獸醫(yī)生物制品學第八章獸用疫苗生產與質量控制

1、疫苗生產工藝介紹,疫苗生產基本條件疫苗生產工藝流程生產中影響疫苗質量的關鍵環(huán)節(jié)疫苗抗原制造技術介紹疫苗檢驗疫苗保存,1、疫苗生產基本條件,產品批準文號菌（毒）種疫苗《制造及檢驗規(guī)程》GMP廠房、設施和儀器設備,產品批準文號,農業(yè)部頒發(fā)批準文號GMP證書(具備該疫苗生產線)產品復核檢驗(具備生產該疫苗的能力)標簽、說明書樣稿審查(符合規(guī)程規(guī)定)省級文號？,菌 （毒）種,菌（毒）種是疫苗生產必備的原材料，國家對菌（毒

2、）的保管和使用有嚴格的規(guī)定和限制（生物安全問題）。生產疫苗的菌（毒）種來源：中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所或新獸藥轉讓單位。菌（毒）種保管和使用：基礎種毒由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所或其委托的保管單位進行生產、鑒定和保管，生產用種子批由企業(yè)生產、鑒定和保管。,菌 （毒）種分類,菌（毒）種分強毒和弱毒強毒：通常指從得病動物體內分離到的致病毒株，只能用于制造滅活疫苗和檢驗用弱毒：通常是采用人工的方法用強毒致弱而成，一般于制造活疫苗,菌 （毒）種質量標準

3、,生物學特性明顯、歷史清楚：形態(tài)、培養(yǎng)特性、生化特性及血清免疫學特性等明顯，易于鑒別；人工感染動物引起穩(wěn)定一致的臨床癥狀和病理變化特征；原始細菌或病毒株的來源地區(qū)、動物品種流行資料清楚；分離鑒定資料完整；傳代、保藏和生物學特性檢查方法明確。遺傳學上相對純一與穩(wěn)定：菌毒種在傳代增殖過程中某些遺傳形狀會發(fā)生改變和分離，如形態(tài)特征、毒力、反應原性、免疫原性等方面，因此要求制造生物制品的菌（毒）種的這種改變和分離越小越好，應經常進行挑選，純化

4、和克隆。,,反應原性和免疫原性優(yōu)良：反應原性高，即使微量量的抗原物質進入機體內既能產生強烈的免疫反應，血清學上會出現(xiàn)很高的特意性；優(yōu)良的免疫原性物質能使免疫動物產生完善的免疫應答，從而獲得堅強的免疫力毒力應在規(guī)定的范圍以內：用于制造弱毒疫苗的菌毒種，毒力應盡量弱一些；用于制造抗血清、滅活疫苗和疫苗效力檢測的菌（毒）種毒力應強，且抗原性要盡量高,菌（毒）種的篩選程序和內容,,,,弱毒菌（毒）種的選育,疫苗《制造及檢驗規(guī)程》,任何一種疫苗

5、都有其《制造及檢驗規(guī)程》，它是國家法定標準。疫苗的生產必須嚴格按《規(guī)程》規(guī)定的方法進行生產和檢驗，若要改變方法，則要提供研究材料證明是可行的，并報農業(yè)部評審批準，形成新《規(guī)程》才能進行生產。《規(guī)程》來源中華人民共和國《獸用生物制品規(guī)程》（常規(guī)疫苗）轉讓單位（新獸藥）,廠房、設施和儀器設備,《GMP》證書是疫苗生產的準入證， 疫苗生產必需擁有與生產工藝相符合的生產線 GMP 生產車間設計要求功能區(qū)：抗原制備區(qū)、成品生產區(qū)、洗滌

6、區(qū)、辦公區(qū)。各區(qū)域和功能間以潔凈走廊相連，嚴格按人流物流分開原則進行設計。潔凈度：按各功能間潔凈度、壓力、壓差要求設計施工。有10萬級區(qū)、萬級區(qū)和局部百級區(qū)。六大系統(tǒng)：供電、供水、供汽、污水處理、凈化、監(jiān)控。,廠房、設施和儀器設備,檢驗設施質檢室檢驗動物舍（應配備有符合各類實驗動物級別飼養(yǎng)設施）倉儲設施原輔材料庫半成品庫成品庫,廠房、設施和儀器設備,滅菌設備：高壓蒸氣滅菌柜、干熱箱、鍋爐等；凈化設備：凈化機組、無菌室、

7、超凈工作臺等；微生物培養(yǎng)設施設備：溫室、孵化器、細胞培養(yǎng)轉瓶機、各種罐體、生化培養(yǎng)箱等；乳化設備：各種罐體、膠體摸、高壓勻漿機等；凍干設備：凍干機；灌裝設備：洗烘連動線、自動灌裝加塞聯(lián)動機；包裝設備：扎蓋機、帖標機；冷藏冷凍設施設備：冷庫、冷柜、液氮罐等；污水廢棄物處理設施設備：滅菌柜、消毒罐、污水處理站；檢驗儀器設施設備：各種顯微鏡、水分測定儀、二氧化碳培養(yǎng)箱、生物安全柜、動物房等。,福州大北農公司總體布局圖,,,,,

8、,,,,,,,,,,,,,疫苗生產工藝流程,菌（毒）種 培養(yǎng)物（培養(yǎng)基、動 物、禽胚或細胞等） 收獲抗原（培養(yǎng)液、含毒組織、胚液或細胞液等） 配苗 分裝 凍干成活疫苗或滅活后制成滅 活疫苗。,,,,,,細菌疫苗的制造流程,蛋白胨、肉浸液等原料,,,,病毒性細胞疫苗的制造工藝流程,健康動物（或胚胎）,,,,,,,病毒性組織疫苗的制造工藝流程,感染動物或胚胎,分裝、扎蓋、

9、貼簽,,影響疫苗質量的關鍵環(huán)節(jié),活疫苗生產用菌（毒）種的制備是否優(yōu)良制苗用抗原制備（微生物增殖）是否高效凍干保護劑的選擇和凍干曲線的制定是否合理滅活疫苗生產用菌（毒）種的制備是否優(yōu)良制苗用抗原制備（微生物增殖）是否高效抗原滅活是否徹底乳化工藝是否先進,疫苗抗原制造技術介紹,細菌類疫苗抗原增殖技術（培養(yǎng)基增殖）細菌培養(yǎng)是指細菌在動物體外的人工培養(yǎng)基上以及人工控制的環(huán)境中（通常用培養(yǎng)罐進行培養(yǎng)）生長繁殖的過程。細菌性疫苗都

10、是利用培養(yǎng)基制造的，首先通過分離培養(yǎng)，獲得單個菌落，制備細菌種子，然后逐級培養(yǎng)進行規(guī)?；a。,,細菌類疫苗抗原增殖技術（關鍵控制點）培養(yǎng)基質量：培養(yǎng)細菌類疫苗抗原的培養(yǎng)基一般是人工制備的一種液體培養(yǎng)基，它含有培養(yǎng)相應細菌所需營養(yǎng)成分，包括水、氮源、碳源、無機源和生長因子等它的好壞直接影響到產菌量和檢驗結果。,,生產用菌種菌落挑選符合細菌培養(yǎng)特性活菌含量符合要求純凈無污染代次按規(guī)定控制工藝的穩(wěn)定性培養(yǎng)條件工藝技術（各種參

11、數(shù)如種子接種量、培養(yǎng)時間、收獲時間等）,,傳統(tǒng)病毒類疫苗抗原增殖技術動物增殖禽胚增殖細胞增殖,5、疫苗檢驗,活疫苗物理性狀（凍干苗） 無菌檢驗（純粹檢驗）鑒別檢驗：特異性血清中和檢驗。外源病毒檢驗（病毒類疫苗）：中和法檢驗?；罹嫈?shù)（細菌類疫苗）：平板計數(shù)。病毒含量測定（病毒類疫苗） ：EID50、ELD50或TCID50。,,安全檢驗：動物或雞胚（劑量幾倍至幾十倍）效力檢驗：攻毒保護或微生物含量測定。水份測定（凍

12、干苗）：4%以內。真空度測定（凍干苗）：白色、粉色或紫色輝光。,,滅活疫苗滅活檢驗：半成品檢測：EID50、ELD50或TCID50 。物理性狀：外觀、劑型、穩(wěn)定性、粘度檢驗。無菌檢驗：培養(yǎng)基檢測安全檢驗：動物檢驗效力檢驗：攻毒保護或測抗體。滅活劑含量測定：化學分析,6、疫苗保存,疫苗對溫度極為敏感，保存不當會使效價嚴重受損（尤其是活疫苗）或劑型破壞，并導致疫苗失效，因此應嚴格在規(guī)定的條件下保存。,7、豬瘟活疫苗產品介紹,

13、種類：豬瘟活疫苗根據抗原制備途徑不同又分為：豬瘟活疫苗（成兔脾淋源）豬瘟活疫苗（乳兔源）豬瘟活疫苗（細胞源）豬瘟活疫苗（牛體源）疫苗研究和發(fā)展歷史背景,3.6豬瘟活疫苗產品介紹—生產和使用對比,豬瘟活疫苗質量控制要素,菌毒種純凈（細菌和外源性病毒污染）含毒量高于國家標準代次控制在5代以內原材料的選擇組織苗家兔的選擇（兔種、年齡、體重、健康狀況等）乳兔的選擇（日齡、體重、健康狀況等）細胞苗細胞的選擇（無污染外

14、原病毒等）,豬瘟活疫苗質量控制要素,生產環(huán)境控制 組織苗動物飼養(yǎng)條件控制接毒后動物反應觀察與判斷生產線功能間潔凈級別要求 細胞苗細胞檢測（BVDV等）健康細胞和接毒后細胞的觀察與判斷生產線功能間潔凈級別要求半成品檢測成品檢測,四、疫苗生產質量控制,質量控制意義質量控制要求質量控制保證措施（獸藥GMP管理）疫苗質量評價,1、質量控制意義,國家強制要求 禽流感事件，人血白蛋白事件企業(yè)自身要求 品牌、效益、責任

15、 生物制品特殊性表現(xiàn)在在生產和使用過程中人和動物的安全性（污染、混毒、人畜共患）對環(huán)境的安全性群體性危害,2、質量控制要求,安全性：毒副作用、殘留、環(huán)境、人類有效性：有效成分達到要求，療效確切均一性：批間、最小單元間、貯存運輸后等穩(wěn)定性：貯存期穩(wěn)定，有較長的有效期方便性：給藥的方式、途徑經濟性：在保證質量的前提下，改進生產工藝，提高效力，降低成本,3、保證措施——獸藥GMP管理,GMP是英文Good Manufact

16、uring Practice for Drugs的縮寫，直譯為“優(yōu)良產品的生產實踐”。我國的《獸藥GMP》是《藥品生產質量管理規(guī)范的簡稱》。 《獸藥GMP》是在獸藥生產過程中，用科學、規(guī)范化的條件和方法來保證生產優(yōu)良獸藥的整套科學體系。它實施的目標就是對獸藥生產的全過程進行質量控制，以保證生產的獸藥質量是合格優(yōu)良的。,3、保證措施——獸藥GMP背景,GMP是從藥品生產實踐中取得經驗教訓的總結。人類社會經歷了12次藥物災難，特

17、別是20世紀出現(xiàn)的藥物災難“反應停”事件后，公眾要求制定嚴格監(jiān)督法律；最早的GMP是由美國坦普爾大學6名教授編寫制定；1963年美國頒布第一部GMP，美國FDA經過實施；1975年WHO正式公布GMP，開始向成員國推薦，并確定為WHO的法規(guī)之一，迄今為止有100多個國家實施了GMP；我國醫(yī)用藥品從1982年開始頒布GMP，農業(yè)部于己于1989年頒布并決定實施GMP，規(guī)定至2005年12月31日未取得《GMP合格證》的企業(yè)，不得進

18、行藥品生產。,3、保證措施——控制要求,,,,,,,生產、管理人員,廠房、設施、設備,原料、包裝材料,生產方法,檢驗、監(jiān)控,售后服務,經檢驗合格的,經過驗證的,可靠的,完善的,經驗證合適的,訓練有素的,,,,,GMP,,基本控制要求,影響質量的因素,完善的,管理文件,,3、保證措施——控制要求,在GMP管理要求中，3條主線貫穿全過程生產處處防污染：原材料或產品被微生物或外來物攙雜、玷污、混雜、失真、遺漏、任意等造成產品的質量問題，生產

19、過程對環(huán)境和人員的安全性：事物件件有驗證：能證明任何程序、生產過程、設備、物料、活動或系統(tǒng)能導致預期結果，有文件證明的行動。凡是須問個為什么？怎么樣？好不好？行不行？----通過驗證----放心使用工作一律守制度：有一項工作或活動就必須有一項制度；有制度就必須執(zhí)行；有執(zhí)行就必須有綜合（分析、檢查）；有綜合就有提高（改進、修訂）,3、保證措施——管理軟件,軟件：是指企業(yè)對管理體系中采用的全部要素、要求和規(guī)定編制成各種制度、標準和程序形

20、成文件系統(tǒng)，在實施中及時正確地記錄執(zhí)行情況且保存完整的執(zhí)行記錄。從組織架構、工作標準到記錄（憑證）等都進行了詳細的制定，它是質量控制的重要保證。,3、保證措施—過程控制方法,過程控制方法：監(jiān)督加檢查（檢驗）人員（培訓、技能等）原輔材料（供應商評估、小樣實驗、檢驗 ）設備儀器定期驗證和校驗生產過程監(jiān)督和檢查（半成品檢驗）產品檢驗（企業(yè)內控標準）批記錄核查、批簽發(fā)售后服務（運輸、保存、使用注意事項、客戶訪問、退回產品的處理、不

21、良反應的處理等）,3、保證措施——過程控制目標,控制管理目標把影響產品質量的人為差錯，減少到最低程度防止一切對產品的污染、交叉污染和產品質量下降的情況發(fā)生建立完善的質量保證體系，確保GMP的有效實施 產品質量優(yōu)劣取決于企業(yè)的質量觀是否保證GMP的有效實施,四、疫苗質量評價,生產過程評價檢驗結果評價安全性效力穩(wěn)定性臨床使用效果評價（國家標準與企業(yè)內控標準差異）自家苗？,五、疫苗研究發(fā)展方向,傳統(tǒng)疫苗改進精制化（

22、減少副反應）；規(guī)模化（改進工藝、提高產能、降低成本）；耐熱化（有利于保存和運輸）；多聯(lián)多價化（減少動物應激）；高效化（改進疫苗質量，提高內控標準，增強疫苗免疫效果，如種毒的改造、佐劑的運用等）。,,新型疫苗研發(fā)：以分子生物學技術為基礎，研究新型疫苗是新世紀疫苗研究的主導方向。新?。òㄗ儺悾┮呙缪邪l(fā)：企業(yè)與科研單位聯(lián)合開發(fā)已成為趨勢，一些企業(yè)成立的研發(fā)部門也在從事基礎研究和臨床應用研究，為生產出高質量的疫苗奠定了基礎,,謝謝！