種處理細(xì)胞LXL0個(gè)，冰凍PBS洗3次，加裂解液，收集全蛋白上清。取50UG全蛋白在不連續(xù)SDSPAGE膠電泳分離，電轉(zhuǎn)移至纖維膜，免疫染色。結(jié)果1P質(zhì)粒經(jīng)酶切后，可得到預(yù)期大小的HCVNS5A酶切片段。2轉(zhuǎn)染P質(zhì)粒組細(xì)胞內(nèi)有HCVNS5A蛋白表達(dá)，呈現(xiàn)棕黃色顆粒，分布在細(xì)胞漿中，以胞核周?chē)蠲黠@。未轉(zhuǎn)染組和轉(zhuǎn)染P空質(zhì)粒載體組細(xì)胞內(nèi)則無(wú)HCVNS5A蛋白表達(dá)。3利用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)，將分別轉(zhuǎn)染HCVNS5A質(zhì)粒和空質(zhì)粒的肝癌細(xì)胞株HEPG2，用RTPCR檢測(cè)SURVIVINMRNA的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)組SURVIVINMRNA表達(dá)明顯高于空白載體組和空白對(duì)照組P005，說(shuō)明空質(zhì)粒對(duì)SURVIVINMRNA表達(dá)無(wú)影響，主要是HCVNS5A激活SURVIVINMRNA表達(dá)。4利用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)，分別將P質(zhì)粒、P空質(zhì)粒、P質(zhì)粒P質(zhì)粒、P質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至肝癌肝細(xì)胞株HEPG2，用RTPCR檢測(cè)各轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的HEPG2中SURVIVINMRNA的表達(dá)。結(jié)果表明，轉(zhuǎn)染P質(zhì)粒組條帶明顯高于轉(zhuǎn)染P空質(zhì)粒組、轉(zhuǎn)染PP質(zhì)粒組、轉(zhuǎn)染P質(zhì)粒組P005，說(shuō)明HCVNS5A可能是通過(guò)NFКB調(diào)節(jié)SURVIVINMRNA表達(dá)。5利用WESTERNBLOTTING檢測(cè)兩種瞬時(shí)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的HEPG2和未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的HEPG2中SURVIVIN蛋白的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)組SURVIVIN蛋白表達(dá)明顯高于空白載體組和空白對(duì)照組，說(shuō)明HCVNS5A促進(jìn)SURVIVIN蛋白表達(dá)。結(jié)論1HCVNS5A表達(dá)質(zhì)粒能成功轉(zhuǎn)染至肝癌肝細(xì)胞株HEPG2中，表達(dá)HCVNS5A蛋白。2HCVNS5A激活SURVIVINMRNA的表達(dá)。3HCVNS5A可能是通過(guò)NFКB調(diào)節(jié)SURVIVIN基因表達(dá)。4HCVNS5A促進(jìn)SURVIVIN蛋白的表達(dá)。

簡(jiǎn)介：上海第二醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文腺病毒介導(dǎo)的基因治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的實(shí)驗(yàn)研究姓名陳沁申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專(zhuān)業(yè)神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師陳生弟20050501蝌笫二隈科人學(xué)博F。論文腺病毒介導(dǎo)的基因治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的實(shí)驗(yàn)研究中文摘要成年哺乳類(lèi)動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)CNS的損傷包括腦、脊髓的缺血或外傷和退行性疾病如帕金森病，PD往往導(dǎo)致永久性的功能障礙。這是由于CNS缺乏再生或殘存的神經(jīng)組織不具有足夠的重新組建環(huán)路的能力。大量研究表明應(yīng)用神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，如腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子BDNF，膠質(zhì)源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子GDNF治療神經(jīng)退行性疾病如PD取得良好的療效，并可促進(jìn)損傷后神經(jīng)的再生、部分功能獲得改善。然而，由于考慮到神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子不能通過(guò)血腦屏障以及反復(fù)多次注射或通過(guò)微泵直接用藥所出現(xiàn)的問(wèn)題，所以通過(guò)腺病毒介導(dǎo)基因治療成為一較有前景的治療策略。在本課題的系列實(shí)驗(yàn)中，我們研究了腺病毒及輔助相關(guān)型腺病毒介導(dǎo)的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子基因治療在中樞神經(jīng)系統(tǒng)再生及退行性疾病中的應(yīng)用。本課題分為五部分。第一部分高表達(dá)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素3促進(jìn)脊髓損傷后軸突的重塑由于有限的再生和軸突芽生能力，成年動(dòng)物脊髓損傷后幾乎不能自愈。為探討在遠(yuǎn)離脊髓損傷區(qū)局部持續(xù)釋放神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)索3NT3是否具有支持軸突重塑的作用，我們分別于皮質(zhì)脊髓束CST損傷后2周或4月給予攜帶有NT3基因的免疫缺陷型腺病毒ADVNT3治療。首先，在體外實(shí)驗(yàn)確定ADVNT3的表達(dá)。然后建立在延髓水平切斷單側(cè)CST的脊髓損傷動(dòng)物模型，并通過(guò)坐骨神經(jīng)給予ADVNT3逆轉(zhuǎn)運(yùn)到脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元。將生物素葡聚糖胺BDA注射于未損傷側(cè)的感覺(jué)運(yùn)動(dòng)皮層以標(biāo)記其在脊髓內(nèi)的CST。利用形態(tài)學(xué)檢測(cè)方法檢測(cè)在腰髓NT3表達(dá)區(qū)，未損傷側(cè)的CST發(fā)出軸突穿過(guò)中線進(jìn)入損傷側(cè)的軸突側(cè)枝生長(zhǎng)數(shù)量。結(jié)果顯示在損傷后2周給予NT3可以促進(jìn)軸突側(cè)枝生長(zhǎng)，并且這些軸突可存活6個(gè)月。與此相對(duì)的是，在損傷后4個(gè)月給予ADVNT3，不能誘導(dǎo)軸突側(cè)枝生長(zhǎng)。這一結(jié)果提示W(wǎng)ALLERIAN變性WDNO％為軸突重塑提供支持，進(jìn)一步明確在WD中的共作用分子，將為慢性脊髓損傷有效的基因治療提供基礎(chǔ)。第二部分炎性反應(yīng)影響脊髓損傷修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究

簡(jiǎn)介：目的評(píng)價(jià)抗體特異性指數(shù)在病毒性腦炎診斷中的意義，了解此種方法在病毒性腦炎診斷中的敏感性與特異性。期望為病毒性腦炎尋找一種具有理想的敏感性和高度特異性的病原學(xué)診斷方法，通過(guò)一種廉價(jià)、快捷、方便的方法來(lái)提高病毒性腦炎的診斷水平，為病毒性腦炎的臨床治療和發(fā)病機(jī)制研究提供幫助。并進(jìn)一步研究不同類(lèi)型中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的腦脊液細(xì)胞學(xué)特點(diǎn)。方法臨床診斷的病毒性腦炎患者36例，入院三天內(nèi)留取血清和第一份腦脊液標(biāo)本，第二到第三周留取第二份腦脊液標(biāo)本。所有標(biāo)本凍存于20℃低溫冰箱，分批進(jìn)行檢測(cè)。用德國(guó)歐蒙公司提供的ELISA試劑盒，半定量檢測(cè)標(biāo)本中病毒特異性抗體IGG相對(duì)濃度。實(shí)驗(yàn)中，血清稀釋404倍，腦脊液稀釋2倍；通過(guò)四個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)本酶標(biāo)檢測(cè)結(jié)果代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算病毒特異性抗體IGG濃度。免疫檢驗(yàn)室通過(guò)散射速率比濁法分別檢測(cè)腦脊液和配對(duì)血清中IGG總量。腦脊液中病毒特異性抗體占腦脊液總IGG比例與血清中病毒特異性抗體占血清總IGG比例之間的比值，即CSF血清相對(duì)比值CSQREL抗體特異性指數(shù)；此比值大于15視為陽(yáng)性。實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)單純皰疹病毒1型HSV1，EB病毒EBV，人類(lèi)巨細(xì)胞病毒HCMV；通過(guò)病毒抗體特異性指數(shù)的陽(yáng)性結(jié)果建立病毒性腦炎的病原學(xué)診斷。實(shí)驗(yàn)設(shè)立中樞神經(jīng)系統(tǒng)非病毒性感染性疾病患者結(jié)核性腦膜炎14例，化膿性腦膜炎2例，腦囊蟲(chóng)病4例，脫髓鞘疾病患者多發(fā)性硬化5例，吉蘭巴雷綜合征2例為對(duì)照組。對(duì)兩組患者病毒抗體特異性指數(shù)陽(yáng)性率進(jìn)行比較，來(lái)評(píng)價(jià)病毒抗體特異性指數(shù)作為病原學(xué)診斷方法的敏感性和特異性。動(dòng)態(tài)觀察兩組患者的腦脊液細(xì)胞學(xué)，對(duì)兩組患者的腦脊液細(xì)胞學(xué)進(jìn)行分析比較，進(jìn)一步探討病毒性腦炎的腦脊液細(xì)胞學(xué)表現(xiàn)。對(duì)研究組和對(duì)照感染組結(jié)核性腦膜炎，化膿性腦膜炎，腦囊蟲(chóng)病的部分臨床資料進(jìn)行比較，分析病毒感染與其它類(lèi)型感染在臨床表現(xiàn)上的差異。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS120軟件，計(jì)數(shù)資料采用X2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)Α005。結(jié)果1在研究組36例中通過(guò)病毒抗體特異性指數(shù)診斷為單純皰疹病毒性腦炎的6例17％，EB病毒性腦炎3例8％，巨細(xì)胞病毒性腦炎2例6％，總體陽(yáng)性率為31％。對(duì)照組27例中有一例臨床診斷為結(jié)核性腦膜炎，但檢測(cè)中EB病毒抗體特異性指數(shù)為陽(yáng)性。在研究組中未見(jiàn)到多種抗體重疊陽(yáng)性出現(xiàn)。兩組抗體特異性指數(shù)陽(yáng)性率比較，研究組為31％，對(duì)照組為4％，X25578，P0018。此種方法診斷病毒性腦炎的特異性為917％。2兩組的腦脊液細(xì)胞學(xué)都有很高的異常率，研究組為86％，對(duì)照組為78％，兩組間腦脊液細(xì)胞學(xué)的異常率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。病毒性腦炎患者腦脊液細(xì)胞學(xué)以淋巴細(xì)胞反應(yīng)為主，少數(shù)病例在早期見(jiàn)到嗜中性粒細(xì)胞增高現(xiàn)象。6例診斷為單純皰疹病毒性腦炎的患者腦脊液細(xì)胞學(xué)全部異常，其中2例患者腦脊液細(xì)胞學(xué)檢查見(jiàn)到紅細(xì)胞；2例EB病毒性腦炎和巨細(xì)胞病毒性腦炎患者腦脊液細(xì)胞學(xué)有異常，但未發(fā)現(xiàn)與病毒性腦炎腩脊液細(xì)胞學(xué)的一般表現(xiàn)存在差異。3研究組與對(duì)照感染組的部分臨床資料存在差異，其中精神異常、腦膜刺激征的出現(xiàn)率和腦電圖的異常率差異明顯。結(jié)論病毒抗體特異性指數(shù)，反映抗體在中樞神經(jīng)系統(tǒng)局部合成的情況，此指標(biāo)大于15提示特異性抗體在病毒感染中樞神經(jīng)系統(tǒng)后由鞘內(nèi)合成；此方法在病毒性腦炎的診斷中有著比較理想的敏感性和很高的特異性，其意義值得重視。繼續(xù)擴(kuò)大研究的樣本量，并增加檢測(cè)的病毒抗體的種類(lèi)，有可能提高此種方法檢測(cè)結(jié)果的總體陽(yáng)性率，近而得到一個(gè)更令人滿意的敏感性。作為一種廉價(jià)、快捷、方便的病原學(xué)診斷方法，有可能為病毒性腦炎的臨床治療和研究帶來(lái)巨大的幫助。流行病學(xué)資料和臨床表現(xiàn)是病毒性腦炎的診斷基礎(chǔ)，腦電圖檢查和腦脊液細(xì)胞學(xué)檢測(cè)是重要的輔助檢查措施，在病毒性腦炎的診斷中絕對(duì)不能疏漏。