尖吻蝮蛇毒抗血小板聚集組分的分離純化及其活性測定.pdf

1、血小板是血液中最小的、具有多種功能的細胞，它在血栓形成、動脈粥樣硬化等病理過程中扮演了重要的角色。蛇毒中廣泛存在抑制血小板聚集的活性組分，它們的生化特性及作用機理均不盡相同。近年來，已有文獻報道了從不同的種屬的蛇毒，特別是從蝰科蝮亞科毒蛇所分泌的蛇毒中提取及分離出多種血小板聚集抑制劑，并對它們的活性進行了分析。關于尖吻蝮蛇毒這方面的研究較少，本課題擬從尖吻蝮蛇蛇毒(Agkistrodon acutus venom，AAV)中分離純化出具

2、有的抗血小板聚集作用組分，測定其理化性質，觀察其體內外抗血小板聚集活性，為進一步研究開發(fā)提供實驗依據。 1.抗血小板聚集組分的分離純化 應用Superdex75凝膠過濾色譜，從尖吻蝮蛇粗毒中分離得到6個蛋白峰；其中蛋白峰Ⅳ抑制二磷酸腺苷(ADP)誘導的血小板聚集活性最強，該組分再經Sephadex G-25凝膠色譜、DEAE Sepharose Fast Flow離子交換色譜和Lichrospher C18反相色譜等純化

3、得一個電泳純蛋白組分，暫定名為AAV-IV3-2。SDS-PAGE蛋白電泳鑒定發(fā)現，AAV-IV3-2呈單一條蛋白區(qū)帶。 2.AAV-IV3-2部分理化性質測定 根據AAV-IV3-2和Marker在凝膠上的相對位置，利用Image Master VDS凝膠成像系統(tǒng)中的軟件計算得出AAV-IV3-2的分子量大約為15.3kDa。 3.AAV-IV3-2對血小板聚集的影響 采用經典的Born法，發(fā)現AAV-

4、IV3-2在體外可抑制ADP和凝血酶誘導的血小板聚集，且該作用呈明顯的量效關系，AAV-IV3-2對ADP、凝血酶誘導的血小板聚集的IC50分別為1.78μg/ml和5.06μg/ml。 4、AAV-IV3-2對ADP-Na誘導的小鼠急性肺栓塞的影響 采用ADP-Na誘導的小鼠急性肺栓塞模型發(fā)現，AAV-IV3-2 iv可以明顯縮短小鼠呼吸窘迫時間，中高劑量組(150、200μg/kg)小鼠恢復正常呼吸、自主活動的時間(