少陽生骨方對SD大鼠軟骨細胞體外培養(yǎng)增殖及II型膠原表達影響的研究.pdf

1、 目的：通過對比觀察少陽生骨方及鹽酸氨基葡萄糖膠囊含藥血清對大鼠體外關節(jié)軟骨細胞增殖、II型膠原蛋白達的影響,探討少陽生骨方保護損傷關節(jié)軟骨細胞的效應。方法：1.大鼠關節(jié)軟骨細胞體外培養(yǎng)體系的建立與鑒定：原代細胞應用聯合酶消化法從1周齡SD大鼠關節(jié)軟骨獲取,并以倒置顯微鏡下觀察形態(tài)學表現及甲苯胺藍染色進行鑒定；2. MTT比色法觀察少陽生骨方及鹽酸氨基葡萄糖膠囊含藥血清對大鼠關節(jié)軟骨細胞在體外培養(yǎng)增殖的影響；3.免疫組化法觀察少陽生骨

2、方及鹽酸氨基葡萄膠囊含藥血清對大鼠體外關節(jié)軟骨細胞II型膠原表達的影響。結果：1.采用聯合酶消化方法建立大鼠軟骨細胞體外培養(yǎng)體系,經倒置顯微鏡下形態(tài)學觀察及甲苯胺藍染色鑒定,確認分離培養(yǎng)的細胞符合軟骨細胞的生物學特征、形態(tài)學、組織化學染色顯示軟骨細胞培養(yǎng)傳3代以內可以保持表型的穩(wěn)定。2.對軟骨細胞增殖的觀察顯示：少陽生骨方(SYSGF)5%、10%、20%含藥濃度的血清均能促進體外正常軟骨細胞增殖,但增殖的效應不隨濃度的遞增而增加,以1

3、0%的含藥血清濃度促進正常培養(yǎng)關節(jié)軟骨細胞增殖最為明顯,且在48時促進增殖作用最佳。在第48h時,對于正常培養(yǎng)的軟骨細胞,10%SYSGF含藥血清組與10%空白血清組比較有顯著差異(P<0.05),與10%鹽酸氨基葡萄糖膠囊含藥血清組比較有統計學差異(P<0.05),其增殖作用不及氨基葡萄糖膠囊；各組細胞的增殖效應在第24h時較弱,第48時均強于第72h時。3.免疫組織化學結果顯示：各組標本均可見II型膠原陽性表達,表達部位為胞漿,可見