染氡BEAS-2B細胞組蛋白乙?；瘜53和MGMT基因的影響.pdf

1、目的：人永生化支氣管上皮細胞（BEAS-2B）暴露于放射性氡，觀察BEAS-2B細胞暴露后組蛋白H3乙酰化改變情況及對P53和MGMT基因的影響，探究氡致肺癌早期細胞內相關分子生物學改變情況。
　　方法：BEAS-2B細胞用LHC-8無血清培養(yǎng)基于37℃,5％CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。設立對照組（C）和染氡組（Rn）。將處于對數(shù)生長期的細胞制備單細胞懸液，以每孔1×105個細胞的數(shù)量接種于Transwell膜上，第2天細胞貼壁后置于細胞氣

2、體染毒裝置中，Transwell膜上方氡持續(xù)泵入直接對細胞染氡，膜下方通入培養(yǎng)基保持細胞濕潤。氡濃度為20000bq/m3，染氡時間為30min，細胞染氡兩次記作染氡1代（Rn1）。每代染氡結束后收集細胞，一部分繼續(xù)下一次染氡，其余常規(guī)培養(yǎng)傳代，傳至第n代記作Rn1-n，共染氡10代，傳代40代。對照組暴露于氡本底值濃度下該裝置中，其余條件同染氡組。流式細胞儀檢測細胞的細胞周期、凋亡率及線粒體膜電位，軟瓊脂克隆形成實驗分析細胞惡性轉化程

3、度，染色質免疫共沉淀試驗檢測P53基因和MGMT基因啟動子區(qū)乙?；M蛋白H3水平，染色質免疫共沉淀聯(lián)合RT-PCR檢測P53基因和MGMT基因mRNA表達情況，Western blot檢測各組細胞P53和MGMT蛋白表達情況。
　　結果：（1）染氡后細胞G1期縮短，S期延長，染氡細胞傳代后晚期代數(shù)細胞凋亡率相比早期代數(shù)細胞降低，線粒體膜電位降低，細胞軟瓊脂克隆形成實驗結果顯示，BEAS-2B細胞在軟瓊脂中有較小的克隆形成率，但隨著

4、細胞染毒代數(shù)的增加以及傳代，軟瓊脂克隆形成率逐漸增高，染毒10代克隆形成率最高。（2）染氡細胞P53基因組蛋白H3乙酰化水平較對照組降低，MGMT基因組蛋白H3乙酰化水平較對照組增加。（3）組蛋白H3乙酰化修飾發(fā)生后P53基因表達和蛋白表達較對照組減少，MGMT基因和蛋白表達較對照組增加。
　　結論：1.染氡后細胞出現(xiàn)惡性轉化趨勢。2、染氡后細胞P53基因組蛋白H3乙?；浇档停琈GMT基因組蛋白H3乙?；缴摺?、組蛋白H