鐵線(xiàn)蓮遺傳多樣性、雜交育種及離體快繁研究.pdf

1、鐵線(xiàn)蓮是毛茛科（Ranunculaceae）鐵線(xiàn)蓮屬（ClematisL.）植物,是一類(lèi)觀賞價(jià)值高、具多種抗逆性的藤本花卉。本實(shí)驗(yàn)在收集國(guó)內(nèi)外的鐵線(xiàn)蓮種質(zhì)資源基礎(chǔ)上，運(yùn)用ISSR技術(shù)結(jié)合田間性狀觀察，對(duì)鐵線(xiàn)蓮遺傳多樣性進(jìn)行研究；選擇不同的父母本組合進(jìn)行雜交，研究雜交技術(shù)，初步觀察雜種后代性狀，篩選觀賞價(jià)值高并適宜南方栽培的品種；同時(shí)，進(jìn)行鐵線(xiàn)蓮離體快繁技術(shù)的研究。研究結(jié)果將為鐵線(xiàn)蓮種質(zhì)資源分類(lèi)提供科學(xué)依據(jù)，為新品種選育提供理論基礎(chǔ)。

2、r>　　1．通過(guò)優(yōu)化反應(yīng)參數(shù)，建立了鐵線(xiàn)蓮ISSR-PCR分析的反應(yīng)體系：25uL體系中含模板DNA40ng，引物濃度為0.4μM，dNTPs濃度為0.20mM，Taq酶的用量為lU，10×Buffer2μL；研究不同ISSR引物適宜的退火溫度，篩選出13條多態(tài)性高的引物，PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5min，94℃變性50s，51.8-54℃退火1min，72℃延伸1min，40個(gè)循環(huán)；72℃延伸10min，4℃下保存。對(duì)32份鐵線(xiàn)

3、蓮材料及2個(gè)近緣屬材料進(jìn)行ISSR分析，共擴(kuò)增出172條條帶，平均每條引物擴(kuò)增出13.23條譜帶。13條引物共擴(kuò)增出多態(tài)性位點(diǎn)168個(gè)，平均每個(gè)引物擴(kuò)增多態(tài)性位點(diǎn)12.92個(gè)，多態(tài)性位點(diǎn)百分率為98.24％。ISSR分析結(jié)果顯示，34份材料間的遺傳相似距離在0.22～1.21之間；32份鐵線(xiàn)蓮材料在遺傳距離為1.01處分為三大類(lèi)，在遺傳距離0.77處可分為13個(gè)小組。
　　2．選擇5個(gè)鐵線(xiàn)蓮親本組合進(jìn)行雜交試驗(yàn)，其中，‘烏托邦'作

4、為父本和‘丹青'雜交組合沒(méi)有獲得種子，其余4個(gè)組合‘丹青'和‘烏托邦'、‘波蘭精神'和‘丹青'、‘克天使'和‘王夢(mèng)'‘王夢(mèng)'和‘丹青'收獲到105粒種子，平均結(jié)實(shí)數(shù)為21粒，五個(gè)組合平均結(jié)實(shí)率為70.93%；共有92粒鐵線(xiàn)蓮種子發(fā)芽，平均發(fā)芽百分?jǐn)?shù)為69.02%；F1代播種苗的開(kāi)花株數(shù)共33棵。從開(kāi)花株中選出7株觀賞性較高的植株。
　　3．本試驗(yàn)探索了鐵線(xiàn)蓮‘王夢(mèng)’的外植體消毒方法和快繁較適培養(yǎng)基。‘王夢(mèng)’莖段的消毒處理以0.1%