新型喜樹堿類似物FL118對順鉑耐藥非小細胞肺癌抑制作用的研究.pdf

1、目的：通過觀察新型喜樹堿類似物FL118對順鉑耐藥非小細胞肺癌（NSCLC）細胞系的增殖、遷移和順鉑耐藥的抑制作用，探討 FL118對抗耐順鉑腫瘤細胞的作用機制，為 FL118臨床治療順鉑耐藥肺癌提供理論支持。
　　方法：常規(guī)培養(yǎng)人非小細胞肺癌細胞系A(chǔ)549和其順鉑耐藥細胞 A549/DDP,通過 MTT法檢測 A549/DDP的耐藥指數(shù)、免疫細胞化學方法檢測耐藥蛋白P-gp、ERCC1的表達，從而驗證A549/DDP細胞的順鉑耐

2、藥性。實驗分組：A549組，A549/DDP組，A549順鉑處理組，A549/DDP順鉑處理組，A549+FL118處理組，A549/DDP+FL118處理組。MTT法檢測各組細胞存活率；細胞劃痕實驗與Transwell小室實驗檢測細胞遷移與侵襲能力；實時熒光定量PCR、免疫細胞化學和Western blot方法分別檢測耐藥相關(guān)蛋白P-gp、ERCC1、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）免疫標志E-cadherin、Vimentin以及Surviv

3、in的mRNA和蛋白的表達；流式細胞術(shù)檢測細胞周期變化。
　　結(jié)果：1.與A549細胞相比，A549/DDP細胞形態(tài)呈長梭形、排列呈旋渦狀或放射狀，類似纖維細胞；MTT檢測A549/DDP耐藥指數(shù)為76.9（p<0.05），免疫細胞化學顯示 A549/DDP細胞中耐藥蛋白 P-gp、ERCC1表達顯著增高，同時上皮標志物E-cadherin表達減弱，間質(zhì)標志物vimentin表達增強，證實A549/DDP的順鉑耐藥性，而且具有上皮

4、間質(zhì)轉(zhuǎn)化特性。2. MTT方法發(fā)現(xiàn)FL118對A549/DDP細胞的生長有明顯抑制作用,且抑制作用呈現(xiàn)時間和濃度依賴性，100nM FL118作用48h后對A549/DDP細胞抑制作用顯著強于A549細胞（p<0.05）。3.劃痕實驗檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn) FL118作用后肺癌細胞的遷移能力下降（p<0.05），Transwell小室實驗結(jié)果顯示FL118明顯抑制腫瘤細胞的侵襲能力（p<0.05）。4.免疫細胞化學實驗及Western blot實

5、驗結(jié)果顯示，耐藥細胞A549/DDP Survivin蛋白表達較A549顯著，F(xiàn)L118作用后，耐藥細胞中Survivin表達降低,并且耐藥蛋白P-gp、ERCC1表達也明顯降低； E-cadherin表達增強，Vimentin表達下降。5.實時熒光定量PCR結(jié)果顯示，F(xiàn)L118可抑制Survivin基因表達，但對耐藥相關(guān)基因MDR1/P-gp、ERCC1無抑制作用,而E-cadherin、Vimentin mRNA的表達與蛋白表達結(jié)果

6、相一致。6.流式細胞術(shù)檢測 FL118作用后，A549及A549/DDP細胞均阻滯在S期（P<0.05）。
　　結(jié)論：FL118通過靶向抑制Survivin的表達，使順鉑耐藥A549/DDP細胞周期被阻滯在S期，抑制耐藥細胞的生長，且其抑制作用呈濃度-時間依賴性；FL118不僅明顯抑制順鉑耐藥細胞的運動侵襲能力，而且可以通過下調(diào)耐藥相關(guān)蛋白表達增強耐藥細胞對FL118的敏感性，進一步明確了FL118較強的對抗耐藥和侵襲性腫瘤作用。