轉基因斑馬魚和羅非魚耐寒性能的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、雖然通過傳統(tǒng)的雜交育種和選育的方法培育出了在北方地區(qū)生長速度快、抗寒力強的荷包紅鯉、高寒鯉抗寒品系等優(yōu)良品種，但鯪魚(Cirrhinus molitorella)、羅非魚等還不能依靠傳統(tǒng)的育種方法獲得抗寒品系。這就要求從基因表達水平研究魚類的耐低溫機制，本實驗主要是研究東北地區(qū)的具有耐低溫性狀的黑龍江鯉(Cyprinus carpio)的MIPS基因在斑馬魚和羅非魚中的表達情況。
　　構建的外源表達載體在斑馬魚中的熒光觀察結果顯示

2、，兩個重組表達載體均不影響EGFP的表達，只是表達強度存在一定差異，未插入外源目的基因的重組表達載體中EGFP基因的表達強度明顯高于插入外源目的基因的重組表達載體 EGFP基因的表達。重組表達載體的成功構建顯示金魚 Tgf2轉座子和普通表達載體可以介導外源基因在斑馬魚中的表達。
　　對轉基因斑馬魚F1、F2代和轉基因羅非魚F1代進行PCR檢測，結果顯示靶基因MIPS的編碼區(qū)能夠完整的整合到斑馬魚和羅非魚基因組中，檢測注射 pTgf

3、2-EF1α-MCS-EGFP的轉基因斑馬魚F1代整合效率達31.4％；檢測注射普通表達載體的轉基因斑馬魚F1代整合效率達30.4%；檢測注射表達載體 pTgf2-EF1α-MIPS-EGFP的轉基因斑馬魚F2代整合效率達18.1%；檢測注射表達載體 pTgf2-EF1α-MIPS-EGFP的轉基因羅非魚整合效率達6.01%，證實外源目的抗寒基因MIPS在轉基因斑馬魚和羅非魚中都有表達。
　　以PCR實驗檢測出外源目的基因轉基因斑

4、馬魚F2代個體和羅非魚 F1代個體為實驗魚進行的低溫耐受實驗，結果顯示轉基因組的半致死時間為37.86 h大于未轉基因的對照組37.76 h。根據(jù)卡方計算公式進行兩組半致死時間的比較，得 X2=0.000小于0.05，說明轉基因組和對照組的半致死時間的差異不顯著，即轉基因個體和對照組在耐低溫能力上沒有明顯的區(qū)別。斑馬魚實時熒光定量 PCR實驗結果顯示，抗寒基因MIPS在常溫轉基因斑馬魚中表達量最高，在低溫耐受實驗中最后死掉的轉基因斑馬魚

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