簡介:維生素D臨床知識357266812WANGTJETALVITAMINDDEFICIENCYANDRISKOFCARDIOVASCULARDISEASECIRCULATION2008117503511,體內(nèi)維生素D水平不足與非骨骼性疾病的風險增加有相關(guān)性,包括心血管疾病、高血壓、癌癥、糖尿病、多發(fā)性硬化癥、類風濕性關(guān)節(jié)炎、傳染性疾病等。,參考文獻1HOLICKMFVITAMINDDEFICIENCYNENGLJMED2007357266812WANGTJETALVITAMINDDEFICIENCYANDRISKOFCARDIOVASCULARDISEASECIRCULATION2008117503511,3、維生素D與疾病,(1)佝僂病、手足搐搦癥(2)骨軟化病(3)骨質(zhì)疏松(4)維生素D中毒,病因,1、日光照射不足主要病因,2、VITD攝入不足,3、生長速度快,4、藥物等,5藥物影響,(1)佝僂病、手足抽搐癥,,20,VITD→CAP→骨樣組織鈣化障礙且繼續(xù)增殖,,,骨骺端鈣化障礙,骺線參差不齊→鈣化帶增厚或毛刷樣、杯口樣改變,骨樣組織堆積→骨骺端膨出,肋骨串珠,手鐲、腳鐲,骨干鈣化障礙→骨質(zhì)疏松→彎曲變形(郝氏溝、“O”、“X”腿)病理性骨折,扁平骨鈣化障礙→顱骨軟化,,骨樣組織堆積→方顱,,,,,,,,病理,(1)佝僂病、手足抽搐癥,胸部多見于1歲左右小兒,肋骨串珠,雞胸,郝氏溝,漏斗胸,上述畸形均使胸腔變小,影響呼吸功能,臨床表現(xiàn),(1)佝僂病、手足抽搐癥,四肢,,腕踝,,6個月以上小兒,手鐲、腳鐲,下肢,,1歲以上小兒,“O”“X”型腿,(1)佝僂病、手足抽搐癥,(1)佝僂病、手足抽搐癥,全身肌張力下降,骨骼?。ㄗ⒄?、走晚)腹肌肌張力下降,呈蛙腹,(1)佝僂病、手足抽搐癥,神經(jīng)興奮性改變,腦皮層功能減低的表現(xiàn),條件反射形成慢,表情淡漠,語言發(fā)育落后,,免疫力低下易合并感染、且易遷延、反復(fù),(1)佝僂病、手足抽搐癥,血生化改變明顯,,血CA稍下降,血P明顯下降,25(OH)D31,25(OH2D3,X線改變長骨,骨骺軟骨明顯增寬→2MM,干骺端鈣化帶消失,呈毛刷樣、杯口樣改變,骨質(zhì)普遍稀疏,密度減低,骨干可有彎曲或骨折,,,CAP明顯下降,AKP明顯升高,輔助檢查,(1)佝僂病、手足抽搐癥,輔助檢查,(1)佝僂病、手足抽搐癥,治療,(一)維生素D制劑,口服法,,維生素D20004000IU/D(50100UG/D,1,25OH2D3羅鈣全0520UG/D(2080IU/D),一個月后改為預(yù)防量400IU/D,肌注法適合重癥、不能口服者,VITD32030萬IU,初期1次,激期23次,間隔24周,23月后給預(yù)防量。,注意同時用鈣劑,,,(1)佝僂病、手足抽搐癥,(二)鈣劑治療,肌注VITD時有搐搦者食物中鈣量不足者,適應(yīng)癥,,(三)矯形治療,治療,(1)佝僂病、手足抽搐癥,(一)多做戶外活動,(二)合理膳食,母乳喂養(yǎng)及配方奶喂養(yǎng)及時添加輔食含維生素D的食物防止偏食,,,,,(三)疾病的預(yù)防,預(yù)防,(1)佝僂病、手足抽搐癥,(四)預(yù)防時間從圍生期開始,1歲以內(nèi)嬰兒為重點,持續(xù)到3歲,1、圍生期從妊娠28周開始,補充VITD,800IU/D口服,1020萬IU肌注,適當補鈣,2、新生兒期,生后12周開始,,口服400800IU/D,肌注1020萬IU(可維持12月),(1)佝僂病、手足抽搐癥,,3、嬰兒期,口服400800IU/D(不可間斷),4、幼兒期,夏季增加戶外活動,可不用VITD,冬季(10月中旬),南方1020萬IU(肌注),北方2040萬IU(肌注),,(1)佝僂病、手足抽搐癥,33,(2)骨軟化病,骨軟化病由于成人缺乏維生素D及鈣質(zhì)引起骨基質(zhì)礦化障礙,以骨質(zhì)軟化和骨骼畸形為特征。病人多為女性。,臨床表現(xiàn),骨痛活動常受限,步態(tài)搖擺、步行困難,病理性骨折,長骨、肋骨、骨盆和脊柱骨均可發(fā)生胸廓兩側(cè)內(nèi)陷,胸腔縮小兩側(cè)肋緣可及髂嵴或其間距明顯縮短。骨盆三葉畸形,身高縮短,可達10CM以上。,(2)骨軟化病,骨質(zhì)軟化癥X線表現(xiàn),早期普遍性骨質(zhì)疏松,密度減低,骨皮質(zhì)變薄,嚴重者呈線條狀。髓腔透亮度增加。骨小梁先是模糊,最終消失,可出現(xiàn)多個囊狀透光區(qū)。,(2)骨軟化病,2假骨折是骨質(zhì)軟化癥的X線特點(稱為LOOSER帶)。表現(xiàn)為橫越骨皮質(zhì)的透明線,其邊緣密度略高,常呈對稱而多發(fā)。多見于肩胛骨、肋骨、坐骨、恥骨等。骨折處無骨痂形成和錯位,日久可出現(xiàn)骨骼彎曲畸形。,(2)骨軟化病,骨質(zhì)軟化癥X線表現(xiàn),骨質(zhì)軟化癥X線表現(xiàn),,,假骨折,LOOSER帶,(2)骨軟化病,,雙凹征,骨質(zhì)軟化癥X線表現(xiàn),(2)骨軟化病,治療,維生素D缺乏補充維生素D維生素D3400800IU一般不超過每日4000IU增加鈣磷攝入,(2)骨軟化病,VDDRI1,25雙羥維生素D3(羅鈣全)10ΜG/日維生素D220,000100,000U/日或25羥維生素D(0110MG/日)增加鈣磷攝入鈣劑115克/日,(2)骨軟化病,,,,正常骨骨質(zhì)疏松骨,以骨強度受損導致骨折危險性升高為特征的骨骼疾病。骨強度主要反映了骨密度和骨質(zhì)量兩個方面的綜合特征。,NIHCONSENSUSDEVELOPMENTPANELONOSTEOPOROSISJAMA285200178595,(3)骨質(zhì)疏松,42,(3)骨質(zhì)疏松,(3)骨質(zhì)疏松,臨床表現(xiàn),骨痛(腰背酸疼痛)骨折身高縮短,骨骼畸形功能障礙(活動受限),(3)骨質(zhì)疏松,骨質(zhì)疏松常見骨折,椎體骨折橈骨遠端骨折髖部骨折肱骨外科頸骨折,(3)骨質(zhì)疏松,防治藥物,骨吸收抑制劑骨形成促進劑鈣劑氟化物維生素D甲狀旁腺素二膦酸鹽維生素D降鈣素合成類固醇雌激素選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑,,,,(3)骨質(zhì)疏松,發(fā)病機理血漿中25(OH)D3水平過高,而不是1,25(OH)2D3水平升高造成。高維生素D血癥病人血中25(OH)D濃度可比正常個體高15倍,但是他們的1,25(OH)2D3水平?jīng)]有顯著變化。短期多次大劑量維生素D治療維生素D預(yù)防劑量過大誤診佝僂病錯誤治療,47,(4)維生素D中毒,診斷維生素D過量病史早期血鈣升高高于3MMOL/LX線檢查軟組織鈣化,48,(4)維生素D中毒,二、維生素D檢測指南與方法,1、維生素D檢測指南2、維生素D檢測方法,1、維生素D檢測指南,(1)維生素D缺乏診斷程序(2)建議維生素D缺乏危險人群飲食補充維生素D(3)維生素D治療和預(yù)防策略,內(nèi)分泌學會2011年6月6日發(fā)表維生素D缺乏評估、治療和預(yù)防的臨床實踐指南,,,,全文見JOURNALOFCLINICALENDOCRINOLOGYANDMETABOLISM與內(nèi)分泌學,該指南針對不同年齡段、不同疾病背景的維生素D缺乏高危、低危人群,進一步明確了維生素D缺乏的有效評估、飲食補充和藥物預(yù)防治療的具體實施方法,指明了維生素D在非血鈣受益上的不確定性,旨在達到維生素D缺乏防治的最優(yōu)化,內(nèi)分泌學會2011年6月6日發(fā)表維生素D缺乏評估、治療和預(yù)防的臨床實踐指南,,,,指南認為。維生素D缺乏的高危人群(例如西班牙裔、黑種人、妊娠婦女和肥胖個體等)應(yīng)當接受維生素D水平篩查。外周血血清25羥基維生素D水平低于20NG/ML者應(yīng)被診斷為維生素D缺乏。,全文見JOURNALOFCLINICALENDOCRINOLOGYANDMETABOLISM與內(nèi)分泌學,內(nèi)分泌學會2011年6月6日發(fā)表維生素D缺乏評估、治療和預(yù)防的臨床實踐指南,,,,全文見JOURNALOFCLINICALENDOCRINOLOGYANDMETABOLISM與內(nèi)分泌學,指南中寫道,現(xiàn)有的所有證據(jù)均表明,兒童和成人預(yù)防佝僂病或骨軟化的最低血25羥維生素D水平應(yīng)為20NG/ML,但為了增強維生素D對鈣、骨骼以及肌肉代謝的積極影響,血25羥維生素D的水平應(yīng)高于30NG/ML。,指南推薦的維生素D缺乏的診斷程序推薦對于有維生素D缺乏危險者,采用可靠方法檢測其血清循環(huán)25羥維生素D25(OH)D水平,以評價患者體內(nèi)的維生素D狀況。維生素D缺乏定義為25(OH)D水平低于20NG/ML(50NMOL/L)。不推薦使用血清1,25二羥維生素D1,25(OH)2D檢測評價維生素D缺乏,僅在監(jiān)測特定情況如獲得性和遺傳性維生素D和磷酸鹽代謝紊亂時應(yīng)用,54,(1)維生素D缺乏診斷程序,25(OH)D是血液循環(huán)中維生素D最主要的存在形式,半衰期23周,是監(jiān)測維生素D狀態(tài)的最佳指標。1,25(OH)2D在血液中濃度比25(OH)D低1000倍,半衰期約4小時,且對PTH、鈣、磷的調(diào)控非常敏感,1,25(OH)2D不能反映維生素D的儲備水平,血清1,25(OH)2D在維生素D缺乏時經(jīng)常是正常的甚至升高,因此檢測其濃度對于監(jiān)測病人的維生素D的狀態(tài)沒有幫助。,(1)維生素D缺乏診斷程序,維生素D缺乏評估、治療和預(yù)防的臨床實踐指南,,,建議維生素D缺乏危險人群飲食補充維生素D,(2)建議補充維生素D,維生素D缺乏評估、治療和預(yù)防的臨床實踐指南,,,建議維生素D缺乏危險人群飲食補充維生素D,(2)建議補充維生素D,維生素D缺乏評估、治療和預(yù)防的臨床實踐指南,,,建議維生素D缺乏危險人群飲食補充維生素D,(2)建議補充維生素D,維生素D缺乏評估、治療和預(yù)防的臨床實踐指南,,,治療和預(yù)防策略,(3)治療和預(yù)防策略,維生素D缺乏評估、治療和預(yù)防的臨床實踐指南,,,治療和預(yù)防策略,(3)治療和預(yù)防策略,維生素D缺乏評估、治療和預(yù)防的臨床實踐指南,,,治療和預(yù)防策略,(3)治療和預(yù)防策略,2、維生素D檢測方法,(1)體內(nèi)維D水平含量與意義(2)檢測維生素D的方法,63,體內(nèi)血中25羥維生素D水平含量與意義,據(jù)估計,全世界大約10億人未達到維生素D足量濃度的最低限30NG/ML,(1)體內(nèi)維D水平含量與意義,臨床常見方法幾種方法學對比ELISA的兩種產(chǎn)品對比,64,檢測維生素D的方法,(2)檢測維生素D的方法,(1)酶聯(lián)免疫法(ELISA)博暉、IDS(2)化學放光免疫法(CLIA)雅培、索靈、貝克曼等(3)電化學發(fā)光法(ECLI)羅氏,65,1、臨床常見方法,(2)檢測維生素D的方法,酶聯(lián)免疫法使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性。使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在測定時,把受檢標本(測定其中的抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開,最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺刊物定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高,故可極大地地放大反應(yīng)效果,從而使測定方法達到很高的敏感度。,66,2、幾種方法學對比,(2)檢測維生素D的方法,化學發(fā)光標記免疫分析又稱化學發(fā)光免疫分析CLIA,是用化學發(fā)光劑直接標記抗原或抗體的免疫分析方法。常用于標記的化學發(fā)光物質(zhì)有吖啶酯類化合物ACRIDINIUMESTERAE,其通過起動發(fā)光試劑作用而發(fā)光,強烈的直接發(fā)光在一秒鐘內(nèi)完成,為快速的閃爍發(fā)光。靈敏度和精確度比酶免法、熒光法高幾個數(shù)量級,可以完全替代放射免疫分析、徹底淘汰酶聯(lián)免疫分析。主要具有靈敏度高、特異性強、試劑價格低廉、試劑穩(wěn)定且有效期(618個月)、方法穩(wěn)定快速、檢測范圍寬、操作簡單自動化程度高等優(yōu)點。,67,2、幾種方法學對比,(2)檢測維生素D的方法,電化學發(fā)光技術(shù)在電極表面由電化學引發(fā)的特異性化學發(fā)光反應(yīng),用電化學發(fā)光劑三聯(lián)吡啶釕RUBPY32標記AB,通過AGAB反應(yīng)和磁珠分離技術(shù),根據(jù)三聯(lián)吡啶釕在電極上發(fā)出的光強度對待測的AG或AB進行定量/定性。高度敏感,可達PG/ML或PMOL水平;特異性強,重復(fù)性好,CV<5%。測定范圍寬,可達7個數(shù)量級。試劑穩(wěn)定,無毒害,無污染,有效期長,達數(shù)月至數(shù)年。操作簡單,耗時短,易于自動化。在對環(huán)保很重視的國家,CLIA成了取代RIA的首選方法。,68,2、幾種方法學對比,(2)檢測維生素D的方法,69,免疫標記檢測技術(shù)對比,(2)檢測維生素D的方法,IDSVSBHEXL重復(fù)性批內(nèi)、批間時間,70,3、ELISA的兩種產(chǎn)品對比,(2)檢測維生素D的方法,三、博暉維生素D試劑盒介紹,博暉公司維生素D3檢測原理維生素D3檢測試驗準備與流程維生素D3檢測試驗步驟與數(shù)據(jù)分析維生素D3檢測操作規(guī)范及注意事項,
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簡介:第十章細胞的衰老與死亡,,第一節(jié)細胞衰老(CELLSENESCENCE),一、細胞衰老的概念和特點,細胞衰老細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)、化學成分和生理功能逐漸衰退的現(xiàn)象。機體衰老≠細胞衰老細胞總體的衰老反應(yīng)了機體的衰老,細胞的衰老是機體衰老和老年病發(fā)病的基礎(chǔ)。,二、細胞的壽命與HAYFLICK界限,不同類型細胞的壽命很不一致,細胞的壽命接近于動物的整體壽命神經(jīng)元、脂肪細胞、肌細胞等。緩慢更新的細胞,其壽命比機體壽命短肝細胞、胃壁細胞等??焖俑碌募毎砥ぜ毎?、紅細胞和白細胞等。,,?1961年,HAYFLICK首次報道了體外培養(yǎng)的人成纖維細胞具有增殖分裂的極限。他發(fā)現(xiàn)來自胚胎的成纖維細胞分裂傳代50次后開始衰退和死亡,而來自成年組織的成纖維細胞只能培養(yǎng)15~30代就開始死亡。HAYFLICK界限體外培養(yǎng)的二倍體細胞的增殖能力和壽命不是無限的,而是有一定的限度。,體外培養(yǎng)的年輕和老人的成纖維細胞的形態(tài),物種的壽命與體外培養(yǎng)時細胞傳代次數(shù)的關(guān)系,三、細胞衰老的表現(xiàn),(一)形態(tài)改變,1、核增大、染色深、核內(nèi)有包含物2、染色質(zhì)凝聚、固縮、碎裂、溶解3、質(zhì)膜粘度增加、流動性降低4、細胞質(zhì)色素積聚、空泡形成5、線粒體數(shù)目減少、體積增大6、高爾基體囊泡腫脹、碎裂7、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)彌散、總量減少8、尼氏體消失9、包含物糖原減少、脂肪積聚10、核膜內(nèi)陷,(二)分子水平變化1、DNA復(fù)制與轉(zhuǎn)錄受到抑制。端粒DNA丟失,線粒體DNA特異性缺失,DNA氧化、斷裂、缺失和交聯(lián)。2、RNAMRNA和TRNA含量降低。3、蛋白質(zhì)含量下降,蛋白質(zhì)發(fā)生修飾反應(yīng),導致蛋白質(zhì)穩(wěn)定性、抗原性、可消化性下降,自由基使蛋白質(zhì)肽鏈斷裂,交聯(lián)而變性。4、酶分子活性中心被氧化,金屬離子丟失,酶分子的二級結(jié)構(gòu)、溶解度、等電點發(fā)生改變,總的效應(yīng)是酶失活。5、脂類不飽和脂肪酸被氧化,引起膜脂之間或與脂蛋白之間交聯(lián),膜的流動性降低。,四、細胞衰老的發(fā)生機制,(一)遺傳決定學說衰老是遺傳上的一個程序化過程,其推動力和決定因素是遺傳的基因組??刂粕L發(fā)育和衰老的基因都在特定時期有序地開啟和關(guān)閉(衰老相關(guān)基因)。,正常兒童(左)嬰幼兒早衰癥患者(右),(二)自由基學說自由基在外層軌道上具有不成對電子的分子或原子基團。與其他物質(zhì)反應(yīng)時奪取電子,引起細胞氧化性損傷。自由基在機體代謝過程中產(chǎn)生(如代謝產(chǎn)生的活性氧基團,ROS),引發(fā)氧化性損傷,導致衰老。消除自由基的物質(zhì)可一定程度延緩衰老,如超氧岐化酶SOD、維生素E等。,(三)端粒鐘學說端粒隨細胞的分裂不斷縮短;端粒長度縮短到一定閾值時,細胞進入衰老。,(四)代謝廢物累積學說,,細胞功能下降→代謝廢物不能及時排出胞外,不能降解消化→代謝廢物↑→占據(jù)的空間↑→影響代謝廢物運輸→阻礙正常生理功能→衰老脂褐質(zhì)Β淀粉樣蛋白→阿爾茨海默病,(五)基因轉(zhuǎn)錄或翻譯差錯學說,年齡增長→DNA復(fù)制效率下降,核酸、蛋白質(zhì)、酶等大分子的合成差錯→細胞功能降低→衰老→死亡,(六)線粒體DNA損傷學說,(七)其他學說,(一)抗衰老基因SOD基因P53基因APOC3基因(二)衰老基因MORF4基因P16基因P21基因,五、細胞衰老的相關(guān)基因,第二節(jié)細胞死亡,細胞壞死(NECROSIS)指由環(huán)境因子或病理狀態(tài)導致的細胞死亡,為被動性、非正常的死亡。細胞凋亡(APOPTOSIS)指在特定信號誘導下,按一定程序發(fā)生的細胞死亡,為主動的、由基因決定的正常死亡,亦稱程序性死亡(PROGRAMMEDCELLDEATH,PCD)。,一、細胞死亡的原因正常死亡非正常死亡物理的化學的生物的二、細胞死亡的特征與形式壞死細胞凋亡細胞自噬雙層膜的自噬泡細胞脹亡,第三節(jié)細胞凋亡,,,,PRIZEDHORVITZ,ANDSULSTONSHAREPHYSIOLOGYORMEDICINENOBEL(2002)“FORTHEIRDISCOVERIESCONCERNINGGENETICREGULATIONOFORGANDEVELOPMENTANDPROGRAMMEDCELLDEATH”,,1090–131959CELLS,機體結(jié)構(gòu),細胞增殖,細胞分化,細胞凋亡,細胞信號轉(zhuǎn)導,染色體,(DNA與蛋白質(zhì)的相互作用),,,,,,,,,,,,,,,,,,,,衰老,,一、細胞凋亡的概念與特征,細胞凋亡是細胞在一定的生理或病理條件下,遵循自身的程序,自己結(jié)束其生命的過程。細胞凋亡亦被稱為細胞編程性死亡(PCD),即在一定的時間內(nèi),細胞按一定的程序發(fā)生的死亡,具有嚴格的基因時控性和選擇性。,細胞受到激烈的化學、物理和生物等環(huán)境因素的傷害引起。細胞膜和細胞器的膜發(fā)生破裂,線粒體腫脹。繼而溶酶體破裂,胞漿外溢,細胞解體并引起周圍組織發(fā)生炎癥反應(yīng)。,(一)細胞壞死的形態(tài)特征,細胞核染色質(zhì)斷成核小體片段,濃縮成塊,聚集于核膜下或中央部異染色質(zhì)區(qū),核呈新月狀、花瓣狀等;染色質(zhì)進一步聚集,使核膜在核膜孔處斷裂,形成核碎片或核殘片。細胞質(zhì)線粒體增大,嵴增多,空泡化;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔增殖膨大;細胞骨架結(jié)構(gòu)變得致密和紊亂。,(二)細胞凋亡的形態(tài)特征,細胞膜微絨毛、細胞突起及細胞間連接等逐漸消失;細胞膜起泡,但仍完整,未失去選擇通透性;與細胞間連接有關(guān)的蛋白質(zhì)從凋亡的膜上消失,但新出現(xiàn)一些生物大分子調(diào)節(jié)凋亡細胞的清除。,A、NORMALCELL,B、APOPTOSISAPOPTOTICBODIES,凋亡小體細胞凋亡時質(zhì)膜始終完整,胞膜突起將內(nèi)容物包被成一些囊狀小泡,即凋亡小體APOPTOTICBODY,后者被周圍細胞吞噬,無細胞內(nèi)容物外泄,不引起炎癥反應(yīng)。,(三)細胞凋亡時細胞生化改變的復(fù)雜性和多樣性,1DNA片段化,凋亡時,細胞的內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶特異地在核小體連接區(qū)切斷DNA鏈,形成長度為180200BP整數(shù)倍的寡聚核苷酸片段,在瓊脂糖凝膠電泳時,表現(xiàn)出特征性的DNA梯狀條帶DNALADDERS。壞死時DNA隨機斷裂,電泳呈彌散條帶。,2細胞凋亡中的蛋白酶,3胞質(zhì)內(nèi)CA2、PH的變化,細胞凋亡的整個過程由多種蛋白酶通過級聯(lián)切割控制??刂频蛲龅牡鞍酌赣蠧ASPASE家族、鈣蛋白酶或分裂素等。,CA2能誘導細胞凋亡H濃度引起的胞漿堿化和酸化均能影響細胞凋亡,4線粒體在細胞凋亡中的作用,①呼吸鏈受損,能量代謝受破壞→細胞死亡;②釋放細胞色素CCYTC),CYTC為凋亡所必需的CASPASE家族的激活物;③是ROS的主要來源,ROS是凋亡的信使分子和效應(yīng)分子;④滲透轉(zhuǎn)變孔PTPORES通透性增高,這是凋亡早期的決定性變化。,(四)失巢凋亡由與細胞外基質(zhì)和其他細胞脫離接觸而誘發(fā)的細胞凋亡,,,,誘導因素生理或病理因素強烈的刺激因素細胞皺縮、與相鄰細胞的連接喪失腫脹細胞膜始終保持良好的整合性破裂細胞器形態(tài)改變較輕,結(jié)構(gòu)完整腫脹、破裂、結(jié)構(gòu)崩解細胞核固縮、染色質(zhì)凝聚在核膜下呈半月狀固縮、核被膜破裂、分解凋亡小體形成一個或多個無DNA核小體DNA斷裂,有規(guī)律地降解隨機降解分子機制由凋亡相關(guān)基因調(diào)控無基因調(diào)控代謝反應(yīng)蛋白酶參與的級聯(lián)反應(yīng)無有秩序的代謝反應(yīng)周圍組織反應(yīng)無炎癥性破壞引起炎癥反應(yīng),細胞凋亡和細胞壞死的區(qū)別,細胞凋亡細胞壞死,二、細胞凋亡的影響因素,(一)凋亡抑制因子1、生理性抑制因子BCL2、突變型P532、病毒基因(二)凋亡誘導因子1、生理性誘導因子TNF2、與損傷相關(guān)的因子野生型P53、自由基3、與治療相關(guān)的因子生物治療,三、細胞凋亡的分子機制,(一)細胞凋亡受多種基因調(diào)控1、CED基因家族CED3/4促進CED9抑制2、BCL2基因家族BAX等促進BCL2等抑制3、SURVIVIN基因抑制4、ICE基因促進5、P53基因促進6、FAS和FASL促進7、CMYC基因促進或抑制8、BAG1基因抑制(二)細胞凋亡的信號轉(zhuǎn)導途徑1、死亡受體介導的信號轉(zhuǎn)導通路2、線粒體介導的信號轉(zhuǎn)導通路3、其他,四、細胞凋亡的檢測,(1)形態(tài)學檢測,(2)生化特征檢測主要針對核小體片段,(3)流式細胞儀檢測,凋亡引發(fā)包括細胞膜、細胞器和細胞核等的改變,造成熒光染料對凋亡細胞DNA可染性發(fā)生改變;以及細胞形態(tài)的改變影響了光散射特性。,普通光學顯微鏡HE、甲基綠派諾寧、GIEMSA染色熒光顯微鏡吖啶橙、HEOCHST33258染色電子顯微鏡超薄切片,瓊脂糖凝膠電泳法原位末端標記法TUNELELISA法,五、細胞凋亡的生物學意義,1、在發(fā)育過程中清除多余的細胞蹼2、清除已經(jīng)完成功能的細胞蝌蚪尾部3、清除發(fā)育不正常的細胞神經(jīng)細胞4、清除生理活動過程中無用的細胞血細胞5、清除病理活動中有潛在危險的細胞DNA損傷,六、細胞凋亡與疾病,(一)細胞凋亡過低導致相關(guān)疾病的發(fā)生1、細胞凋亡與腫瘤2、細胞凋亡與系統(tǒng)性紅斑狼瘡T淋巴細胞凋亡障礙(二)細胞凋亡過度導致相關(guān)疾病的發(fā)生1、細胞凋亡與神經(jīng)退行性疾病2、細胞凋亡與AIDS病T淋巴細胞凋亡3、細胞凋亡與心血管疾病,一、名詞解釋細胞凋亡、細胞壞死二、問題簡述細胞凋亡與細胞壞死的區(qū)別簡述細胞凋亡的生物化學特征,思考題,
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