中國多中心侵襲性酵母菌感染臨床相關科學研究方法體系的探索和建立.pdf

1、目的:分析中國醫(yī)院侵襲性真菌監(jiān)測網(wǎng)CHIF-NET2010-2014連續(xù)五年收集的侵襲性真菌感染分離的酵母菌的流行病學及抗真菌藥物敏感性，探索并完善真菌鑒定方法、藥敏方法、分子分型方法，耐藥機制研究，罕見真菌感染病例等相關模式研究，從而初步構建一套關于臨床重要真菌相關的科學研究方法體系。
　　方法:CHIF-NET2010-2014五年參加單位共65家，所有收集的菌株在中心實驗室統(tǒng)一使用分子生物學方法鑒定到種，使用紙片擴散法測定對

2、氟康唑、伏立康唑的藥物敏感性;對Vitek MALDI-TOF MS和Bruker Biotyper MALDI-TOF MS兩套質(zhì)譜系統(tǒng)進行評價研究;以羅倫隱球菌為例評價傳統(tǒng)酵母菌鑒定方法Vitek2Compact真菌鑒定卡和API20C AUX試劑條的鑒定準確性;以微量肉湯稀釋法為金標準評價商品化真菌藥敏試驗試劑盒ATB(⑩)FUNGUS3的性能;以隱球菌為例研究ITS分型、MLST等分子分型技術的鑒別能力;以季也蒙念珠菌為例，研究

3、ERG11基因與唑類耐藥的關系;以橡樹念珠菌為例，對罕見真菌感染病例的臨床特點進行首次報道。
　　結果:CHIF-NET2010-2014收集的9673株菌株共包含70個菌種，與分子鑒定結果相比，原始鑒定結果的準確率為85.9％。在所有菌種中，念珠菌屬最為常見（構成比占91.3％），其次為隱球菌屬(6.8％)、毛孢子菌屬(0.8％)和其他少見菌屬(1.2％)。在念珠菌屬中，白念珠菌仍是最常見的菌種(44.9％)，非白念珠菌的比例超

4、過了50％。Vitek MS v2.0能將96.7％的菌株正確鑒定至種水平;而Bruker Biotyper MALDI-TOF MS鑒定酵母菌的準確率可達98.8％，特別是念珠菌屬的鑒定能力更優(yōu)（準確率達99.4％）。根據(jù)紙片法藥敏結果，念珠菌屬對氟康唑和伏立康唑總體耐藥率為8.8％和3.8％，白念珠菌最為敏感，耐藥率不到1％;近平滑念珠菌復合體敏感性也相對較高，達90.8％和97.5％;光滑念珠菌對氟康唑和伏立康唑的耐藥率（或非野生

5、型）分別為19.0％和18.7％，而熱帶念珠菌對兩種藥物的耐藥率五年間上升較為明顯，從5％左右均上升到20％以上。Vitek2Compact系統(tǒng)鑒定26株菌為羅倫隱球菌，通過ITS測序僅確認兩株(7.7％)為羅倫隱球菌，API20C系統(tǒng)表現(xiàn)出相對更好的鑒定準確度(83.3％)。對于氟康唑和伏立康唑，ATB(⑧)FUNGUS3肉眼判讀和微量肉湯稀釋法的總分類一致率(CA)分別是95.5％和95.4％，相比之下，ATB全自動儀器判讀的準確性

6、明顯下降，對氟康唑和伏立康唑的總CA分別為77.2％和73.3％。MLST分型可將303株菌新型隱球菌分為12個ST型別，89.8％為ST5型，ST31型是第二大型別;7株格特隱球菌基因變異較大，分為5個ST型別。對164株季也蒙念珠菌的ERG11基因進行擴增和測序，通過比較氨基酸序列型的多態(tài)性，共鑒定出16個基因型，其中一些型別與唑類藥物敏感性密切相關。對氟康唑耐藥的橡樹念珠菌（C.quercitrusa）作為人類致病菌進行了首次報道

7、，并確認這3例菌株是來自H1醫(yī)院ICU病房的院內(nèi)感染暴發(fā)。
　　結論:CHIF-NET2010-2014五年連續(xù)監(jiān)測積累了大量珍貴的菌株及臨床信息資源。本項研究是國內(nèi)真菌領域內(nèi)時間跨度最大、參與醫(yī)院最多、涉及菌株數(shù)量最多的流行病學和藥物敏感性研究，填補了國內(nèi)相關領域的空白，為中國侵襲性真菌感染診治提供重要參考。初步搭建了國內(nèi)關于真菌鑒定方法、藥敏方法、分子分型方法、耐藥機制研究、罕見感染病例報道等臨床重要真菌相關的科學研究方法體系