簡介：目的建立病毒性心肌炎的體外模型，用新的化學(xué)方法提取到含量較高的廣棗總黃酮，研究廣棗總黃酮抗病毒的效果，明確病毒性心肌炎發(fā)病過程中是否存在細(xì)胞的凋亡，以及廣棗總黃酮是否抑制心肌細(xì)胞的凋亡。方法化學(xué)法提取廣棗總黃酮，高效液相法測定其含量。培養(yǎng)HELA細(xì)胞和乳鼠心肌細(xì)胞，在HELA細(xì)胞和心肌細(xì)胞水平上對柯薩奇B3病毒進(jìn)行毒力滴定，并測定廣棗總黃酮的藥物毒性，建立體外病毒性心肌炎模型，通過細(xì)胞病變抑制實驗，病毒繁殖抑制實驗測定廣棗總黃酮體外抗柯薩奇病毒能力。采用ANNEXINVFITCPI染色、HOECHST33258熒光單染觀察染色質(zhì)凝聚，觀察病毒性心肌炎發(fā)病過程中心肌細(xì)胞是否存在凋亡，以及運(yùn)用流式細(xì)胞儀檢測廣棗總黃酮是否抑制細(xì)胞凋亡。統(tǒng)計學(xué)方法采用T檢驗。結(jié)果成功建立體外病毒性心肌炎的模型，廣棗總黃酮在HELA細(xì)胞和乳鼠心肌細(xì)胞實驗中可有效抑制柯薩奇B病毒引起的細(xì)胞病變數(shù)P005，對病毒繁殖有抑制作用對數(shù)值升高一個以上，對細(xì)胞凋亡有抑制作用。結(jié)論成功建立體外細(xì)胞模型，通過體外實驗證實提取的廣棗總黃酮對心肌細(xì)胞有保護(hù)作用，通過凋亡相關(guān)實驗證實病毒性心肌炎發(fā)病過程中有心肌細(xì)胞凋亡，且廣棗總黃酮能抑制心肌細(xì)胞凋亡作用。

簡介：登革熱DENGUEFEVERDF是由登革病毒引起的蟲媒病毒性傳染病，主要通A過埃及伊蚊ΑEDESΑEGYPTI和白紋伊蚊ΑEDESΑLBOPICTUS傳播，登革出血熱DENGUEHEMRHAGICFEVERDHF則是登革熱的一種嚴(yán)重類型，伴有休克癥狀的登革出血熱稱為登革休克綜合征DENGUESHOCKSYNDROME，DSS。本病廣泛流行于熱帶和亞熱帶地區(qū)，是世界上分布最廣、發(fā)病人數(shù)最多、危害最大的一種蟲媒病毒性疾病，已經(jīng)成為一個世界性的嚴(yán)重公共衛(wèi)生問題。我國登革熱的首次流行發(fā)生于1873年福建省廈門市，建國后的首次暴發(fā)流行發(fā)生于1978年廣東省佛山市，自1978年以來我國已發(fā)生14次登革熱暴發(fā)流行或局部流行，以廣東、海南、福建等東南沿海地區(qū)為主，登革熱也已經(jīng)成為我國的一個嚴(yán)重公共衛(wèi)生問題。登革病毒DENGUEVIRUS，DENV屬于黃病毒科，分為Ⅰ～Ⅳ型四個血清型。DENV是正鏈RNA病毒，大小約為11KB，編碼3個結(jié)構(gòu)蛋白和7個非結(jié)構(gòu)蛋白。目前，登革熱的發(fā)病機(jī)制尚未闡明，也沒有有效的疫苗或治療藥物。新近的研究表明，RNA干擾技術(shù)可能成為治療登革病毒感染的新的突破口。RNA干擾RNAINTERFERENCE，RNAI現(xiàn)象是一種由雙鏈RNADOUBLESTRRNA，DSRNA啟動的序列特異性基因沉默機(jī)制，由REWZFIRE于1998年首先發(fā)現(xiàn)并命名。RNAI從線蟲到人類細(xì)胞中都廣泛存在，是自然界中生物抵抗外源基因或病毒入侵的一種防御方式。近年來，RNAI方面的研究取得了很大進(jìn)展，20002002年連續(xù)3年被SCIENCE雜志列入年度世界十大科學(xué)突破。RNAI技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于病毒防治、基因功能研究、腫瘤基因治療、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等多種領(lǐng)域，充分顯示了其巨大的應(yīng)用潛力。作為宿主細(xì)胞抑制病毒復(fù)制、清除病毒的一種胞內(nèi)機(jī)制，RNAI已被證明可應(yīng)用于HIV、HBV以及SARS冠狀病毒等多種抗病毒感染研究領(lǐng)域。慢病毒LENTIVIRUS是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，具有逆轉(zhuǎn)錄病毒的基本結(jié)構(gòu)，作為一種新型的基因治療載體，已廣泛應(yīng)用于多種基因功能的研究中。慢病毒能感染分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞，且慢病毒在感染細(xì)胞后能整合到受感染細(xì)胞的基因組中，隨著細(xì)胞的生長而長時間穩(wěn)定表達(dá)目的基因，因此不需要反復(fù)感染，效果持久。慢病毒介導(dǎo)的RNAI具有高效、持久、穩(wěn)定的特點，是攜帶干擾RNA的理想載體。目前，由慢病毒介導(dǎo)的RNAI抑制登革病毒復(fù)制的研究尚未見文獻(xiàn)報道，因此，本研究擬針對Ⅰ型登革病毒設(shè)計特定序列的SIRNASMALLINTERFERINGRNA，在白蚊伊蚊C636細(xì)胞中篩選可高效抑制登革病毒復(fù)制的SIRNA序列；再將該序列重組到慢病毒載體中，構(gòu)建長效表達(dá)SIRNA慢病毒載體，包裝慢病毒，并將其導(dǎo)入C636細(xì)胞中，為下一步研究RNAI長效抑制登革病毒的復(fù)制奠定基礎(chǔ)，為登革熱的疫苗研制和臨床基因治療提供依據(jù)。主要研究內(nèi)容及結(jié)果第一部分高效抑制登革病毒在蚊細(xì)胞中復(fù)制的SIRNA序列篩選1Ⅰ型登革病毒的擴(kuò)增與定量病毒毒株采用廣州市2002年Ⅰ型登革病毒流行株GZ02218，感染C336細(xì)胞進(jìn)行病毒擴(kuò)增，細(xì)胞病變達(dá)到時收獲病毒，TCID50測定病毒滴度，結(jié)果測得病毒TCID50為103501ML。2SIRNA序列的設(shè)計與合成根據(jù)GENBANK中廣州市2002年Ⅰ型登革病毒流行株GZ02218、Ⅰ型登革病毒參考株及其它Ⅰ型登革病毒基因序列，針對病毒基因組不同位置設(shè)計了10段SIRNA序列，經(jīng)生物信息學(xué)分析，選擇合成其中4段SIRNADENSI1～4。3有效SIRNA序列的初步篩選采用脂質(zhì)體法將合成的4段SIRNA序列轉(zhuǎn)染到C636細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染6小時后用登革病毒攻擊。病毒攻擊5～7天后，根據(jù)各組細(xì)胞病變情況，初步確定SIRNA片段DENSI2～4無效，片段DENSI1有效，可進(jìn)一步探討其干擾作用。4SIRNA對登革病毒干擾作用的探討1SIRNA穩(wěn)定性用標(biāo)記FAM熒光基團(tuán)的SIRNA轉(zhuǎn)染C636細(xì)胞，流式細(xì)胞儀測得轉(zhuǎn)染后6H及第1、3、5、7天含有熒光的細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的百分比分別為660％、521％、320％、135％、89％。2實驗分組C636細(xì)胞分為以下四個組正常組無SIRNA轉(zhuǎn)染、病毒感染；SIRNA組轉(zhuǎn)染SIRNA后用病毒感染攻擊；轉(zhuǎn)染對照組轉(zhuǎn)染21NT的對照SIRNA序列后用病毒感染攻擊；病毒陽性對照組不轉(zhuǎn)染SIRNA，直接用病毒感染攻擊。3SIRNA對受登革病毒攻擊的C636細(xì)胞形態(tài)的影響登革病毒攻擊7天后，觀察各組細(xì)胞形態(tài)，可見正常組細(xì)胞無病變；病毒陽性對照組和轉(zhuǎn)染對照組出現(xiàn)大量細(xì)胞病變，細(xì)胞腫脹并成片融合達(dá)到，細(xì)胞數(shù)目明顯減少；SIRNA組細(xì)胞無病變，細(xì)胞數(shù)目無明顯減少。4MTT法檢測C636細(xì)胞存活率結(jié)果登革病毒攻擊7天后，MTT法測得各組細(xì)胞存活率為SIRNA組769％±45％，轉(zhuǎn)染對照組439％±36％，病毒陽性對照組236％±146％。SIRNA組與病毒陽性對照組相比具有顯著性差異，細(xì)胞存活率增加226倍P＜005；轉(zhuǎn)染對照組與病毒陽性對照組相比無顯著性差異P＞005。5SIRNA對C636細(xì)胞內(nèi)登革病毒RNA含量的影響登革病毒攻擊7天后，用熒光定量PCR法檢測細(xì)胞內(nèi)登革病毒核酸量，正常組未檢測到病毒核酸，SIRNA組CT值為19914063，轉(zhuǎn)染對照組CT值為1463±091，病毒陽性對照組CT值為1456±039。SIRNA組與病毒陽性對照組相比△CT值為534，其病毒核酸量僅為病毒陽性對照組的12534，約140，SIRNA對C636細(xì)胞內(nèi)登革病毒復(fù)制的抑制率達(dá)到9754％，具有顯著性差異P＜005；轉(zhuǎn)染對照組與病毒陽性對照組相比△CT值為007，無顯著性差異P＞005。第二部分SIRNA慢病毒載體的構(gòu)建、包裝及鑒定1慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定1根據(jù)第一部分篩選得到的有效SIRNA片段設(shè)計合成一對DNAOLIGO序列，經(jīng)退火形成雙鏈后，在T4鏈接酶作用下，與線性化的表達(dá)質(zhì)粒PCDNATM62GWEMGFPMIR進(jìn)行鏈接反應(yīng)，產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞DH5Α，經(jīng)抗性基因BLASTICIDIN篩選得到的陽性克隆，通過測序驗證完全正確，表明重組質(zhì)粒PCDNATM62GWEMGFPMIRSR42構(gòu)建成功，大量擴(kuò)增質(zhì)粒備用。2采用GATEWAY重組技術(shù)構(gòu)建重組慢病毒載體將重組質(zhì)粒PCDNATM62GWEMGFPMIRSR42與質(zhì)粒PDONRTM221和PLENTI6V5DEST進(jìn)行快速BPLR重組反應(yīng)，得到重組慢病毒載體PLENTI6V5DESTSR42，產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞ONESHOTSTB13，經(jīng)抗性基因AMPLICILLIN篩選得到的陽性克隆，通過測序驗證完全正確，表明重組慢病毒載體構(gòu)建成功，大量擴(kuò)增質(zhì)粒備用。2慢病毒包裝與滴度測定用LIPOFECTAMIM2000將重組慢病毒載體PLENTI6V5DESTSR42，與包裝質(zhì)粒PLP1、PLP2、PLPVSVG共轉(zhuǎn)染293FT細(xì)胞，轉(zhuǎn)染48H后收集病毒上清液，經(jīng)純化后感染293FT細(xì)胞進(jìn)行病毒滴度測定，測得的病毒滴度為75107TUML。3慢病毒感染293T細(xì)胞，檢測MIRNA的表達(dá)。慢病毒以MOI5感染293FT細(xì)胞，72小時后收集細(xì)胞，TRIZOL法提取總RNA，RTPCR擴(kuò)增目的序列，擴(kuò)增產(chǎn)物測序驗證MIRNA的表達(dá)。測序結(jié)果經(jīng)序列對比完全正確，表明重組慢病毒能夠在靶細(xì)胞中表達(dá)目的基因。4慢病毒感染C636細(xì)胞慢病毒以MOI10感染C636細(xì)胞，72小時后在熒光顯微鏡下觀察GFP表達(dá)情況?？梢娐《窘M細(xì)胞內(nèi)有較多綠色熒光，而空白對照組無熒光表達(dá)，表明慢病毒成功轉(zhuǎn)染至C636細(xì)胞中。結(jié)論及研究意義1獲得了一段長為21NT的SIRNA序列，證實了其能夠有效抑制登革病毒在蚊細(xì)胞中的復(fù)制。SIRNA轉(zhuǎn)染C636細(xì)胞后，能增加細(xì)胞存活率，并減少病毒載量。2成功構(gòu)建了表達(dá)SIRNA的慢病毒載體，并將其成功轉(zhuǎn)染至C636細(xì)胞中，驗證了其在靶細(xì)胞C636細(xì)胞中的表達(dá)。3為下一步研究RNAI長效抑制登革病毒的復(fù)制奠定了基礎(chǔ)，為登革熱的疫苗研制和臨床基因治療提供了依據(jù)。

簡介：◎厶爹辦孑碩士學(xué)位論文HANDONGUNIVERSITYMASTERSTHESIS論文題目老年女性急性腦梗死后認(rèn)知障礙與性激素水平的關(guān)系研究INVESTIGATIONOFTHERELATIONSHIPBETWEENMILDCOGNITIVEIMPAIRMENTANDSERUMSEXUALHORMONESLEVELAFTERACUTEISCHEMICSTROKEOFOLD腸MEN作專導(dǎo)合作導(dǎo)2010年LO月20日結(jié)論?????????????????????????????????????．18附表???????????????????????????????????19參考文獻(xiàn)????????????????????????????．21綜述???????????????????????????????．23致謝??????????????????????????????．31

簡介：抑郁障礙是一種常見的情感障礙，是目前導(dǎo)致殘疾和死亡的第四大疾病。這種疾病嚴(yán)重地影響一個人的情緒、思維、自我感覺、人際交往以及軀體功能狀態(tài)，16％的人在一生中某個時候可能罹患抑郁。而在臨床上，抑郁癥狀常常和焦慮癥狀合并存在，抑郁障礙患者伴有明顯的焦慮癥狀和認(rèn)知功能損害。在影響抑郁障礙發(fā)病的因素中，隱性認(rèn)知易感因素和應(yīng)對方式起著非常重要的作用。伴有焦慮癥狀的抑郁障礙患者表現(xiàn)更多的緊張、擔(dān)憂及恐慌的情緒，嚴(yán)重者表現(xiàn)為精神運(yùn)動性激越，也多伴植物神經(jīng)癥狀和軀體不適，癥狀更重、更痛苦認(rèn)知功能障礙也更加突出和頑固。因此，本研究引進(jìn)并修訂了國外RISKIND等人編制的對焦慮癥狀有特異性的工具隱性不適應(yīng)風(fēng)格問卷，來測查患者的隱性認(rèn)知風(fēng)格，并對抑郁障礙患者的隱性認(rèn)知風(fēng)格、應(yīng)對方式及抑郁癥狀、焦慮癥狀、認(rèn)知功能損害間的關(guān)系進(jìn)行了研究。本研究以281名大學(xué)生及272名抑郁障礙患者為研究對象，采用訪談法、問卷調(diào)查法和心理測驗等方法收集數(shù)據(jù)。本研究包括三個方面研究一是隱性不適應(yīng)風(fēng)格問卷的修訂。選取國外應(yīng)用較普遍的隱性不適應(yīng)風(fēng)格問卷，采用訪談法和問卷調(diào)查法收集數(shù)據(jù)，對問卷進(jìn)行跨文化的修訂。研究二是伴與不伴焦慮癥狀兩組抑郁障礙患者隱性認(rèn)知風(fēng)格、抑郁癥狀及認(rèn)知功能的比較研究。采用問卷調(diào)查及心理測驗的方法收集數(shù)據(jù)，用T檢驗、方差分析等方法，分析比較患者的隱性認(rèn)知風(fēng)格、抑郁癥狀及認(rèn)知功能損害。研究三是隱性認(rèn)知風(fēng)格與抑郁障礙癥狀間的關(guān)系研究。通過問卷調(diào)查、心理測驗的方法收集數(shù)據(jù)，用結(jié)構(gòu)方程模型驗證應(yīng)對方式對隱性認(rèn)知風(fēng)格和抑郁障礙癥狀抑郁癥狀、焦慮癥狀、認(rèn)知功能損害間關(guān)系的中介效應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)1本研究修訂的隱性不適應(yīng)風(fēng)格問卷LMSQ在大學(xué)生中具有較好的信效度，對抑郁障礙患者樣本也適用，可作為一種有效的隱性認(rèn)知風(fēng)格測量工具在心理學(xué)中使用。2與不伴焦慮癥狀的抑郁障礙患者相比，伴有焦慮癥狀抑郁障礙患者的抑郁癥狀更嚴(yán)重；認(rèn)知功能損害更突出、更頑固；隱性認(rèn)知風(fēng)格得分更高，更傾向于高估外界的威脅。3在隱性認(rèn)知風(fēng)格與抑郁障礙癥狀的關(guān)系上，隱性認(rèn)知風(fēng)格可以正向預(yù)測抑郁障礙患者的焦慮癥狀，負(fù)向預(yù)測應(yīng)對方式。應(yīng)對方式可部分中介隱性認(rèn)知風(fēng)格對抑郁癥狀、焦慮癥狀和認(rèn)知功能的效應(yīng)。

簡介：點擊查看更多基于柯薩奇B3反向遺傳系統(tǒng)的病毒示蹤及CXCL10重組疫苗的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：推進(jìn)信息化教育，開展多媒體教學(xué)與網(wǎng)絡(luò)教學(xué)迫切需要大批優(yōu)質(zhì)的三維動畫學(xué)習(xí)資源，然而部分開發(fā)者對于三維動畫的認(rèn)識，還停留在信息傳遞的層面，把學(xué)習(xí)者放在被動接受的地位上。認(rèn)知工具的基本思想是將學(xué)習(xí)者放在認(rèn)知主體的地位上，幫助學(xué)習(xí)者完成認(rèn)知操作、促進(jìn)學(xué)習(xí)者進(jìn)行思維、問題解決和反思。本文認(rèn)為用認(rèn)知工具思想來指導(dǎo)三維動畫學(xué)習(xí)資源的設(shè)計，可以發(fā)揮三維動畫在教育領(lǐng)域的價值，有效促進(jìn)學(xué)習(xí)者的認(rèn)知。圍繞這個主題，本研究主要完成了以下幾個方面的工作第一，分析了三維動畫的特點及其在教育領(lǐng)域的開發(fā)情況，梳理了國內(nèi)外有關(guān)認(rèn)知工具理論的研究，探討三維動畫作為認(rèn)知工具的特點和功能目標(biāo)。第二，在理論研究的基礎(chǔ)上，分析了學(xué)習(xí)者的認(rèn)知過程和視知覺規(guī)律，提出了具有較好操作性的設(shè)計策略，并且結(jié)合案例進(jìn)行闡述，以幫助三維動畫的開發(fā)者設(shè)計出優(yōu)質(zhì)的、符合學(xué)習(xí)需要的資源。第三，在認(rèn)知工具理論的指導(dǎo)下，基于上述設(shè)計策略，開發(fā)了三維教學(xué)動畫作品，并且分析了設(shè)計策略在具體實例的開發(fā)中的運(yùn)用，歸納了具體實例開發(fā)中的一些經(jīng)驗及努力方向。最后，對本研究進(jìn)行了總結(jié)，反思了不足之處，探討了進(jìn)一步的研究方向。

簡介：第一部分覆蓋中國人群HLA特異的HCMV串聯(lián)表位的確定及預(yù)測目的覆蓋中國人群HLA特異的HCMV串聯(lián)表位的確定及預(yù)測。方法1、根據(jù)山東大學(xué)衛(wèi)生系統(tǒng)計教研室薛付忠老師建立的中國HLAⅠ積累表型頻率（CPF）空間預(yù)測系統(tǒng)依次預(yù)測A2，A24，A1，A3，A11，A68，B44，B7，A23，A26，B35，B38，B8，B27十四個基因位點在中國人群的覆蓋率（CPF值），評價和預(yù)測HLA特異的HCMV串聯(lián)表位核酸疫苗在中國不同地理位置上人群內(nèi)的免疫效果；2、利用從1996年以來發(fā)表在PUBMED上被SCI收錄的23篇研究HCMV表位的文獻(xiàn)，從中選擇能針對HCMV多種蛋白抗原的多個CTL表位、TH表位和B細(xì)胞表位，能夠激發(fā)機(jī)體的細(xì)胞免疫應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答，且能與HLAⅠ分子和HLAⅡ分子的基因位點穩(wěn)定結(jié)合的表位；3、利用SYFPEITHIMHC表型及表位預(yù)測系統(tǒng)和MAPPP蛋白酶體降解預(yù)測系統(tǒng)對所選表位進(jìn)行表位肽預(yù)測和MAPPP蛋白酶體切割表位生成預(yù)測；4、從PUBMEDNUCLEOTIDENC_001347人巨細(xì)胞病病毒AD169株各蛋白的基因序列中找出各表位相對應(yīng)的核苷酸序列并核對，將各表位的核苷酸序列按等位基因的頻率分布順序排列起來，串聯(lián)成一條核苷酸序列；5根據(jù)KOZAK規(guī)則引入KOZAK序列以獲得HCMV串聯(lián)表位核苷酸序列在真核表達(dá)載體中的高效表達(dá)；6將HCMV串聯(lián)表位的核苷酸序列輸入DNAMAN軟件，根據(jù)輸出的酶切位點結(jié)果結(jié)合所要構(gòu)建入穿梭載體的多克隆位點，確定串聯(lián)表位核苷酸序列兩端的酶切位點。結(jié)論1、根據(jù)山東大學(xué)衛(wèi)生系統(tǒng)計教研室薛付忠老師建立的中國HLAⅠ積累表型頻率（CPF）空間預(yù)測系統(tǒng)，對所選HCMV表位結(jié)合的14個HLA基因位點及其組合進(jìn)行了預(yù)測，顯示A2，A24，A1，A3，A11五個優(yōu)勢基因位點的CPF值是881％，；A2，A24，A1，A3，A11，A68，B44，B7，A23，A26，B35，B38，B8，B27十四個基因位點的CPF值是921％，顯示HLA特異的HCMV串聯(lián)表位核酸疫苗在中國人群的覆蓋頻率達(dá)90％以上，預(yù)測了HLA特異的HCMV串聯(lián)表位核酸疫苗在中國不同地理位置上人群內(nèi)的免疫效果，理論上其免疫效果可達(dá)90％以上。2、我們選擇了HCMV的十五種抗原蛋白PP28，PP50，PP65，PP150，PP71，GH，GB，IE1，IE2，US2，US3，US6，US11，UL16，UL18，分別在病毒的黏附、復(fù)制、組裝及再激活過程中表達(dá)，在這些抗原中選取了84個表位，其中針對HLAⅠ分子基因位點的CTL表位76個，針對HLAⅡ分子基因位點的TH表位7個，能激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體的B細(xì)胞表位1個，通過啟動針對上述抗原表位的細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答，理論上可以在各個階段控制病毒的復(fù)制，防止HCMV疾病的形成。3、應(yīng)用DNAMAN軟件、KOZAK規(guī)則及PUBMEDNUCLEOTIDENC001347HUMANHERPESVIRUS5STRAINAD169HCMV基因組得出了覆蓋中國人群HLA特異的HCMV串聯(lián)表位核苷酸序列，在起端加上了KOZAK序列，可以獲得串聯(lián)表位核苷酸序列在真核表達(dá)載體中的高效表達(dá)；末端加上了6個HIS標(biāo)簽序列，可以通過6個HIS抗體應(yīng)用WESTERNBLOT及細(xì)胞免疫組化檢測HCMV串聯(lián)表位的表達(dá)；起始兩端加入了NHEⅠ和NOTⅠ酶切位點，可以插入穿梭載體PHMCMV5載體的多克隆位點，為制備中國人群HLA特異的HCMV串聯(lián)表位腺病毒載體核酸疫苗打下了基礎(chǔ)。第二部分中國人群HLA特異的HCMV串聯(lián)表位腺病毒核酸疫苗的制備目的HCMV感染是引起移植患者和新生兒高發(fā)病率和死亡率的原因，世界范圍的醫(yī)學(xué)會組織指出應(yīng)優(yōu)先發(fā)展控制HCMV疾病的疫苗，盡管做出了很大的努力但目前仍無被臨床許可的疫苗嵌合型復(fù)制缺陷型腺病毒載體AD5F35比傳統(tǒng)的AD5型具有更好的趨向性和更高的容納外源基因的能力，在多種細(xì)胞上高效表達(dá)外源基因。本實驗應(yīng)用嵌合型AD5F35構(gòu)建多重HLAⅠ、HLAⅡ分子限制CTL、TH多表位核酸疫苗AD5F35CTLTH以及針對體液免疫應(yīng)答的HCMV線性B細(xì)胞表位核酸疫苗AD5F35AD1。方法1、采用重疊區(qū)擴(kuò)增基因拼接法（GENESPLICINGBYOVERLAPEXTENSION，SOEING）和PCR技術(shù)合成HCMV串聯(lián)T細(xì)胞表位全長基因；2、應(yīng)用PCR技術(shù)從HCMVAD169全基因組擴(kuò)增線性B細(xì)胞表位GBAD1的基因；3、利用同源重組技術(shù)從穿梭載體，將CTLTH和AD1基因分別插入PHMCMV5的NHEⅠNOTⅠ和KPNⅠAFLⅡ酶切位點，構(gòu)建穿梭載體PHMCMV5CTLTH和PHMCMV5AD1，應(yīng)用NHEⅠNOTⅠ和KPNⅠARLⅡ酶切分析和測序分析鑒定目的載體；4、利用ⅠCEUⅠPⅠSCEⅠ雙酶切和體外重組技術(shù)將穿梭載體上包含CMV啟動子、目的基因、SV40POLYA尾的表達(dá)盒插入腺病毒表達(dá)載體PAD5F35，構(gòu)建重組腺病毒表達(dá)載體AD5F35CTLTH和PAD5F35AD1，應(yīng)用XHOⅠ和ⅠCEUⅠPⅠSCEⅠ酶切分析和測序分析鑒定目的載體；5、應(yīng)用PACⅠ線性化重組腺病毒表達(dá)載體AD5F35CTLTH和PAD5F35AD1，用脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染HEK293，包裝重組腺病毒AD5F35CTLTH和AD5F35AD1，待培養(yǎng)10天出現(xiàn)CPE效應(yīng)時收取病毒；6、應(yīng)用HEK293細(xì)胞大量擴(kuò)增重組腺病毒AD5F35CTLTH和AD5F35AD1，擴(kuò)增至五代，應(yīng)用快速腺病毒感染性滴度（TCID50）檢測試劑盒測定大量擴(kuò)增后的的重組腺病毒的滴度；7、用重組腺病毒AD5F35CTLTH和AD5F35AD1分別轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞，利用RTPCR和WESTERNBLOT技術(shù)分析CTLTH和AD1在MRNA和蛋白水平的表達(dá)；8、用重組腺病毒AD5F35CTLTH和AD5F35AD1分別轉(zhuǎn)染PBMC，利用細(xì)胞免疫化學(xué)和臺盼蘭染色分析重組腺病毒在PBMC上的表達(dá)和對PBMC活性的影響。結(jié)論1、我們成功制備出中國人群HLA特異的HCMV串聯(lián)T細(xì)胞表位腺病毒載體核酸疫苗AD5F35CTLTH和針對體液免疫應(yīng)答的HCMV線性B細(xì)胞表位腺病毒載體核酸疫苗AD5F35AD1，為下一步的免疫應(yīng)答實驗打下了基礎(chǔ)。2、重組腺病毒疫苗AD5F35CTLTH和AD5F35AD1可以在PBMC高效表達(dá)目的蛋白，且不影響PBMC的活性。第三部分中國人群HLA特異的HCMV串聯(lián)表位腺病毒核酸疫苗體外免疫效果評價目的過繼免疫包括體液免疫和細(xì)胞免疫在控制HCMV感染方面起關(guān)鍵作用。本實驗評價中國人群HLA特異的HCMV串聯(lián)表位腺病毒核酸疫苗的體外免疫效果。方法1、用EBV轉(zhuǎn)化PBMC，建立類淋巴母細(xì)胞系（LYMPHOBLASTOIDCELLLINESLCL）；2、應(yīng)用HCMV多表位腺病毒載體疫苗AD5F35CTLTH刺激HCMV健康攜帶者的外周血單個核細(xì)胞（PBMC），體外擴(kuò)增抗原特異性CTL；3、應(yīng)用抗原特異性CTL進(jìn)行細(xì)胞毒試驗，檢測CTL的殺傷活性；4、應(yīng)用ELISPOT實驗檢測AD5F35CTLTH刺激HCMV健康攜帶者的PBMC后和抗原特異性CTL分泌IFNΓ的情況；5、細(xì)胞內(nèi)染色法檢測AD5F35CTLTH刺激HCMV健康攜帶者的PBMC后CD8T細(xì)胞IFNΓ的表達(dá)。結(jié)論1、本實驗顯示了多表位抗原提呈系統(tǒng)擴(kuò)增抗原特異性T細(xì)胞的有效性。2、本試驗顯示了HCMV多表位腺病毒核酸疫苗可以高效擴(kuò)增免疫顯性和亞顯性的抗原特異性T細(xì)胞。3、實現(xiàn)了單個表達(dá)結(jié)構(gòu)可以擴(kuò)增免疫顯性和亞顯性的抗原特異性T細(xì)胞，較之以前擴(kuò)增不同的抗原特異性T細(xì)胞需要不同的刺激策略具有強(qiáng)大的優(yōu)勢。4、我們的多表位重組技術(shù)可以有望適用于不同疾病的臨床過繼免疫治療。

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簡介：睡眠是人類不可缺少的生理過程。睡眠不僅可以維持個體生存及正常的生理功能，還具有促進(jìn)生長發(fā)育、易化學(xué)習(xí)、形成記憶的功能。睡眠和覺醒是一個包括復(fù)雜的神經(jīng)環(huán)路和多種神經(jīng)化學(xué)成分的行為反應(yīng)。神經(jīng)遞質(zhì)在此過程中發(fā)揮了極其重要的作用。神經(jīng)肽SNEUROPEPTIDES，NPS是在2004年最新研究發(fā)現(xiàn)的一種與睡眠和覺醒相關(guān)的神經(jīng)肽，其相應(yīng)的G蛋白偶聯(lián)受體即為神經(jīng)肽S受體NEUROPEPTIDESRECEPT，NPSR。最早的研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)肽S廣泛分布在脊椎動物人、小鼠、大鼠、雞、猩猩、牛中，在成年大鼠的腦組織、甲狀腺、唾液腺和乳腺中都較高表達(dá)。神經(jīng)肽S與其特異性受體結(jié)合發(fā)揮其生理作用，能夠調(diào)節(jié)睡眠覺醒、減少驚恐發(fā)作、影響攝食行為、調(diào)節(jié)炎性反應(yīng)及變態(tài)反應(yīng)等。而其中尤以它與睡眠覺醒方面的作用最為突出和明確。由于神經(jīng)肽S發(fā)現(xiàn)時間較晚，目前對于神經(jīng)肽S在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的分布及功能研究很少，僅有少數(shù)研究報道。為進(jìn)一步深入對神經(jīng)肽S功能的認(rèn)識，本研究首先系統(tǒng)研究了神經(jīng)肽S在大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的表達(dá)和分布特點，為深入研究其功能打下基礎(chǔ)。在此實驗中，我們對大鼠腦組織和脊髓做連續(xù)切片，首次全面研究神經(jīng)肽S在大鼠整個神經(jīng)系統(tǒng)中的表達(dá)分布情況。其次，鑒于神經(jīng)肽S已被發(fā)現(xiàn)的最主要的作用調(diào)節(jié)睡眠覺醒的作用，首次研究了不同時程REM期睡眠剝奪后大鼠下丘腦內(nèi)神經(jīng)肽S的表達(dá)變化，以期進(jìn)一步研究神經(jīng)肽S與睡眠覺醒的關(guān)系。最后，首次研究了中樞給予神經(jīng)肽S是否可以改善REM睡眠剝奪導(dǎo)致的大鼠認(rèn)知功能損害，并探索其可能的分子機(jī)制。本研究使用免疫組織化學(xué)、原位雜交技術(shù)研究神經(jīng)肽S蛋白和MRNA在大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的表達(dá)和分布特點。實驗結(jié)果顯示，神經(jīng)肽S廣泛分布于大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，且免疫組織化學(xué)結(jié)果和原位雜交結(jié)果具有高度一致性。在嗅球、初級嗅皮質(zhì)區(qū)域，神經(jīng)肽S均呈陽性染色，陽性染色主要集中在細(xì)胞胞體，證實神經(jīng)肽S可能參與中樞嗅覺系統(tǒng)的興奮傳遞過程。神經(jīng)肽S強(qiáng)陽性染色集中在大腦運(yùn)動皮質(zhì)區(qū)、軀體感覺皮質(zhì)區(qū)、梨狀皮質(zhì)和嗅皮質(zhì)，尤其是在運(yùn)動皮質(zhì)區(qū)、軀體感覺皮質(zhì)區(qū)第V層存在致密染色，提示神經(jīng)肽S可能參與神經(jīng)局部環(huán)路的構(gòu)建。在海馬中，在CA1CA3區(qū)錐體細(xì)胞的胞體和軸突均呈現(xiàn)不同程度的神經(jīng)肽S陽性染色，提示神經(jīng)肽可能參與海馬的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)傳遞，也可能與認(rèn)知功能有關(guān)。在丘腦的很多神經(jīng)核團(tuán)中，尤其是前腹側(cè)核、前內(nèi)側(cè)核、前背側(cè)核和腹外側(cè)核中發(fā)現(xiàn)神經(jīng)肽S廣泛表達(dá)；在下丘腦的室旁核和背內(nèi)側(cè)核也有神經(jīng)肽S陽性神經(jīng)元表達(dá)。神經(jīng)肽S在這些部位的分布提示它可能參與機(jī)體多種生理活動，包括調(diào)節(jié)體溫、水鹽代謝、活動能力、飲食、睡眠覺醒和激素分泌等。在腦干中，神經(jīng)肽S受體強(qiáng)陽性染色分布在藍(lán)斑、外側(cè)臂旁核、三叉神經(jīng)中腦核、三叉神經(jīng)運(yùn)動核。在小腦皮質(zhì)中，浦肯野細(xì)胞中神經(jīng)肽S陽性染色最強(qiáng)，幾乎所有的浦肯野細(xì)胞均為陽性染色。致密染色集中在細(xì)胞胞體和軸突上。在脊髓頸部、胸部、腰部、骶部灰質(zhì)區(qū)均有神經(jīng)肽S陽性細(xì)胞分布，在背角染色較強(qiáng)。其次，使用免疫組織化學(xué)、原位雜交、RTPCR等技術(shù)觀察不同時程REM睡眠剝奪對大鼠下丘腦神經(jīng)肽S蛋白及MRNA表達(dá)量的影響。將成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常對照組CC、環(huán)境對照組TC、REM睡眠剝奪組SD，每組又分為1天、3天、5天組。采用改良多平臺水環(huán)境睡眠剝奪法MMPM建立大鼠的REM睡眠剝奪模型，完成相應(yīng)時間的REM睡眠剝奪后，測定大鼠下丘腦神經(jīng)肽S表達(dá)量的變化。免疫組織化學(xué)及原位雜交結(jié)果顯示在REM期睡眠剝奪后，下丘腦的背內(nèi)側(cè)核和室旁核的NPS蛋白和MRNA表達(dá)發(fā)生改變。在這兩個核團(tuán)，CC組和TC組的NPS表達(dá)較少，散在分布于核團(tuán)中。而REM期睡眠剝奪1天后，大鼠背內(nèi)側(cè)核和室旁核NPS蛋白和MRNA陽性細(xì)胞數(shù)仍較少。到REM期睡眠剝奪的第3天，可以觀察到大鼠背內(nèi)側(cè)核和室旁核NPS蛋白和MRNA陽性細(xì)胞數(shù)量均增多，在REM期睡眠剝奪的第5天，仍呈現(xiàn)這樣的趨勢。RTPCR結(jié)果顯示，CC組和TC組下丘腦內(nèi)NPSMRNA的表達(dá)量很少，在REM期睡眠剝奪1天后，大鼠下丘腦的NPSMRNA的表達(dá)也較少。而在REM期睡眠剝奪3天和5天組，大鼠下丘腦中NPSMRNA的表達(dá)量較CC組，TC組和SD1天組明顯升高。最后，我們研究了中樞給予神經(jīng)肽S對REM睡眠剝奪導(dǎo)致的大鼠認(rèn)知功能損害是否有改善作用，并探索其可能的分子機(jī)制。SD大鼠隨機(jī)分為正常對照組CC、環(huán)境對照組TC、REM睡眠剝奪組SD，其中每組又分為神經(jīng)肽S側(cè)腦室給藥組NPS和人工腦脊液對照組ACSF。總共分為六組CCACSF組，TCACSF組，SDACSF組，CCNPS組，TCNPS組和SDNPS組。睡眠剝奪時間為72小時。各組大鼠側(cè)腦室置管，恢復(fù)后采用改良多平臺水環(huán)境睡眠剝奪法MMPM建立大鼠的REM睡眠剝奪模型，同時側(cè)腦室給予神經(jīng)肽S或人工腦脊液。選用MRIS水迷宮的定位航行實驗對所有大鼠進(jìn)行空間認(rèn)知學(xué)習(xí)能力的測定，72小時的REM睡眠剝奪結(jié)束后，利用MRIS水迷宮的空間探索實驗測定大鼠的空間記憶能力。迷宮測試完畢，運(yùn)用免疫組織化學(xué)和蛋白質(zhì)免疫印跡WESTERNBLOT等方法測定大鼠海馬磷酸化的CREBPCREB表達(dá)的變化。實驗結(jié)果表明72小時REM期睡眠剝奪后，大鼠的空間學(xué)習(xí)和記憶能力與正常對照和環(huán)境對照組的大鼠相比明顯減退；正常對照組與環(huán)境對照組大鼠的空間記憶能力無明顯差異P＞005；CCNPS組大鼠和TCNPS組大鼠的空間記憶能力比CCACSF組和TCACSF組有所提高，而空間學(xué)習(xí)能力無差別；SDNPS組大鼠的空間記憶能力較SDACSF組明顯增強(qiáng)，空間學(xué)習(xí)能力也有所提高；72小時REM期睡眠剝奪后，大鼠海馬的PCREB表達(dá)下降，SDNPS組大鼠海馬的PCREB表達(dá)量較SDACSF組增高。本課題聯(lián)合使用免疫組織化學(xué)和原位雜交技術(shù)，首次系統(tǒng)研究了神經(jīng)肽S蛋白和MRNA在大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的表達(dá)和分布特點，發(fā)現(xiàn)該神經(jīng)肽廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元中，在皮質(zhì)、杏仁核、海馬、丘腦、下丘腦、腦干、脊髓、嗅球都有分散表達(dá)。提示神經(jīng)肽S可能參與多種神經(jīng)生理活動。首次研究了REM期睡眠剝奪后，大鼠下丘腦內(nèi)NPS蛋白和MRNA的表達(dá)變化情況，發(fā)現(xiàn)在持續(xù)REM期睡眠剝奪狀態(tài)下，下丘腦內(nèi)的NPS表達(dá)增加，證實了NPS與覺醒的相互關(guān)系，在受到外天刺激無法正常睡眠時，機(jī)體會自身調(diào)節(jié)，分泌足量的NPS來維持覺醒。我們還發(fā)現(xiàn)，REM睡眠剝奪對大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力有損害作用，神經(jīng)肽S可以緩解REM期睡眠剝奪造成的認(rèn)知功能損傷，REM期睡眠剝奪后，海馬的PCREB表達(dá)下調(diào)，NPS可以部分逆轉(zhuǎn)睡眠剝奪引起的PCREB表達(dá)下調(diào)。提示神經(jīng)肽S可能通過調(diào)節(jié)PCREB的表達(dá)來改善REM睡眠剝奪造成的認(rèn)知功能損傷。

簡介：分類號UDC博士學(xué)位論文密級OSAHS對認(rèn)知功能的影響及相關(guān)機(jī)理研究COGNITIVEIMPAIRMENTINOSAHSPATIENTSANDITSRELATEDMECHANISM作者姓名王衛(wèi)紅學(xué)科專業(yè)護(hù)理學(xué)學(xué)院系、所護(hù)理學(xué)院指導(dǎo)教師何國平教授論文答辯日期蘭D答辯委員會磕遺中南大學(xué)二0一二年五月原創(chuàng)性聲明Y2197070IIIIIIIRLLLLLLLLLLLLLLLHIIIIIIIIIIIIIII1I本人聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)RRPR導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，淪文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中南大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明。作者簽名墨蘭』蘭日期墨蘭年￡月坦日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人了解中南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并根據(jù)國家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存學(xué)位論文。同時授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信息服務(wù)。作者虢絲跏簽感絲年』生日

簡介：揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文人乳頭瘤病毒16型E6E7基因疫苗的基礎(chǔ)實驗研究姓名謝錚申請學(xué)位級別碩士專業(yè)皮膚病學(xué)與性病學(xué)指導(dǎo)教師高慧20100401揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文2IFA法分析基因免疫在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答。結(jié)果構(gòu)建的HPVL6E6E7基因重組質(zhì)粒PCDNAE6E7，能在COS7細(xì)胞中暫態(tài)表達(dá)，免疫小鼠的J『N清中可檢鋇TLN抗E7抗體，而原載體PEDNA31和生理鹽水注身J’后，未檢測M特異的抗F7抗體通過ELISA定量檢測細(xì)胞因子IL2和IFNL分泌情況，實驗組產(chǎn)生的IL2明顯高于對照組與空白組，P001；實驗組產(chǎn)生的IFN7明顯高于對照組與空白組，P005各組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。實驗結(jié)果表明構(gòu)建的HPVL6E6E7基因疫苗能夠在體外培養(yǎng)的細(xì)胞中暫態(tài)表達(dá)，免疫小鼠后通過IFA法和ELISA定量檢測分析該疫苗株可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生特異性的體液免疫反應(yīng)和細(xì)胞免疫反應(yīng)。本文通過HPV16E6E7的基因疫苗的基礎(chǔ)研究為HPV感染性疾病相關(guān)性疫苗的研制提供了實驗平臺，為HPV的治療尋找一種有效的方法，為HPVL6E6E7基因疫苗的開發(fā)做了有益的嘗試。因此本研究工作將為下一步利用基因疫苗治療HPV感染性疾病的臨床前期研究打下了基礎(chǔ)，同時本研究結(jié)果在控制HPV感染性疾病方面將會有潛在的應(yīng)用價值。關(guān)鍵詞人乳頭瘤病毒16型，E6E7基因，DNA疫苗，體液免疫和細(xì)胞免疫

簡介：學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明1、堅持以“求實、創(chuàng)新“的科學(xué)精神從事研究工作。2、本論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作和取得的研究成果。3、本論文中除引文外，所有實驗、數(shù)據(jù)和有關(guān)材料均是真實的。4、本論文中除引文和致謝的內(nèi)容外，不包含其他人或其它機(jī)構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。5、其他同志對本研究所做的貢獻(xiàn)均已在論文中作了聲明并表示了謝意。作者簽名日期學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解南京師范大學(xué)有關(guān)保留T使用學(xué)位論文的規(guī)定；學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并向國家主管部門或其指定機(jī)構(gòu)送交論文的電子版和紙質(zhì)版；有權(quán)將學(xué)位論文用于非贏利目的的少量復(fù)制并允許論文進(jìn)入學(xué)校圖書館被查閱；有權(quán)將學(xué)位論文的內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索；有權(quán)將學(xué)位論文的標(biāo)題和摘要匯編出版。保密的學(xué)位論文在解密后適用本規(guī)定。作者簽名日期目錄IUIIIIIIL11111TILLIIIY1728503中文摘要OOOOOO1英文摘要OOOOOSOOOOOOOOO2前言一一””一””“”一3刖吾”“””一”””“”一”一一“””””一”“”””一““”“””一”一一3第一章文獻(xiàn)綜述OOOOOOIOO8一、認(rèn)知風(fēng)格的概念8二、認(rèn)知風(fēng)格研究的歷史的回顧12三、以人格為中心的認(rèn)知風(fēng)格研究24四、本研究的整體思路和要解決的問題32第二章研究方法OOOOOO35一、詞匯學(xué)方法35二、AB5C方法00000039三、人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)方法41四、測驗量表、被試和施測過程46第三章認(rèn)知風(fēng)格詞匯表的編制EOOOOOOOO一EOOOOOOOOEEE49一、研究目的49二、認(rèn)知風(fēng)格詞匯表的編制‘乞‘J_一J49三、認(rèn)知風(fēng)格詞匯表的信度和效度檢驗5L第四章認(rèn)知風(fēng)格的特質(zhì)結(jié)構(gòu)’J_“53一、研究目的53二、研究方法53三、研究結(jié)果ID0053四、討論58五、結(jié)論62第五章認(rèn)知風(fēng)格特質(zhì)結(jié)構(gòu)的效度檢驗64一、研究目的64

簡介：點擊查看更多病毒性傳染病患者外周血sPD-1的表達(dá)和T細(xì)胞的活化及其臨床意義.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：【研究背景】乙型肝炎病毒HBV（HEPATITISBVIRUS）是指引起人類急、慢性肝炎的DNA病毒，也稱丹氏顆粒。HBV基因組（HBVDNA）由雙鏈不完全環(huán)形結(jié)構(gòu)的DNA組成，含約3200個核苷酸，主要分為P、C、X、S四個區(qū)。HBVDNA具有高度突變性，并由此形成了HBVDNA不同的亞型。研究發(fā)現(xiàn)高度重疊性和MRNA逆轉(zhuǎn)錄復(fù)制中間體是其高突變的主要誘因。根據(jù)全基因序列異質(zhì)性≥8％且同源性我國是乙肝發(fā)病大國，就目前的流行病學(xué)統(tǒng)計來看，中國的乙肝基因型主要為A、B、C、D這四種基因型，并且發(fā)現(xiàn)了不同基因型的HBV的致病性所存在的差異，其基因型與乙型肝炎病情的進(jìn)展、臨床表現(xiàn)、治療耐藥、預(yù)后有著密切的關(guān)系。然而對于HBV的早期檢測和分型，至今仍無準(zhǔn)確有效的檢測方法，因此，建立一種高效、準(zhǔn)確、易于普及的對HBV進(jìn)行基因型分析的方法有利于我國衛(wèi)生事業(yè)對乙型肝炎的治療前診斷和治療實施?！狙芯糠椒ā勘緦嶒灹⒆阌趯BV進(jìn)行基因分型，通過生物信息學(xué)分析比對了全球49個HBV全基因，其中包括14個NCBI中作為參考標(biāo)準(zhǔn)的HBV標(biāo)準(zhǔn)株基因型，另外將此結(jié)果同時與中國提交給GENBANK的部分HBV全基因比較，最終選擇HBV病毒8種基因型的PRES2和S區(qū)共同保守序列進(jìn)行擴(kuò)增，并在選擇的區(qū)域中進(jìn)一步挑選每種基因型特有的檢測位點設(shè)計相應(yīng)探針，采用反向核酸雜交技術(shù)，結(jié)合BAS通過ABSELISA和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對擴(kuò)增的PRES2和S區(qū)檢測片段進(jìn)行快速雜交反應(yīng)，建立一種新型SNP位點檢測方法，進(jìn)而完成對HBV基因型別的區(qū)分?！狙芯拷Y(jié)果】1證實PRES2、PRES1、S基因區(qū)具有重要的分型意義通過大規(guī)模多重比對HBV基因組序列，發(fā)現(xiàn)HBVDNA的S區(qū)具有型內(nèi)高度保守、型間差異性大的位點，且這些位點在HBV基因組高突變情況下仍然可作為分型依據(jù)。同時在構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)品測序比對過程中，證實了這些位點的高度保守性和型間差異性。而相對于P區(qū)、C區(qū)和X區(qū)比較，均未發(fā)現(xiàn)較高的連續(xù)型內(nèi)保守區(qū)段。證明S基因區(qū)對HBV基因型具有重要的分型意義。2獲得西安地區(qū)HBV基因型分布趨勢通過對282例西安地區(qū)乙肝患者抽取血清并提取HBVDNA進(jìn)行構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)品并測序比對其HBV基因型，獲得了的西安地區(qū)乙肝感染者的HBV基因型分布比例，未見A型，B型占145％，C型占819％，D型占36％，此統(tǒng)計數(shù)據(jù)不同于以往流病調(diào)查的B型和C型比例相近的結(jié)果，有文獻(xiàn)稱HBVC型較HBVB型患者繼發(fā)肝硬化、肝癌的比例要高，此實驗統(tǒng)計結(jié)果可通過對采血病人進(jìn)行追蹤調(diào)查證實HBV患者繼發(fā)癥和HBV基因型的關(guān)系。3建立了一種具有高效、快速、準(zhǔn)確優(yōu)勢的分型方法此方法同其他HBV的分型檢測方法相比，可以針對單堿基進(jìn)行區(qū)分檢測，其靈敏度不遜色于其他方法依賴機(jī)器的檢測；不依賴于高昂的設(shè)備和嚴(yán)格的反應(yīng)條件，比其他方法更容易推廣；該方法檢測具有較快的檢測速度同時檢測條件簡便，水浴條件下雜交即可完成檢測，通過擴(kuò)大單個膜塊面積和相應(yīng)增多探針數(shù)量則可完成高通量檢測；該方法的檢測范圍就HBV分型已經(jīng)完成630BP長度的片段捕獲，更利于探針設(shè)計和樣本制備?！狙芯拷Y(jié)論】1HBV的S基因區(qū)具有分型意義，并且能夠作為分型依據(jù)。2西安地區(qū)HBVC型高發(fā)，未見HBVA型，且HBVB型和D型所占比例較小。3證實TAQ酶的識別性與單堿基突變位點的位置直接相關(guān)。4完成了一種高效、快速、準(zhǔn)確的乙型肝炎病毒基因分型方法。

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