惡性轉化BEAS-2B細胞lncRNAs與miRNAs的差異表達.pdf

1、目的：長鏈非編碼RNA(lncRNA)在一定范圍內(nèi)調(diào)控著生物功能的延續(xù)或中斷，其差異表達已被認為是腫瘤的一個標志性特征。微小RNA(miRNA)可負向調(diào)節(jié)基因表達，且可與 lncRNAs相互作用。本研究旨在探索致癌物誘導的永生化人支氣管上皮細胞(BEAS-2B) lncRNAs和miRNAs的差異表達，為進一步的機制研究提供依據(jù)。
　　方法：⑴以煤焦瀝青煙氣提取物(coal tar pitch extracts，CTPE)、煙草煙

2、霧凝集物(CSC)為染毒物，處理BEAS-2B細胞，體外構建細胞惡性轉化模型。以苯并(a)芘[benzo(a) pyrene，B(a)P]為陽性對照，染毒濃度5μg/mL；二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)為溶劑對照，染毒濃度2‰；CTPE及CSC染毒濃度分別為2.4μg/mL與25μg/mL。通過細胞形態(tài)學觀察、劃痕實驗、克隆形成實驗、細胞增殖活力及凋亡率檢測評估細胞是否發(fā)生惡性轉化。⑵對空白對照組和分別經(jīng)

3、B(a)P及 CTPE誘導的惡性轉化 BEAS-2B進行LncRNA/mRNA表達譜芯片及MicroRNA表達譜芯片檢測。⑶生物信息學方法篩選差異表達lncRNAs及miRNAs，并進行real time-PCR驗證。
　　結果：①BEAS-2B細胞對于 CSC的半數(shù)抑制濃度(median inhibitory concentration，IC50)約為0.084mg/mL。B(a)P、CTPE、CSC染毒20代、30代細胞鏡下輪

4、廓模糊，胞內(nèi)出現(xiàn)空泡，細胞膜腫脹變形，出現(xiàn)畸變的細胞核等。劃痕實驗結果顯示B(a)P、CTPE、CSC染毒細胞遷移距離均大于DMSO組細胞(均P<0.05)；B(a)P、CTPE、CSC組細胞克隆形成數(shù)均高于DMSO組(均P<0.05)，隨代數(shù)增加，克隆形成數(shù)也增加(均 P<0.05)；細胞增殖活力實驗結果顯示 B(a)P、CTPE、CSC染毒細胞吸光度值均大于DMSO組(均P<0.05)，隨代數(shù)增加，細胞增殖活力增大(均 P<0.05

5、)；凋亡率檢測發(fā)現(xiàn)B(a)P、CTPE、CSC染毒細胞凋亡率均小于DMSO組(均P<0.05)，且隨細胞代數(shù)增加，凋亡率下降(均P<0.05)。②以Fold change≥1.5，P<0.05進行差異lncRNAs篩選，B(a)P30組中檢出差異表達lncRNAs263種，其中，較之空白對照組表達上調(diào)的有159種，下調(diào)104種；CTPE30組中有707種lncRNAs差異表達，其中，有408種表達上調(diào)，299種下調(diào)；且差異表達lncRN

6、As中antisense與intergenic兩類比例較高。以Fold change≥1.5，P<0.05進行差異mRNAs篩選，B(a)P30組中共檢出差異表達mRNAs159種，其中，表達上調(diào)的有99種，60種下調(diào)；CTPE30組中有569種mRNAs差異表達，其中，有357種上調(diào)，212種下調(diào)。③利用Fold change≥2.0，P<0.05進行差異miRNAs篩選，B(a)P30組中共檢出差異表達miRNAs127種，其中，較

7、之空白對照組表達上調(diào)的有29種，98種下調(diào)；CTPE30組中有78種miRNAs差異表達，其中，有52種表達上調(diào)，26種下調(diào)。④與空白對照組及DMSO組相比，B(a)P、CTPE、CSC處理組lncRNAs中有ENST00000501520、ENST00000556926、ENST00000535078表達上調(diào)，TCONS_00011820表達下調(diào)；miRNAs中hsa-miR-2115-3p和hsa-miR-4521表達下調(diào)。