蒜氨酸原料藥的中試生產(chǎn)工藝及分析方法研究.pdf

1、大蒜作為一種重要的藥用植物，大量研究表明其具有預防心血管疾病和抗癌等方面的生物活性，中亞地區(qū)包括中國新疆是大蒜的原產(chǎn)地。蒜氨酸(S-烯丙基-L-半胱氨酸亞砜，alliin)是完整、未受損大蒜里面含量最豐富的硫化物，并且非常穩(wěn)定，它存在于大蒜的細胞質里；當細胞受損時，蒜氨酸酶從細胞液向細胞質釋放，蒜氨酸和蒜氨酸酶接觸被迅速轉化為一系列新的化合物—蒜辣素及其相似物，蒜辣素(雙烯丙基硫代亞磺酸酯，allicin)被認為是大蒜中最重要的活性成分

2、，但它相當不穩(wěn)定，易于自身反應。按照課題的設計思路，蒜氨酸作為大蒜中最主要的原始活性成分及風味物質來源，將被單獨提取純化；同時提取收集大蒜多糖。為了完成蒜氨酸原料藥的中試生產(chǎn)及原料藥質量控制中復雜多組分分析，在前期研究工作的基礎上，完成了如下工作： 首先建立了蒜氨酸和蒜辣素的準確方便的定量測定方法。首次采用非衍生化的HPLC-內標法對鮮蒜中蒜氨酸定量，在樣品處理時從6種滅酶方法中確定微波加熱方式使蒜酶滅活最為徹底。此法不僅較之前

3、的衍生化法簡單方便，也比非衍生化的外標法更為準確，同時驗證并指出了美國藥典測定蒜氨酸方法的失誤；該法同樣適于測定蒜氨酸原料藥及制劑。另外建立了4-MP紫外法快速測定鮮蒜中蒜辣素的方法，具有快速、方便、價廉、靈敏度高等優(yōu)點；與英國藥典測定結果一致，該方法可以適應測定蒜氨酸含量和蒜酶活力，同時可方便應用于考察蒜酶動力學特性。從新疆各地鮮蒜50多個樣品的品質調查發(fā)現(xiàn)，各地含量普遍較高，均高于USP 0.5％的標準；新疆地域廣，生態(tài)多樣，環(huán)境差

4、異大，大蒜品質主要受生境、氣候、土壤及水肥的影響較大，大蒜標準化種植勢在必行。 第二，在進行蒜氨酸提取純化實驗室工藝考察中，確定微波加熱方式蒜酶滅活徹底的時間；不同濃度乙醇提取蒜氨酸時，20％較好，不僅提取效率高同時利于提取溶液較長時間存放而不會腐??；通過正交設計篩選出恰當提取次數(shù)為超聲提取3次，料液比為1:3；超濾澄清效果好，且無損失。陽離子交換樹脂法分離純化蒜氨酸時，從2種候選樹脂中選定001×7型(732)樹脂吸附量較大，

5、適宜的上柱樣品應為pH=2、濃度為適中的大蒜提取溶液，水洗多糖的量為6倍柱體積，氨水最佳解吸濃度為0.5mol/L，同時90％的大蒜多糖得以收集，鮮蒜中蒜氨酸的收率可大于50％。40℃時70％乙醇對蒜氨酸粗品結晶，蒜氨酸純度可達90％以上。第三，小試工藝可行、穩(wěn)定，原料、中間體和產(chǎn)品的質量控制方法已建立的情況下，我們采用與生產(chǎn)相符的條件進行工藝放大研究。在制定中試生產(chǎn)標準操作規(guī)程中，考察了隧道式干熱烘干機殺酶的溫度、時間和效率，干熱滅酶

6、效率只能達到70％，待改進；改良的篩板使帶皮打漿效果良好，證明非脫皮熟蒜打漿的可行性，減少了工序，降低了成本：提取過程中，20％酒精分別1:3和1:2提取2次，效率達90％以上；硅藻土板框過濾時，探索了精濾過程中提取液中預涂和過濾時硅藻土的比例分別為3％和1％，并考察硅藻土對蒜氨酸的吸附損失，濾液澄明度良好，蒜氨酸損失很少：在樹脂吸附分離階段，采用三種簡便靈敏檢測手段控制生產(chǎn)過程，分離蒜氨酸的效果與實驗室一致，酸性流分中蒜氨酸收率可達5

7、0％以上，干燥后蒜氨酸純度達50％以上；試驗發(fā)現(xiàn)濃縮蒜氨酸洗脫液時溫度和濃縮時間對蒜氨酸損失的具有很大影響。最終蒜氨酸得率和質量達到了設計要求。 最后為了了解蒜氨酸原料藥中的復雜物質組成；我們采用正相非衍生化和反相衍生化的HPLC-MS-MS對不同純度的蒜氨酸原料藥中的有關物質進行了系統(tǒng)研究，證實蒜氨酸原料藥中不僅包含蒜氨酸的異構體異蒜氨酸和環(huán)蒜氨酸，蒜氨酸同系物甲基蒜氨酸以及蒜氨酸來源物質脫氧蒜氨酸以外，還含有精氨酸、胱氨酸、