淫羊藿苷對自發(fā)性高血壓大鼠心肌細胞凋亡的干預作用及機制研究.pdf

1、目的：觀察淫羊藿苷（ICA）對自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）左心室重構及心肌細胞凋亡的干預作用，并探討其對線粒體調控的凋亡通路及內質網應激（ERS）調控的凋亡通路中相關因子的影響。
　　方法：28只14周齡雄性SHR隨機均分為模型組（SHR組），ICA低劑量組（10 mg/kg，ICA-L）、ICA中劑量組（20 mg/kg，ICA-M）、ICA高劑量組（40 mg/kg， ICA-H），經灌胃給予ICA混懸液每日一次至26周齡，7只

2、14周齡的雄性魏-凱二氏大鼠（WKY）作為空白對照組（WKY組），WKY組和SHR組均給與灌胃等體積雙蒸水，每周記錄各組大鼠體重變化、Kent Scientific CODA系統(tǒng)檢測大鼠血壓變化，采用VEVO2100小動物超聲檢測大鼠左心功能，12周后采用2％的戊巴比妥鈉腹腔注射0.2 mL/100g麻醉動物后處死動物取出心臟分離左心室計算左心質量指數；H&E染色觀察心臟形態(tài)變化，Masson三色染色法觀察左心室膠原沉積情況；TUNEL

3、染色觀察左心室心肌細胞凋亡情況，透射電子顯微鏡觀察左心室心肌細胞內線粒體等超微結構改變，RT-qPCR法檢測大鼠左心室組織中p53、Bcl-2、Bok、Bax、ATF-6、CHOP、IRE-1α、BAP31、ASK-1、ATF-4的mRNA水平；蛋白質印跡法（Western Blot）檢測左心室組織中p53、Bcl-2、Bok、Bax、cleaved caspase3、GRP78、p-PERK、ATF-6、ATF-4、CHOP、casp

4、ase12、c-Jun、ASK-1、JNK、DR5的含量。
　　結果：與WKY相比，SHR組血壓明顯上升，左心室短軸縮短率（FS）下降、射血分數（EF）減少、每搏輸出量（SV）減少、左室舒張末壓（LVEDP）增高（P＜0.05），左心質量指數增加（P＜0.05）。H&E染色可見SHR組心肌細胞肥大，間質炎癥細胞浸潤，肌絲部分斷裂且排列紊亂，Masson染色提示心肌間質膠原沉積增加，經統(tǒng)計膠原面積/總面積增加（P＜0.05）；電鏡下

5、SHR組可見心肌細胞內部分線粒體腫脹、聚集，線粒體嵴融合、并呈現(xiàn)堆積狀；TUNEL染色后發(fā)現(xiàn)心肌細胞凋亡增多，經統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)心肌細胞凋亡百分比明顯上升（P＜0.05）。左心室組織中p53、Bok、Bax、CHOP、BAP31、ASK-1、ATF-4、ASK-1的mRNA水平和蛋白質水平均上升（P＜0.05），Bcl-2的mRNA和蛋白水平降低（P＜0.05），而ATF-6、IRE-1α的mRNA水平無明顯變化，cleaved caspase

6、3、GRP78、p-PERK、ATF-6、caspase12、c-Jun、JNK、DR5的蛋白水平均明顯上調（P＜0.05）；給予ICA10、20、40 mg/kg干預后，均可減輕SHR血壓，降低SHR左心室FS、LVEDP及左心室質量指數（P＜0.05）；提高左心室EF、SV（P＜0.05），通過H&E染色、Masson染色和透射電鏡觀察可以發(fā)現(xiàn)與SHR組相比給予ICA各劑量治療后心肌細胞肥大減輕、心肌細胞排列趨于整齊，心肌間質中膠原

7、沉積有所減少，炎癥細胞浸潤情況減輕，心肌細胞內的線粒體形態(tài)也趨于正常未見明顯的線粒體腫脹、線粒體脊形態(tài)尚在；左心室組織中p53、Bok、Bax、CHOP、BAP31、ATF-4的mRNA水平和蛋白質水平均下調（P＜0.05），Bcl-2的mRNA和蛋白水平增加（P＜0.05），同時ATF-6、IRE-1α的mRNA水平也無明顯變化，cleaved caspase3、GRP78、p-PERK、ATF-6、caspase12、c-Jun、J