人部分細胞株中neuritin表達檢測及其過表達對細胞增殖、遷移的影響.pdf

1、目的：(1)檢測neuritin在人類部分細胞株中的表達情況，篩選neuritin高表達和低表達細胞株；(2)探討neuritin過表達對細胞增殖、遷移的影響。 方法：(1)分別采用RT-PCR與免疫組織化學技術在mRNA水平及蛋白水平，檢測本實驗室現(xiàn)存11種人類正常和腫瘤細胞株中neuritin的表達情況；(2) 擴增neuritin ORF，克隆至真核表達載體pcDNA3.1myc/his(-)A中，經轉化、篩選、測序鑒定后

2、，抽提并獲取高純度的重組質粒pcDNA3.1(-)A-neuritin，采用脂質體介導轉染法將其轉染neuritin低表達細胞株，RT-PCR及westem-blot鑒定轉染效果后，經G418篩選獲得穩(wěn)定表達neuritin的細胞；(3)通過MTT比色和細胞計數分析neuritin過表達對細胞增殖的影響，通過觀察細胞形態(tài)變化和細胞遷移實驗探討neuritin過表達對細胞遷移的影響。 結果：(1)通過RT-PCR和免疫組織化學檢測

3、，篩選出neuritin高表達細胞株293T、hUVEC、hUASMC、Soas-2、LOVO、L-02及低表達細胞株BMSCs、Hela、ECV-304、SK、QGY；(2)構建了neuritin的真核表達重組質粒pcDNA3.1(-)A-neuritin，經BamH Ⅰ+EcoR Ⅰ雙酶切鑒定和測序鑒定證實neuritin基因已正確插入多克隆位點；(3)pcDNA3.1(-)A-neutitin轉染人骨髓間充質干細胞(BMSCs)后

4、，經G418篩選獲得穩(wěn)定表達neuritin的BMSCs：(4)鏡下觀察：neuritin過表達使BMSCs形態(tài)變得不規(guī)則，多偽足，且部分細胞偽足似絲狀，更為細長；(5)MTT和細胞計數顯示：neuritin過表達與BMSCs的數目呈負相關；(6)細胞遷移實驗顯示：neuritin過表達對BMSCs的遷移有促進作用。 結論：(1)篩選出neuritin高表達及低表達細胞株，發(fā)現(xiàn)neuritin不僅在多種正常細胞中有表達，而且在部