冠心病患者CYP2C19基因突變及其在氯吡格雷抗血小板反應中的生物活化作用.pdf

1、研究背景：
　　氯吡格雷代謝的關鍵酶 CYP2C19的不同基因變異會引起其活性的不同改變，從而導致藥物代謝和藥物功效發(fā)生變化，使得患者對藥物產生差異反應。目前大部分研究主要集中在對 CYP2C19*2、*3、*17等基因多態(tài)性與氯吡格雷代謝相關性進行研究，針對CYP2C19基因突變與氯吡格雷代謝的相關性研究及其與氯吡格雷抗血小板凝集功能機制的體外研究未見報道。
　　研究目的：
　　本研究主要探索國人冠心病(CHD)患者

2、CYP2C19基因變異及其對氯吡格雷抗血小板活性的影響。
　　研究方法：
　　1.根據CHD指南診斷標準，收集南昌大學第二附屬醫(yī)院1493例經皮冠狀動脈（PCI）術后口服氯吡格雷和阿司匹林雙聯(lián)抗血小板治療的 CHD患者的基本臨床資料及外周靜脈血標本，選取1022例遺傳背景和年齡性別相匹配的健康人群作為對照。將出血、再發(fā)心絞痛、心肌梗死等不良心血管事件作為終點事件，對患者平均隨訪時間為12個月。
　　2.提取所有患者及健

3、康對照的DNA樣本，用sanger一代測序法對患者及對照組進行CYP2C19基因全外顯子及外顯子和內含子交界區(qū)測序，如在患者中發(fā)現基因變異，通過與1022例健康人群相比較，以明確是否為基因突變。
　　3.構建 CYP2C19基因野生型和突變質粒，選擇人正常肝臟細胞 HL-7702作為目的細胞。在HL-7702細胞中轉染相同劑量的CYP2C19野生型質粒及突變質粒。轉染24小時后，收集細胞。
　　4.提取肝S9蛋白并測定其濃度

4、，用western blot方法檢測各組質粒轉染量和CYP2C19蛋白表達量。在質粒轉染效率一致的前提下，調整肝S9蛋白濃度，與氯吡格雷共孵育后作用于血小板，運用AggRAM血小板聚集儀檢測血小板聚集率和人血管舒張劑激活磷蛋白(VASP)ELISA試劑盒檢測VASP水平，了解氯吡格雷對血小板的抑制情況，在體外對CYP2C19酶活性變化進行分析。
　　研究結果：
　　1.本研究共發(fā)現CYP2C1980G>T（G27V）、389

5、C>A（T130K）、407T>A（M136K）、831C>A（N277K）、1414G>A（V472I）等5個基因突變，其中80G>T為新發(fā)突變。這5個基因突變對CYP2C19酶活性影響的功能研究未曾見報道。
　　2.體外功能研究發(fā)現，407T>A基因突變組的血小板聚集率較野生組低48.8％（P＜0.05），同時，人血管舒張劑激活磷蛋白(VASP)水平相比于野生組高22.0%（P＜0.05），說明407T>A突變對氯吡格雷活化作

6、用強于野生組。然而80G>T、389C>A、831G>A、1414G>T4個基因突變組的血小板聚集率及VASP水平與野生組無差異（P均＞0.05）。
　　3.對患者隨訪結果顯示，有2例攜帶407T>A突變的患者出現了出血事件，1例攜帶80G>T和1例攜帶1414G>A基因突變的患者分別發(fā)生了心肌梗死和再發(fā)心絞痛事件。
　　結論：
　　1. CYP2C1980G>T為新發(fā)基因突變。
　　2.首次發(fā)現CYP2C194