自體骨髓間充質(zhì)干細胞復合同種異體脫鈣骨基質(zhì)修復軟骨缺損的前期研究.pdf

1、目的：體外培養(yǎng)兔自體骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)并向軟骨細胞分化，探討其與兔同種異體脫鈣骨基質(zhì)(decalcified bone matrix，DBM)體外相結(jié)合培養(yǎng)的可行性，為下一步將細胞支架復合物植入兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損處修復關(guān)節(jié)軟骨缺損做準備。 方法：抽取兔骨髓液，分離純化骨髓液中的間充質(zhì)干細胞。取擴增傳代至第3代的BMSCs分成實驗組和對照組，實驗組用1

2、0％胎牛血清的LG-DMEM 培養(yǎng)液加入轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)和地塞米松聯(lián)合誘導，對照組用10％胎牛血清的LG—DMEM培養(yǎng)液自然分化。在誘導4天、7天、14天后，分別用甲苯胺藍染色檢測細胞蛋白多糖的表達，Ⅱ型膠原免疫組化染色檢測細胞Ⅱ型膠原的表達并計算陽性率。制備兔DBM，采用液體置換法檢測經(jīng)脫鈣2天、3天、4天支架材料的孔隙率。掃描電鏡觀察DBM的超微結(jié)構(gòu)，以及

3、細胞與DBM體外結(jié)合培養(yǎng)3天的粘附情況。 結(jié)果：BMSCs取材方便，體外培養(yǎng)生長穩(wěn)定，細胞活性好。實驗組BMSCs向軟骨細胞分化，細胞甲苯胺藍染色異染，Ⅱ型膠原免疫組化染色陽性率與對照組相比有顯著性差異。脫鈣3天的DBM多孔結(jié)構(gòu)及空隙適合細胞的粘附和增殖。細胞和DBM體外培養(yǎng)粘附良好。 結(jié)論：兔自體BMSCs取材方便，細胞活性好，經(jīng)體外誘導后可以向軟骨細胞分化。兔同種異體DBM制備方便，具有良好的生物學特性，兩者體外結(jié)合