化療藥物體外干預(yù)后MCF-7細胞株耐藥基因表達情況及其在臨床化學(xué)治療中的意義.pdf

1、目的：體外評價蒽環(huán)類及紫杉類化療藥物與乳腺癌耐藥相關(guān)基因MDR1和BCRP表達的關(guān)系。
　　 方法：
　　 1，體外培養(yǎng)人乳腺癌MCF-7細胞并將其接種入無菌細胞培養(yǎng)板，給予不同濃度阿霉素，表阿霉素，紫杉醇和多西紫杉醇分別干預(yù)MCF-7細胞不同時間后，采用RT－PCR檢測及PCR產(chǎn)物電泳分析方法檢測MDR1，BCRP基因的表達水平。
　　 2，實時熒光定量PCR技術(shù)進一步檢測不同濃度阿霉素和表阿霉素干預(yù)不同時間段

2、后MDR1、BCRP基因的表達量，并評價蒽環(huán)類藥物干預(yù)濃度和干預(yù)時間與以上基因表達間的量效關(guān)系。
　　 3，以華中科技大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院乳腺甲狀腺外科在2004年1月～2005年12月期間接受“乳腺癌改良根治術(shù)”并進行體外藥物敏感實驗的乳腺癌患者為研究對象，根據(jù)藥敏結(jié)果分別篩選對蒽環(huán)類藥物高度敏感和對蒽環(huán)類藥物耐藥的乳腺癌組織標(biāo)本，檢測其中MDR1、BCRP基因表達量的差異及其在臨床中的意義。
　　 4，采用流式細胞技術(shù)檢

3、測在不同濃度阿霉素干預(yù)后MCF-7中干細胞的比例，并分別檢測各主要亞細胞群中MDR1基因表達量的變化，探討多藥耐藥形成中的可能機制。
　　 結(jié)果：蒽環(huán)類藥物干預(yù)與乳腺癌細胞MCF-7的MDR1基因表達量間有密切關(guān)系，MDR1基因隨蒽環(huán)類藥物濃度的增加和作用時間的延長，其表達量也隨之增加。而蒽環(huán)類藥物與BCRP基因間及紫杉類藥物與MDR1，BCRP間都無明顯的量效關(guān)系。蒽環(huán)類藥物干預(yù)后的乳腺癌細胞MCF-7的BCRP基因的表達無明

4、顯規(guī)律，紫杉類藥物干預(yù)后的MCF-7的MDR1和BCRP基因的表達量也無明顯差異。此外，對比兩種蒽環(huán)類藥物干預(yù)后的MCF-7細胞中MDR1及BCRP基因的表達量，發(fā)現(xiàn)兩種藥物間無顯著差異。且在體外藥敏中對蒽環(huán)類藥物高度敏感的腫瘤組織中MDR1的表達量要明顯低于對蒽環(huán)類藥物耐藥的腫瘤組織。此外，對照流式細胞分選結(jié)果和相應(yīng)細胞亞群MDR1基因水平，發(fā)現(xiàn)隨著阿霉素藥物干預(yù)濃度的增加和作用時間的延長，MCF-7細胞中干細胞池出現(xiàn)富集現(xiàn)象，同時，

5、CD44+CD24－和CD44+CD24+兩亞細胞群中，MDR1基因的表達水平也隨之增高。
　　 結(jié)論：該研究結(jié)果證實了蒽環(huán)類藥物是MDR1基因編碼產(chǎn)物p-gp蛋白的特異性底物之一。臨床通過檢測MDR1的表達量可以較準(zhǔn)確的預(yù)測蒽環(huán)類藥物的療效，并為個體化的選擇敏感性藥物提供一定的實驗依據(jù)。且兩種蒽環(huán)類藥物（阿霉素及表阿霉素）在體外誘導(dǎo)MDR1基因表達的能力方面無明顯差異。同時，乳腺癌多藥耐藥的形成不僅僅是基于腫瘤干細胞選擇性的存