皮膚光老化機制研究—紫外線照射對成纖維細胞染色體端粒DNA復制的影響.pdf

1、皮膚老化包括自然老化與光老化，老化由很多機制共同作用引起。
　　端粒是由串聯(lián)重復序列組成的位于線性染色體末端的結構，在人類是由（GGAGGG）n組成的，并在空間上形成特定的構象，控制著與老化相關的基因表達和細胞增殖能力的改變，與老化、腫瘤、基因調節(jié)密切相關，研究端粒在這些過程中的變化及其生物學功能是目前皮膚老化研究領域的熱點。
　　端粒的長度及其正常結構的維持決定端粒的功能：直接從活體組織獲得的細胞，端粒長度與生理年齡呈現(xiàn)負

2、相關；培養(yǎng)細胞證明，細胞每分裂一次，端粒大約縮數(shù)十個至數(shù)百個堿基對。當端粒變得“相當短”時，細胞就進入老化階段。從更深層次上說，端粒長度還可能影響其附近與老化相關的基因的表達。
　　日光中的紫外線是引起皮膚光老化最重要的環(huán)境因素。急性紫外線照射后，可以直接或間接激活老化相關的信號通路；還可以抑制膠原的合成最終引起老化相關改變。已證實的信息從多個方面表明自然老化及光老光有著共同的基本的分子通路。端粒是目前公認的細胞老化的分子標記，急

3、性日光照射后是否也能使端?？s短進入老化的終末通路是一個值得探索的課題。
　　本試驗以人原代成纖維細胞為對象，采用紫外線照射和RT-PCR等技術觀察急性紫外線損傷對細胞增殖活性及染色體端粒復制的影響,對光損傷光老化機制做了更進一步的研究。
　　一、紫外線對人成纖維細胞增殖活性的影響：
　　使用日光模擬器紫外連續(xù)光譜，光譜范圍為290nm-400nm，以1000-10000mJ/cm2共十個劑量照射細胞，并用WST-8檢測

4、照射后成纖維細胞的增殖活性，發(fā)現(xiàn)劑量越高，細胞增殖活性越低。
　　二、自然傳代細胞端粒長度變化的驗證：
　　參考文獻描述方法，我們對PCR的反應條件進行了探索和改進，建立了端粒及內參基因擴增的標準曲線；并驗證了自然傳代細胞端粒長度的動態(tài)學變化。
　　三、紫外線照射對成纖維細胞端粒長度的影響：
　　（一）、使用較小劑量(1000mJ/cm2)紫外線照射成纖維細胞后并傳代，提取不同代數(shù)成纖維細胞的DNA，對比未處理組

5、與紫外線處理組端粒長度的變化；結果顯示，小劑量紫外線照射后其端粒長度有縮短趨勢，但照射組與對照組相比沒有統(tǒng)計學差異（P>0.05）；且隨著傳代數(shù)目的增加，兩組端粒的長度均有逐漸縮短的趨勢。
　?。ǘ?、對于同代成纖維細胞，用不同劑量紫外線照射細胞后,不經(jīng)傳代，提取細胞DNA，并對比端粒長度的變化。結果示：高劑量(10000mJ/cm2)紫外線處理后成纖維細胞的端粒較未照射細胞顯著縮短，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。