豬小腸粘膜下層復合骨髓間充質干細胞修復大鼠肌腱缺損的實驗研究.pdf

1、目的：通過豬小腸粘膜下層(Small Intestine Submucous，SIS)復合骨髓間充質干細胞(bone mesenchymal stem cells，BMSCs)修復鼠跟腱缺損的實驗，進一步探索SIS和BM-SCs在肌腱修復中的作用，為肌腱缺損修復提供新的依據(jù)。 方法：取Wistar鼠BMSCs行分離、純化、傳代培養(yǎng)，將第五代BMSCs一部分用于形態(tài)學、生物特性的檢測以及BrdU標記。另一部分與理化處理后的SIS復

2、合。選54只健康Wistar鼠(200～300g)隨機分為A、B、C組，每組18只。將每只鼠的左側跟腱的內側束切除0.8 cm，造成肌腱缺損模型，用改良的Kessler縫合法縫接。A組：用SIS復合BMSCs橋接缺損；B組：用單純SIS橋接缺損；C組：自體跟腱切除再回植。移植前3天、移植后3天、1周、2周進行移植免疫學的檢測；移植后3、6、9周對標本進行大體形態(tài)、組織學觀察及圖像分析、生物力學測試。 結果：1.采用梯度密度離心法

3、分離結合貼壁篩選法可獲得較高純度和活性的BM-SCs，并能大量增殖；2.終濃度為10μmol/L和孵育48hBrdU標記率>80％，且可以連續(xù)檢測到，提示BrdU標記可用于BMSCs移植人體內后存活、生長和分化的動態(tài)觀察；3。54只鼠均進入結果分析。①移植后2周內A、B兩組與C組白細胞分類計數(shù)結果差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，表明豬小腸粘膜下層作為異種移植材料沒有明顯免疫排斥；②經免疫組化和天狼星紅染色圖像分析結果可知：術后3組均表

4、現(xiàn)為成纖維細胞的移人并逐漸增多，細胞形態(tài)經歷了從修復早期到修復中晚及晚期改變，分泌膠原組織逐漸增多，SIS和自體跟腱均經歷了逐漸降解，且同時被新生膠原組織替代的過程。A、B兩組I型膠原含量逐漸增多，III型膠原含量逐漸減少；A組在移植術后9周時I型膠原含量明顯高于B組(P<0.05)、III型膠原含量要少于B組(P<0.05)；A組在術后9周時I型及III型膠原含量與C組接近。結果表明，SIS復合BMSCs組修復替代結果明顯優(yōu)于單純SI

5、S組，與自體肌腱移植組接近。在術后9周時SIS復合BMSCs組肉眼下豬小腸粘膜下層形態(tài)與正常肌腱已基本相同，光鏡下豬小腸粘膜下層已被新生的肌腱所完全替代，成纖維細胞沿長軸方向有序排列且出現(xiàn)大量的膠原細胞外間質；③在生物力學測試中，3組均表現(xiàn)為抗負荷強度逐漸增強的過程，在移植后9周時A組生物力學強度(52.17±2。43N)要明顯優(yōu)于B組(46.75±2.89N)，P<0.05，基本接近C組(55.78±2.14N)，P<0.05；④電鏡