miR-29c調(diào)控MMP2在胰腺癌轉移中的作用.pdf

1、目的:
　　研究miR-29c在胰腺癌侵襲轉移中的作用
　　方法:
　　1.RT-PCR檢測5株不同分化能力胰腺癌細胞株(PANC-1，BxPc-3，Hs766t，cFPAN，Capan1)的miR-29s的表達，Western Blot及明膠酶譜法檢測5株不同分化能力胰腺癌細胞MMP2的表達和活性，利用Spearman等級相關統(tǒng)計方法分析在胰腺癌細胞中miR-29s表達與MMP2表達的相關性。
　　2.通過轉染

2、miRNA mimic和miRNA inhibitor分別構建miR-29c的過表達和干擾表達;CCK-8檢測miR-29c表達對胰腺癌細胞增殖能力影響;Transwell遷移實驗和Transwell侵襲實驗分別檢測miR-29c表達對胰腺癌細胞遷移和侵襲能力的影響。
　　3.結合生物信息學預測和熒光素酶活性報告基因證實miR-29c調(diào)控MMP2表達的分子機制。
　　4.通過裸鼠原位胰腺癌種植模型篩選出自發(fā)性高肝轉移胰腺癌細

3、胞亞群(Hs766t、Hs766t-L1和Hs766t-L2)，分別檢測miR-29c和MMP2的表達，分析其表達與轉移能力的相關性;利用所獲得高肝轉移胰腺癌細胞活體驗證miR-29s對胰腺癌轉移能力的影響。
　　5.RT-PCR檢測胰腺癌組織及其癌旁組織miR-29c的表達，免疫組化檢測胰腺癌組織及其癌旁組織MMP2蛋白表達，分別分析其表達與臨床病理參數(shù)相關性;Kaplan-Meier統(tǒng)計方法分析miR-29c表達對胰腺癌預后的

4、影響。
　　結果:
　　1.在胰腺癌細胞中，miR-29c表達與MMP2蛋白表達呈負相關。
　　2.過表達miR-29c對胰腺癌細胞的增殖能力無影響，但可明顯抑制胰腺癌細胞的遷移和侵襲能力;干擾miR-29c表達后可顯著增強胰腺癌細胞的遷移和侵襲能力。
　　3.生物信息學預測提示:MMP2'UTR存在一個miR-29c結合位點;過表達miR-29c可顯著降低MMP2 mRNA和蛋白表達水平，干擾miR-29c表達

5、后可顯著上調(diào)MMP2mRNA和蛋白表達水平;miR-29c可顯著抑制野生型報告基因熒光素酶活性，而對突變型報告基因熒光素酶活性無影響。
　　4.通過裸鼠原位胰腺癌種植模型，體外分離并培養(yǎng)出自發(fā)性高肝轉移胰腺癌細胞亞群(Hs766t、Hs766t-L1和Hs766t-L2)，miR-29c表達與胰腺癌細胞轉移潛能呈負相關，而MMP2蛋白表達與胰腺癌細胞的轉移潛能呈正相關;利用高轉移潛能胰腺癌細胞Hs766t-L2構建裸鼠原位胰腺癌動

6、物模型，過表達miR-29c明顯抑制裸鼠原位胰腺癌自發(fā)性肝轉移。
　　5.在胰腺癌臨床樣本中，miR-29c的表達明顯低于其對應的癌旁組織，且與MMP2蛋白的表達呈負相關;miR-29c的表達與胰腺癌的分化程度、淋巴結轉移和TNM期相關;同時miR-29c的表達是影響胰腺癌預后的獨立因素。
　　結論:
　　1.在細胞水平和活體水平證實miR-29c通過靶向調(diào)控MMP2表達抑制胰腺癌侵襲轉移。
　　2.miR-29