中介素對UUO大鼠模型間質血管生成的影響.pdf

1、目的：
　　以大鼠單側輸尿管梗阻(UUO)為腎間質纖維化模型，觀察中介素（Intermedin IMD）對UUO大鼠模型間質血管生成的影響。
　　方法：
　　(1)實驗分組與造模：雄性Wistar大鼠72只，隨機分為假手術組(Sham組，n=24，行左輸尿管分離術)、模型組(UUO,n=24)和IMD組(n=24)，后2組行左輸尿管結扎術。IMD組：在無菌條件下，將IMD8-47溶于200ul生理鹽水后注入微量滲透泵，

2、于大鼠背脊部皮下作一長約1cm橫切口，將泵植入，泵開口朝向鼠背前方，持續(xù)皮下給藥，劑量為100ng/(kg·h)，確保泵在皮下活動度好。各組大鼠分別于術后7d、14d、2ld和28d隨機選取6只，腹主動脈采血并留取梗阻側腎組織，之后處死。
　　(2)常規(guī)測定血清尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)和胱抑素C(CysC)含量。
　　(3)HE和PAS染色評估腎小管間質損傷程度。
　　(4)免疫組化法檢測血小板內皮細胞粘附分

3、子(CD31或 PECAM-1)、CD34、氨肽酶P(Aminopeptidase P, APP或JG-l2)、血管內皮生長因子(VEGF)、VEGF受體-2(VEGFR2)和血管內皮鈣粘蛋白(VE-cadherin)表達；
　　(5)實時定量PCR(Real Time-PCR)法檢測腎組織VEGF、VEGFR2和VE-cadherin mRNA表達。
　　結果：
　　(1)血生化改變：與Sham組相比，不同時間點UU

4、O組大鼠血清BUN、Scr和CysC均升高(P<0.05)，在梗阻21d達高峰，之后降低；與UUO組相比，IMD組血清BUN、Scr和CysC均降低(P<0.05)。
　　(2)腎臟組織學改變：光鏡下顯示，Sham組大鼠腎臟組織結構清晰，腎小球結構基本正常，腎小管上皮細胞完整，排列整齊。UUO組術后7d，間質大量炎癥細胞浸潤，部分腎小管空泡變性；術后14d，炎癥細胞浸潤及細胞增殖明顯，成纖維細胞增生，部分小管結構不完整，小管擴張呈

5、囊狀，皮質變薄；術后21d，小管結構消失，大量炎癥細胞浸潤及細胞增殖，間質纖維化；術后28d，炎癥細胞浸潤有所減少，擴張小管數量增多，部分小管萎縮消失，間質纖維化明顯。PAS染色見腎小管基底膜彌漫性增厚，皺縮增多，系膜區(qū)增寬。與UUO組相比，IMD組炎細胞浸潤、腎小管損傷和纖維化程度較輕。腎小管間質損傷評分：與Sham組相比，不同時間點UUO組大鼠損傷程度均升高(P<0.05)；與UUO組相比，IMD組損傷程度在21d、28d明顯減輕(

6、P<0.05)。
　　(3)腎臟微血管標記物變化：與Sham組相比，不同時間點UUO組CD31、CD34、JG-12陽性表達均降低(P<0.05)；與UUO組相比，IMD組三者陽性表達均增多(P<0.05)。
　　(4)VEGF、VEGFR2 mRNA和蛋白的表達：與Sham組相比，不同時間點UUO組VEGF、VEGFR2 mRNA和蛋白表達水平降低(P<0.05)；與UUO組相比，IMD組二者mRNA和蛋白表達水平升高(P

7、<0.05)。
　　(5)VE-cadherin mRNA和蛋白的表達：與Sham組相比，UUO組VE-cadherin mRNA由低于Sham組逐漸升高到超越Sham組，并在21d達到高峰，之后降低；不同時間點VE-cadherin蛋白表達水平降低(P<0.05)。與UUO組相比，IMD組VE-cadherin mRNA表達量有增多趨勢；VE-cadherin蛋白表達水平升高(P<0.05)
　　結論：
　　IMD可