玻璃體腔重復注射bevacizumab對糖尿病視網膜病變大鼠視網膜的毒性觀察.pdf

1、目的：
　　 觀察玻璃體腔重復注射抗血管內皮生長因子(vascular endothelial growthfactor，VEGF)單克隆抗體bevacizumab(商品名Avastin)對糖尿病視網膜病變(diabetic retinopathy，DR)大鼠視網膜的毒性作用，探討bevacizumab在治療DR時可能有的毒性作用，為DR和其他視網膜新生血管性疾病的臨床防治提供基礎理論依據。
　　 方法：
　　

2、1.健康成年雄性SD大鼠40只，隨機分成正常對照(A)組和糖尿病組，分別為10、30只。鏈尿佐菌素(streptozotocin，STZ)尾靜脈注射制作糖尿病大鼠模型。溴化乙錠(Evans blue，EB)染色視網膜鋪片證實DR模型成功后，30只糖尿病大鼠中，隨機選取10只作為DR組(B組)，不作任何處理；其余20只大鼠左眼為實驗組(C組)，玻璃體腔注射25 mg/ml的bevacizumab3μl，共注射3次，每次間隔10 d；右眼為

3、實驗對照組(D組)，不給予任何處理。
　　 2.于C組末次干預后20天，采用閃光視網膜電圖(FlickerElectroretinogram，F(xiàn)-ERG)對各組進行視網膜功能檢測。EB染色視網膜鋪片方法，熒光顯微鏡觀察各組視網膜血管的變化情況；蘇木精-伊紅(HE)染色，光學顯微鏡下觀察視網膜形態(tài)學變化；免疫組化SP法觀察視網膜各層Thy-1及VEGF陽性染色情況。
　　 3.所有數(shù)據應用SPSS13.0統(tǒng)計分析軟件包進行

4、統(tǒng)計學分析，計量資料以均數(shù)±標準差(x±s)表示，經正態(tài)性檢驗及方差齊性檢驗，對不同處理組間的數(shù)據采用單因素方差分析，并用SNK檢驗進行組間比較。以P<0.05作為差異有統(tǒng)計學意義的標準。
　　 結果：
　　 1.F-ERG檢測
　　 檢查顯示，A、B、C、D4組暗適應a、b波潛伏期，暗適應b波振幅及振蕩電位Ops總振幅比較，差異均有統(tǒng)計學意義(F=33.165，36.162，19.955，23.243；P值均=

5、0.000)；進一步用SNK法進行組間兩兩比較，B組，D組的暗適應a波潛伏期、暗適應b波振幅、振蕩電位Ops總振幅與A組，C組比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；A組，C組暗適應b波潛伏期與B組，與D組比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；B組與D組的暗適應b波潛伏期比較，差異也有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 2.EB染色視網膜鋪片
　　 A組大鼠視網膜血管走行良好，視網膜淺層大血管及深層血管網均清晰可見

6、，未見視網膜微血管瘤和視網膜新生血管形成。B組大鼠視網膜血管走行迂曲、擴張，可見微動脈瘤，血管呈串珠樣改變，血管周圍可見高熒光滲漏，周邊視網膜可見大片無灌注區(qū)。C組玻璃體腔重復注射bevacizumab3次后，視網膜血管走形規(guī)則、變細。D組大鼠視網膜可見微血管瘤，血管周圍高熒光滲漏較B組減少。
　　 3.HE染色
　　 A組大鼠視網膜層次結構整齊分明，RGCs排列整齊；內、外核層細胞核染色深紫，均勻；光感受器細胞內外節(jié)形

7、態(tài)規(guī)整；視網膜色素上皮(RPE)細胞核呈淡紫色，扁橢圓形，邊界清晰。B組大鼠視網膜各層細胞結構排列紊亂，內界膜不完整；視網膜內血管擴張，血管內皮細胞增殖；RGCs、周細胞等各層細胞數(shù)減少。C組玻璃體腔重復注射bevacizumab3次后，RGCs數(shù)量明顯低于正常，光感受器細胞也低于正常。D組視網膜內界膜增厚，局部不完整，未見明顯擴張血管，各層細胞排列不整齊。
　　 4.免疫組織化學染色
　　 Thy-1陽性染色主要位于神

8、經節(jié)細胞層(ganglion cell layer，GCL)，及少數(shù)位于內叢狀層(inner plexiform layer，IPL)、內核層(inner nuclear layer，INL)。A組Thy-1表達呈強陽性，GCL染色明顯，神經纖維層(nerval fiber layer，NFL)、INL輕度染色；B組Thy-1表達呈弱陽性，主要位于GCL，；C組Thy-1染色明顯減弱，GCL陽性表達稀少；D組Thy-1表達呈弱陽性，陽性

9、染色主要位于GCL，也可見于INL。A、B、C、D四組問染色區(qū)Thy-1的平均IOD差異有統(tǒng)計學意義(F=25.819，P=0.000)，進一步用SNK法進行組間兩兩比較，C組與其他三組之間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，B組與A組之間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，D組與B組之間差異也有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 VEGF陽性表達主要定位于GCL，少量位于NFL，INL及RPE層。A組VEGF表達呈弱陽性，主要位于

10、GCL；B組VEGF表達呈強陽性，主要位于GCL，NFL、INL也有表達；C組VEGF表達明顯減少，主要位于GCL；D組VEGF表達呈弱陽性，主要位于GCL和INL層，RPE層也有表達。染色區(qū)域VEGF的平均IOD值在A、B、C、D四組之間差異有統(tǒng)計學意義(F=45.243，P=0.000)，進一步用SNK法進行組間兩兩比較，B組與其他三組之間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 結論：
　　 1、玻璃體腔重復注射b