慢性應激對大鼠海馬神經元增殖和凋亡的影響及氟西汀的干預作用.pdf

1、背景和目的：
　　精神損傷程度的鑒定,一直是法醫(yī)精神病學鑒定工作中的難點之一,目前有關慢性應激的鑒定結論伴有一定的主觀性,其檢查指標的客觀性和一致性有待提升,常常難以準確反映精神損傷的實際程度。本實驗采用強迫游泳建立應激動物模型,觀察大鼠的行為、體重和內分泌水平的變化,來評價應激效果,應用免疫組化和Hoechst熒光染色技術測量海馬神經元細胞增殖及凋亡的情況,探討慢性應激對海馬神經元細胞增殖和細胞凋亡的影響,同時觀察經典的SSRI

2、類抗抑郁藥氟西汀對慢性應激大鼠的行為、內分泌、海馬神經元細胞增殖和凋亡的干預作用,為創(chuàng)傷后應激障礙的法醫(yī)鑒定、臨床治療及預防提供一定的理論依據。
　　材料和方法：
　　選擇成年雄性SD大鼠,按照隨機的原則將大鼠分為以下4組:對照組、4周應激組、4周應激加水組、4周應激加藥組,每組6只。采用強迫游泳試驗作為應激源,曠場試驗觀察自主行為,應激開始和結束時稱體重,酶聯免疫吸附試驗檢測血清皮質酮水平,增殖細胞核抗原(PCNA)免疫組

3、化的方法測量海馬齒狀回細胞增殖水平,Hoechst熒光反應的方法測量海馬細胞凋亡水平,觀察慢性應激和氟西汀對行為、皮質酮水平以及海馬細胞增殖和凋亡的影響。并對慢性應激后海馬的神經元增殖和凋亡與行為和內分泌的結果進行相關分析。實驗結果用EXCEL2003和SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析處理。結果以均數±標準差( x±SD)表示,采用方差分析(ANOVA)、LSD和Dunnett T3進行組間均數比較,相關分析應用Pearson相關, P

4、<0.05為差異顯著。
　　結果：
　　(1)行為、體重和血清皮質酮的變化:對照組和4周應激加藥組大鼠的爬格數明顯多于4周應激組和4周應激加水組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);4周應激組和4周應激加水組的中央格停留時間高于對照組和4周應激加藥組;在直立上,4周應激組和4周應激加水組明顯少于對照組和4周應激加藥組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);在體重上,應激后對照組每周體重增長明顯高于其他各組,有統(tǒng)計學意義(P<0.0

5、1);對照組皮質酮的水平較其他組明顯降低(P<0.01)。
　　(2)慢性應激對大鼠海馬齒狀回細胞增殖的影響:4周應激組大鼠齒狀回的PCNA陽性細胞數及PCNA指數明顯小于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　(3)慢性應激對大鼠海馬區(qū)細胞凋亡的影響:4周應激組大鼠海馬CA1、CA3、DG各區(qū)的凋亡細胞數明顯多于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　(4)氟西汀對慢性應激大鼠海馬細胞增殖和凋亡的影響

6、:4周應激用藥組大鼠海馬的PCNA陽性細胞數和PCNA指數明顯高于4周應激組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),和對照組無顯著差距;4周應激用藥組大鼠海馬CA1和CA3區(qū)細胞凋亡數明顯少于4周應激組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),和對照組無顯著差距,在DG區(qū),4周應激用藥組的細胞凋亡數亦少于4周應激組,但高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　(5)海馬的神經元增殖數與爬格數和直立數呈正相關,其隨皮質酮濃度和中央格

7、停留時間的增加有減少趨勢;海馬的細胞凋亡數與爬格數和直立數呈負相關,與中央格停留時間呈正相關,隨皮質酮濃度的升高有增加趨勢。
　　結論：
　　(1)慢性應激后大鼠以被動性運動為主,表現絕望和退縮,伴體重下降,并導致皮質酮水平升高,與人類抑郁癥和創(chuàng)傷后應激障礙的行為特點相似。
　　(2)行為特征和皮質酮水平的結果說明,強迫游泳實驗是一個良好的慢性應激模型。
　　(3)慢性應激后大鼠海馬神經元細胞增殖能力下降,細胞凋