RNA干擾技術阻斷α-synuclein過表達的研究及家族性帕金森病α-synuclein基因突變分析.pdf

1、中南大學博士學位論文RNA干擾技術阻斷αsynuclein過表達的研究及家族性帕金森病αsynuclein基因突變分析姓名：陳濤申請學位級別：博士專業(yè)：神經(jīng)病學指導教師：唐北沙20050501效，通過RNAi封閉盤一砂，2“c據(jù)加基因達到阻斷0l—synuclein蛋白病理性聚集及細胞凋亡的目的，為開辟一條新的治療帕金森病的有效途徑奠定基礎。在本研究中，我們還對5個ADPD家系先證者進行a—ls：彬“c冶砌基因突變分析，旨在迸一步了解我

2、國常染色體顯性遺傳性帕金森病a一∥““c把枷基因突變情況。第一部分口嘲懈“蚴l基因RNA干擾載體及葉synuclein—pEGFP真核細胞表達載體的構建為構建高效特異的d一妙胛“c把加基因RNA干擾載體，本研究采用攜帶H1肩動子的PBSHHl質(zhì)粒，構建4個可有效表達發(fā)夾狀RNA的特異性0【sy叫cleinpBsHHlRNA干擾載體，應用限制性內(nèi)切酶酶切、DNA測序證實后行wjstemblot、RT_PCR檢測，篩選出針對常染色體顯性遺傳

3、性帕金森病致病基因a置妒“c，P加特異性的I礬A干擾載體psYNi—l，抑制效率達696％，并確立n，邏川“ck加基因205—226nt位點為干擾的有效靶位點。同時采用PCR法擴增d—l矽材c膪加基因，亞克隆入pEGFP—N1質(zhì)粒，成功構建cc—synuclein—pEGFP真核細胞表達載體。第二部分m眇刪如脅過表達誘導a—synucIein蛋白病理性積聚及細胞凋亡的研究為觀察a點炒“c彪伽過表達對細胞的影響，本研究將構建成功的0【sy