DGLA合成表達載體的構建與棉花轉化的研究.pdf

1、多不飽和脂肪酸（Polyunsaturated fatty acid，PUFAs）是指含有兩個或兩個以上雙鍵且碳鏈長度為18-22個碳原子的直鏈脂肪酸。多不飽和脂肪酸在人體的營養(yǎng)與健康方面有著重要的作用。多不飽和脂肪酸主要的來源是深海魚類，但由于海洋魚類過度捕撈以及海洋污染等原因，導致魚油的產量和質量無法滿足人類的需求(Domergue et al，2005；Drexler et al，2003)，所以需要尋找一條安全又經濟的方法解決這

2、一問題。近年來，隨著多不飽和脂肪酸代謝途徑以及合成途徑中相關酶克隆的研究，利用轉基因的方式，將與多不飽和脂肪酸合成相關酶基因轉入高等植物中來獲得多不飽和脂肪酸稱為研究熱點。棉花不僅是重要的經濟作物，而且還是重要的油料作物，其棉籽油中亞油酸含量約49.5％-57.3%（董佳等，2010），可以作為合成多不飽和脂肪酸的重要基礎。
　　本試驗通串聯(lián)表達盒的方法，構建含有DGLA合成有關的去飽和酶和鏈延長酶基因的表達載體，并轉化邯無198

3、和山農棉9號兩個棉花品種來獲得轉基因植株，并對轉基因陽性株進行相關脂肪酸含量的測定。主要結果如下：
　　1.將輔助載體PAUX中的35S啟動子替換為棉花種子特異性α球蛋白啟動子，構建成為含有種子特異性啟動子的輔助載體PAUX(α)。
　　2.在輔助載體PAUX(α)的基礎上，利用多基因表達盒串聯(lián)的方法，構建成含有從LA到EDA再到DGLA合成相關酶基因的多基因表達載體pCamBAR-(α-△9Elo)-(α-△8Des)。<

4、br>　　3.利用農桿菌介導的噴花法及子房注射法，將表達載體pCamBAR-(α-△9Elo)-(α-△8Des)分別導入山農棉9號和邯無198。經過抗除草劑鑒定和α球蛋白啟動子、△8Des、△9Elo、BAR等目的基因PCR鑒定，篩選出18株陽性植株。
　　4.對陽性植株的棉花種子進行脂肪酸鑒定，結果表明，在四個樣品的轉基因棉花種子中檢測到油酸（OA）、亞油酸（LA）、γ-亞麻酸（EDA）、雙高-γ-亞麻酸（DGLA），在對照中