簡介：該研究從細胞生物學和流行病學兩個方面分三個部分對其進行研究1乙肝病毒表面抗原作為單病原負荷對血管內(nèi)皮細胞與單核細胞相互作用的影響該部分研究首先通過間接免疫熒光試驗確認HBSAG與血管內(nèi)皮細胞的粘附現(xiàn)象然后選擇整合有HBV全基因組的HEPG2215細胞的上清及HBV的主要結(jié)構(gòu)成份乙肝病毒的表面抗原HBSAG分別與人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞株ECV304和單核細胞株THP1進行孵育檢測其對這兩種細胞的粘附和趨化功能的影響并進一步檢測孵育后ECV304細胞中與AS相關的部分趨化因子的表達從免疫學、細胞生物學角度研究了HEPG2215細胞上清或乙肝病毒的表面抗原作為單病原負荷對血管內(nèi)皮細胞與單核細胞相互作用的可能影響2乙肝病毒表面抗原在多病原負荷時對血管內(nèi)皮細胞與單核細胞相互作用的影響為了進一步研究HBV及其結(jié)構(gòu)成份在多病原負荷狀態(tài)下是否會對血管內(nèi)皮細胞與單核細胞的相互作用產(chǎn)生同樣影響該部分引入了細菌源性感染因子LPS探討雙病原負荷狀態(tài)下HBV及其結(jié)構(gòu)成份對單核細胞與血管內(nèi)皮細胞相互作用的影響以LPS作用后的臍靜脈內(nèi)皮細胞ECV304作為應激狀態(tài)細胞模型在此基礎上進行粘附及趨化功能的檢測結(jié)果表明在應激狀態(tài)下HEPG2215細胞上清或HBSAG作用于臍靜脈內(nèi)皮細胞ECV304不能顯著影響其對單核細胞的趨化及粘附活性而HBSAG作用于單核細胞THP1其不僅維持了其作為單病原負荷時增加單核細胞粘附的特性粘附細胞百分率依然維持在約40﹪還可顯著抑制應激狀態(tài)下ECV304對THP1的強趨化作用趨化細胞百分率由約16﹪降至3﹪進一步在MRNA水平檢測與HBSAG孵育后的THP1結(jié)果顯示多個趨化因子受體水平顯著下調(diào)3乙型肝炎感染與動脈粥樣硬化發(fā)病相關性的血清流行病學研究為進一步澄清HBV在人群中的動脈粥樣硬化發(fā)病中是否發(fā)揮作用我們收集了共446例行冠脈造影術的患者根據(jù)冠脈造影結(jié)果將其分為冠脈狹窄組和非狹窄組并用2復旦大學碩士論文ELISA方法檢測患者血清中的乙肝病毒感染兩對半指標及CRP水平從血清流行病學角度探討HBV感染的血清學指標、病毒載量和冠狀動脈粥樣硬化的發(fā)生及冠脈狹窄程度之間的關系分析了HBV感染與其它動脈粥樣硬化傳統(tǒng)風險因子之間可能存在的交互作用并進一步研究了炎癥水平對HBV感染與動脈粥樣硬化關系的影響綜上所述我們的研究表明HBSAG可以影響體外單核細胞與血管內(nèi)皮細胞的相互作用在單個和多個病原負荷存在時這種影響基本是一致的即HBV及其結(jié)構(gòu)成份既可增加單核細胞對血管內(nèi)皮的粘附又可抑制血管內(nèi)皮細胞對單核細胞的趨化這種抑制作用在多重病原負荷狀態(tài)下尤為明顯但我們的結(jié)果并不支持HBV感染與動脈粥樣硬化存在流行病學相關性這表明HBV感染作為多重感染的一支其參與動脈粥樣硬化發(fā)生的機制十分復雜有待進一步研究

簡介：本研究采用腹主動脈縮窄技術建立大鼠壓力負荷心肌肥厚模型以及結(jié)扎大鼠前降支建立心肌缺血再灌注損傷動物模型，以人白介素一10HIL一10為目的基因，重組5型腺病毒為載體，在體間接冠狀動脈血管注射腺病毒介導的HLL一10，24H心肌組織可成功地轉(zhuǎn)染并表達外源性HLL10目的基因；腺病毒轉(zhuǎn)染IL10后結(jié)扎大鼠前降支45分后再灌注，IL10基因可下調(diào)正常心肌的IL1、IL一6、TNFA的表達，明顯減輕心肌缺血再灌注損傷；IL10基因也可減輕肥厚心肌缺血再灌注后ILL、IL6、TNFA的表達，減輕對肥厚心肌缺血再灌注損傷。其機理可能與抑制THL細胞因子ILL，TNFA介導的炎癥反應有關。在體間接冠狀動脈血管注射腺病毒介導的HLL一10，可成功地轉(zhuǎn)染HLL一10，心肌組織ILLO的預先表達有助于減少炎癥細胞浸潤，而可能減輕再灌注損傷。應用基因轉(zhuǎn)移技術在心肌組織表達抑制性細胞因子可能有望成為防治缺血再灌注損傷的一種新策略。

簡介：徐州醫(yī)學院碩士學位論文轉(zhuǎn)錄HTERT基因小發(fā)夾RNA的復制缺陷型和條件增殖型腺病毒的構(gòu)建姓名毛立軍申請學位級別碩士專業(yè)外科學（泌尿外）指導教師鄭駿年20060401徐州醫(yī)學院碩士學位論文轉(zhuǎn)錄HTERT基因小發(fā)夾RNA的復制缺陷型和條件增殖型腺病毒的構(gòu)建中文摘要目的構(gòu)建轉(zhuǎn)錄端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因小發(fā)夾RNAHTERTSHRNA的復制缺陷型和條件增殖型腺病毒CRADS。方法1．設計能轉(zhuǎn)錄HTERTSHRNA模板的DNA序列，退火后克隆至PEAL3質(zhì)粒，構(gòu)建重組質(zhì)粒PCAL3HTERT。2．用BGLII從PCAL3一HTERT酶切出包含CMV啟動子及HTERTSHRNA模板的表達框。3．將此表達框克隆入經(jīng)BGLLI酶切并去磷后的條件增殖腺病毒質(zhì)粒PZD55，構(gòu)建重組質(zhì)粒PZD55一HTERT。4．將PCAL3一HTERT、PZD55一HTERT與腺病毒右臂質(zhì)粒PBHGE3共轉(zhuǎn)染293細胞，912D后出現(xiàn)病毒空斑。5．提取重組腺病毒的DNA，PCR鑒定正確者即為復制缺陷型腺病毒ADHTERT和條件增殖腺病毒ZD55一HTERT。6．鑒定正確后大量擴增，氯化銫梯度離心純化，噬斑計數(shù)法測滴度。7．免疫印跡法檢測ADHTERT、ZD55一HTERT在腫瘤細胞中E1A的表達。8．結(jié)晶紫染色法評價ADHTERT、ZD55HTERT對P53突變的腫瘤細胞的殺傷作用。結(jié)果1．酶切分析、測序鑒定表明PCAL3一HTERT構(gòu)建成功。2．PCR、酶切分析、測序鑒定表明PZD55一HTERT構(gòu)建成功。3．PCR鑒定表明ADHTERT包含目的基因，但E1區(qū)缺失；ZD55一HTERT包含目的基因，且無野生型腺病毒污染。4。ADHTERT滴度為410”、ZD55一HTERT滴度為110“PFU／ML。5．免疫印跡法證實ZD55一HTERT在腫瘤細胞中表達E1A，AD_HTERT在腫瘤細2

簡介：中南大學博士學位論文孤獨癥的臨床特征、認知功能及5HTT啟動子區(qū)域多態(tài)性研究姓名殷青云申請學位級別博士專業(yè)精神病與精神衛(wèi)生學指導教師李雪榮20040501博士學位論文中文摘要能和執(zhí)行功能等方面，通過與正常對照的比較，來探索孤獨癥父母的神經(jīng)心理損害。4采集孤獨癥核心家系的血標本，使用聚合酶鏈反應POLYMERASECHAINREACTION，PCR技術分析5HTT啟動子區(qū)域的基因多態(tài)性，對孤獨癥先證者及其父母組成的核心家系，分別采用病例一對照關聯(lián)分析和傳遞不平衡檢驗TRANSMISSION／DISEQUILIBRIUMTEST，TDT，在家系間和家系內(nèi)進行孤獨癥與5HTTLPR的關聯(lián)分析。結(jié)果1研究共納入178例孤獨癥，其中以158例典型孤獨癥為主要的研究對象，發(fā)病月齡為82365月20922O，病程為2152366373個月，就診月齡為14180月57312803，就診年齡與母親的文化程度負相關。母孕期有陽性發(fā)現(xiàn)以及分娩時有合并癥的發(fā)生率比例較高，發(fā)育指標普遍比正常兒童延遲。孤獨癥父母的職業(yè)沒有明顯的偏向。與正常對照相比，他們在社交方面顯示有回避和苦惱傾向，其家庭功能評估中的溝通、情感反應和總的功能三方面受損。2158例孤獨癥家系中有58個的孤獨癥家庭共84例親屬符合BAP的標準，以輕度的社會交往缺陷和／或語言發(fā)育延遲和／或行為特征突出表現(xiàn)的表型為主，二級親屬較多，男性比女性多見。3多數(shù)家長認為孤獨癥患兒的異常表現(xiàn)在18個月時己明顯存在，以交互性注意，扮演性游戲和對他人的情感反應三方面的缺陷為其主要的早期癥狀。4以ABC量表各條目收集的癥狀表現(xiàn)，歸納分析158例典型孤獨癥中最常見和最不常見的1L條癥狀，前者主要與生活自理、語言有關，后者主要與社交、感覺和軀體運動有關?！?CARS和ABC各條目的CRONBACHⅡ系數(shù)分別為O781，0810，MIIC分別為0324和0254，表明量表的同質(zhì)性較高，支持兩個量表具有良好的信度；ABC五個主維度的CRONBACH0【系數(shù)分別界于03960639之間，表明每個主維度內(nèi)部的條目同質(zhì)性稍差。CARS的主成分分析提取5個主因子，分別為溝通和社交，情緒穩(wěn)定性，感覺，運動水平，怪異行為，解釋了總信息的7300％，較好地反映了孤獨癥的臨床特點；ABC的主成分分析提取5個主因子，僅解釋了總信息的389％。該量表把57個條目劃分成感覺、交往、運動、語言和生活自理五個主維度，相關分析顯示57個條目與他們所屬主維度的相關明

簡介：博士后出站報告縮寫詞縮寫詞RETROVIRALVECTORLENTIVIRALVECTORHIVIHUMANIMMUNODEFICIENCYVIRUSIVSVGVESICULARSTOMATITISVIRUSGLYCOPROTEINENVELOPPLASMIDPACKINGPLASMIDTRANSFERVECTORLENTIVIRUSPSEUDOTYPEVIRUSREPLICATIONDEFICIENTVIRUSMUC1MUCIN1ANTISCFVSINGLECHAINFVNSCLCNONSMALLCELLLUNGCANCERLBLURIABERTANIMEDIUMSUICIDEGENETKTHYMIDINEKINASEGCVGANCICLOVIRCDCYTOSINEDEAMINASE5FC5FLUOROCYTOSINEHSVHERPESSIMPLEXVIRUSTYPEIBYSTANDEREFFECT另外，自殺基因治療中常伴有“旁觀者效應”，使周圍未轉(zhuǎn)染目的基因的靶細胞受到殺傷。在自殺基因治療中I型單純疙疹病毒胸營激酶基因HSVTKGCV更昔洛韋和大腸桿菌中的胞崛陡脫氨酶基因ECOLICD5FC5氟胞嚓嚨是最常用的一對治療系統(tǒng)「卜釗。肺癌LUNGCANCERLC是我國常見的惡性腫瘤之一，由于大氣污染、生態(tài)環(huán)境的破壞等多種復雜的原因，其發(fā)病率和死亡率正在逐年上升。全世界每年都有大量病人死于肺癌，特別是發(fā)展中國家，其死亡率明顯增加。盡管近幾年來隨著分子生物學的發(fā)展，新的化療藥物不斷產(chǎn)生，手術方法及放、化療的不斷改進等，肺癌患者尤其是中晚期病人目前仍無徹底根治方案，且5年生存率仍不高曰。

簡介：點擊查看更多雙黃連、魚腥草、大蒜新素注射液抗鼠冠狀病毒MHV-3效應的體內(nèi)外實驗研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：分類號UNC事中斜技大浮博士學位論文密級腫瘤選擇性復制腺病毒基因治療載體的構(gòu)建SMART技術克隆腫瘤轉(zhuǎn)移效應基因的研究申請人姓名指導教師學科專業(yè)研究方向論文起止時間陳剛馬_J教授婦產(chǎn)科學婦科腫瘤2002年9月至2005年4月同濟醫(yī)學院研究生部二OO五年四月華中科技人學H濟醫(yī)學院博IJ列F究生畢業(yè)論文CONSTRUCTIONOFRECOMBINANTTUMORSELECTIVEREPLICATIONADENOVIRUSFORCANCERGENETHERAPYABSTRACTOBJECTIVESTOCONSTRUCTASERIOUSOFTUMORSELECTIVEREPLICATIONADENOVIRUSVECTORS，TEALIZEASTRATEGYOFTUMORSPECIFICGENETHERAPYANDTOESTABLISHTHEFOUNDATIONOFEFFECTIVETUMORTARGETGENETHERAPYMATERIALSANDMETHODSTOMUTATESPECIFICE1ASEQUENCESOFADENOVIRUSGENOMEBYTWOROUNDSOFPCR，THERECOMBINANTADENOVIRUSESWEREACQUIREDBYHOMOLOGOUSRECOMBINATIONOFADENOVIRUSBACKBONEPLASMIDPBHGE3ANDSHUTTLEPLASMIDPXC1INPACKAGECELLLINE293THEMUTANTVIRUSESWEREVERIFIEDBYSEQUENCINGANDTHENINFECTEDINTODIFFERENTCARCINOMACELLLINESWITHDIFFERENTPHENOTYPESOFP53／PRBANDINTONORMALVESSELENDOCYTETOTESTTHEIRTUMORSELECTIVEREPLICATIONEFFECTRESULTSPREDICTEDDESIGNEDMUTANTADENOVIRUSESWCRECONSTRUCTEDSUCCESSFTFLLYRECOMBINANTADENOVIRUSESSHOWEDSIGNIFICANTONEOLYTICEFFECTSINVITROBYTHEOBSERVATIONOFTHEIREFFECTSONMULTIPLECARCINOMACELLLINESONEOFTHERECOMBINANTADENOVIRUSREALIZEDATUMORSELECTIVEMNPLIFICATIONEFFECTWHILEANOTHERONEISUNDERVERITYINGCONCLUSIONSTUMORSELECTIVEREPLICATIONADENOVIRUSCANREALIZESPECIFICANTI_TUMOREFFECTSANDCANBESERVEDASSATISFIEDVECTORSFORCANCERGENETHERAPYKEYWORDSADEUOVIRUSVECTOR；GENETHERAPY；ONCOLYTIEVIRUS2

簡介：目的1、觀察CTGF及其上游因子TGFΒ1和足細胞標記蛋白NEPHRIN在乙肝病毒相關性腎炎HBVGN腎組織中的表達情況，探討它們在HBVGN進展中的作用。2、觀察NEPHRIN在HBVGN膜性腎病HBVMN腎組織中的表達特點，研究HBVMN中足細胞的損傷程度及意義。3、研究影響HBVGN預后的臨床與病理學指標。方法1、回顧性分析87例HBVGN患者的臨床病理資料，采用免疫組化方法檢測腎活檢組織中CTGF、TGFΒ1和NEPHRIN的表達情況，并對其表達程度進行半定量評分。2、選擇同期腎活檢確診為HBVMN患者35例，分析其臨床病理資料，并采用免疫組化方法檢測腎活檢組織中NEPHRIN的表達情況，并對其表達程度進行半定量評分。3、選擇同期腎活檢確診為HBVGN并有完整隨訪資料隨訪時間≥2年的患者66例，對影響預后的臨床病理指標進行單因素及多因素分析。結(jié)果1、在HBVGN腎組織中CTGF和TGFΒ1的表達明顯高于正常對照組，且不同病理類型中CTGF和TGFΒ1的表達有明顯差異，CTGF和TGFΒ1在腎小管間質(zhì)區(qū)的表達與腎小管間質(zhì)病變評分成正相關，CTGF和TGFΒ1在腎小球區(qū)的表達與腎小球病變評分成正相關。在HBVGN腎組織中NEPHRIN的表達強度明顯弱于正常腎組織，以足細胞病變?yōu)橹鞯牟±眍愋蚆NMPGNNEPHRIN表達程度6的比例明顯高于非足細胞病變的病理類型MSPGNIGAN，在臨床表現(xiàn)為腎病綜合征的患者腎組織中NEPHRIN的表達明顯弱于非腎病綜合征患者，且在腎小球病變中，NEPHRIN的表達與腎小球病變評分成負相關。2、在HBVMN的不同分期中NEPHRIN的表達無顯著性差異，但是腎病綜合征組NEPHRIN的表達量明顯低于非腎病綜合征組患者，且在不同等級的尿蛋白定量中其表達也有顯著差異。SPEARMAN相關分析顯示NEPHRIN與24H尿蛋白定量間存在一定的負相關性。3、在單因素分析中，CKD分期、腎小管間質(zhì)病變程度、TGFΒ1及NEPHRIN均顯示為影響預后的因素，最后LOGIC回歸分析后提示腎小管間質(zhì)病變程度和NEPHRIN為獨立的影響因素，其中腎小管間質(zhì)病變程度是最重要的危險因子，而NEPHRIN是最重要的保護因子。結(jié)論1、CTGF和TGFΒ1可作為HBVGN腎小管間質(zhì)病變程度的評判指標；足細胞損傷是HBVGN進展機制之一，在HBVGN腎組織中NEPHRIN表達下調(diào)是導致蛋白尿的重要原因。2、在HBVMN的腎組織中，NEPHRIN表達下調(diào)，尤其在腎病綜合征患者的腎組織中NEPHRIN表達程度下調(diào)更明顯，并與尿蛋白定量間存在一定的負相關，可見HBVMN中NEPHRIN表達下調(diào)與蛋白尿的產(chǎn)生密切相關。3、影響HBVGN預后的獨立因素是腎小管間質(zhì)病變程度和NEPHRIN在腎組織中的表達程度，腎穿時腎組織中TGFΒ1和NEPHRIN的表達水平可作為預測其發(fā)生終點事件的免疫病理指標。

簡介：點擊查看更多丙型肝炎病毒NS3結(jié)合蛋白和NS3反式激活新靶基因NS3TP6的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：登革病毒DENGUEVIRUS，DV是黃病毒科的單股正鏈RNA病毒，有4種血清型，均可以引起登革熱CLASSICALDENGUEFEVER，DF和登革出血熱登革休克綜合征DENGUEHEMRHAGICFEVERDENGUESHOCKSYNDROME，DHFDSS，廣泛流行于熱帶和亞熱帶地區(qū)。每年DF病例超過1億，DHF病例約50萬。WHO已將DHFDSS、肝炎、瘧疾、結(jié)核列為全球流行最嚴重的傳染病。但DV的發(fā)病機理不明，臨床治療也主要是支持對癥為主。目前，關于DHFDSS發(fā)病機制的看法主要有三種①抗體依賴增強ANTIBODYDEPENDENTENHANCEMENT，ADE理論認為DV特異性IGG所引起的免疫增強效應導致出現(xiàn)DHFDSS的病理變化；②病毒因素致病理論認為病毒毒力或復制能力等因素是導致嚴重疾病的原因；③免疫病理反應理論認為交叉反應性T細胞介導的細胞免疫損傷是DHFDSS的主要病理機制。有人甚至認為，高病毒滴度、再次感染和DV2是發(fā)生DHFDSS的三個主要因素。而疫苗研究重點集中在研制四價疫苗，希望能同時抵抗四型DV的感染，減毒四價活疫苗曾一度被認為是最具前景的候選疫苗。但迄今為止，仍然沒有獲得既安全又有效的疫苗?；诮陙鞤HFDSS患者數(shù)明顯增加和臨床上無有效防治手段的現(xiàn)狀，被動免疫或者說是治療性抗體策略引起了研究者的關注。這種方法早在19世紀末就已經(jīng)發(fā)現(xiàn)并應用，在20世紀30年代被廣泛使用，但由于當時的抗體制備水平有限和免疫知識背景的缺乏，這一方法在40年代被禁止。近年來，抗體技術在制備、純化或人源化等方面均取得了較大的進步，被動免疫治療或者治療性抗體的策略再次成為焦點。大量的體外和體內(nèi)實驗均已證明抗體尤其是中和抗體能有效阻止病毒感染宿主細胞。所以，無論從研究DV病理機制角度，還是從研發(fā)疫苗角度，獲得高質(zhì)量的特異性抗體具有重要意義。本試驗以傳統(tǒng)方法制備登革病毒2型DENGUEVIRUSTYPE2，DV2TR1751株的小鼠單克隆抗體MONOCLONALANTIBODIES，MAB，并鑒定其特性，期望能獲得多株抗DV的MAB，為后續(xù)研究DV的致病機理，以及疫苗的研發(fā)提供初步的免疫學工具。本研究主要結(jié)果與結(jié)論如下1獲得了三株分泌DV特異性MAB的雜交瘤細胞株本實驗以含高滴度DV2的BLABC乳鼠腦勻漿為免疫原，按步驟多次免疫BLABC小鼠。用PEG4000將免疫小鼠脾細胞和SP20細胞進行融合，再采用HAT培養(yǎng)液篩選，存活的雜交瘤細胞進行克隆化培養(yǎng)，通過酶聯(lián)免疫吸附實驗ENZYMELINKEDIMMUNOSBENTASSAYELISA確定陽性株。之后反復采用細胞記數(shù)稀釋法和ELISA進行篩選，直至陽性率為100％，從而獲得分泌DV特異性MAB的雜交瘤細胞系。各經(jīng)5次克隆化后，獲得了3株穩(wěn)定分泌MAB的雜交瘤細胞系，分別命名為B152、I1、I9。2間接免疫熒光染色證實MAB的特異性本實驗針對三株MAB分別設置了一般感染組和正常對照組，即分別將感染和未感染DV2的ECV304細胞固定在玻片上進行染色。以腹水MAB為一抗，羊抗小鼠IGGFITC為二抗，熒光顯微鏡觀察結(jié)果。一般感染組中病毒抗原被強染，病毒抗原多集中在細胞質(zhì)的一側(cè)，呈“火焰”狀、“流星”狀，還有分布于核周的病毒抗原有時也被強染。而正常對照組中，均無特異性染色出現(xiàn)。陽性對照小鼠抗DV2血清為一抗的一般感染組中強染的病毒抗原在形態(tài)和分布上都與MAB相似，但熒光亮度更強，進一步確證了MAB的特異性。另外，在腹水MABB152染色中還發(fā)現(xiàn)，除分布于核周的病毒抗原外，還有病毒以外的細胞成分被強染，陽性反應呈線性和網(wǎng)狀分布于細胞胞漿區(qū)，類似細胞的微絲骨架，而且在未感染DV2的細胞中也發(fā)現(xiàn)了線性和網(wǎng)狀的微絲樣著色。利用MABB152和PHALLODINTRITC特異性顯示微絲進行雙染色，發(fā)現(xiàn)病毒感染后出現(xiàn)的環(huán)狀微絲可同時被MABB152強染。所以，該株抗體可能既識別病毒抗原，也識別細胞骨架的微絲成分。3PRNT證明MAB具有中和特性將VERO細胞接種于24孔板，生長至單層。將已測定滴度為9105PFUML的DV2稀釋到約90PFU01ML。設腹水單抗組和正常小鼠血清組進行噬斑減少分析，每組按110、140、1100、1160、1640的比例分別稀釋。取稀釋的病毒液05ML和各稀釋度的腹水單抗或正常小鼠血清05ML混勻，37℃水浴1H，感染培養(yǎng)于24孔板的VERO細胞，約7～8D后結(jié)晶紫染色計數(shù)PFU發(fā)現(xiàn)陽性對照孔的平均PFU為90；陰性對照孔PFU均為0；加腹水單抗組PFU均有不同程度的減少，并且隨抗體濃度增加而明顯；正常鼠血清對照組在110濃度時，也對PFU有較大的影響。但在140及其以上稀釋度時，對PFU則無明顯影響。說明三株腹水MAB都對DV2有中和作用。計算三株MAB的50％噬斑阻斷濃度50％PLAQUEINHIBITIONCONCENTRATION，IC50I1在1160左右，I9在1100左右，B152在140左右。4WESTERNBLOT證明MAB識別DVE蛋白的抗原表位本實驗設檢驗組和對照組檢驗組為濃縮的DV2樣本，對照組為C636細胞樣本。各樣本經(jīng)SDSPAGE后，凝膠轉(zhuǎn)印到醋酸纖維膜上。三株腹水MAB分別為一抗，并設小鼠抗DV2血清為陽性對照、不加抗體為二抗本底對照。以HRP標記的羊抗小鼠血清為二抗，DAB顯色。1不加一抗的檢驗組和對照組均無顯色；2小鼠抗血清的檢驗組有多條顯色條帶，而對照組無顯色；3MAB組對照組無顯色，而檢驗組只有一處顯色條帶，且3株單抗顯色條帶粗細不同，顯示MAB親和活性不同，或腹水MAB的滴度不同。氨基黑染色顯示MARKER條帶，發(fā)現(xiàn)MAB顯色帶的相對分子質(zhì)量MOLECULARWEIGHTRATIO，MR比66200略小，大于43000，判斷是病毒E蛋白區(qū)MR55000～60000。E蛋白是最有可能誘導產(chǎn)生中和抗體的DV結(jié)構(gòu)蛋白，結(jié)合PRNT，確認3株MAB為識別E蛋白中和抗體。

簡介：本文旨在構(gòu)建增強型綠色熒光蛋白EGFP與SARS冠狀病毒不同長度核衣殼蛋白區(qū)段融合表達的PEGFPC1重組載體，對293細胞進行瞬時轉(zhuǎn)染，顯微鏡下觀察核衣殼蛋白不同區(qū)段在細胞內(nèi)的定位；構(gòu)建增強型綠色熒光蛋白EGFP與SARS冠狀病毒SARSCOV各結(jié)構(gòu)蛋白的融合表達載體以及各結(jié)構(gòu)基因的短發(fā)夾狀RNASHRNA表達載體，將兩種重組載體共轉(zhuǎn)染293細胞后觀察SHRNA對SARS冠狀病毒結(jié)構(gòu)蛋白表達的影響，結(jié)果表明，本研究成功構(gòu)建了含SARS冠狀病毒不同長度N基因片段的重組PEGFPC1載體。SARSCOV核衣殼蛋白全長位于細胞質(zhì)，其N1段第1187AA位于細胞質(zhì)和細胞核，N2段第161423AA定位于細胞質(zhì)。成功構(gòu)建了含SARS冠狀病毒各結(jié)構(gòu)基因的重組PEGFPC1載體及針對各結(jié)構(gòu)基因的SHRNA載體。不同序列的SHRNA基因沉默效應也不同。針對SARS冠狀病毒N基因的SHRNA質(zhì)粒PSHRNAN1能顯著地抑制N蛋白的表達，并且具有特異性。本研究為進一步用RNA干擾技術抑制SARS冠狀病毒的復制奠定了基礎，從而為SARS的抗病毒治療提供了一種新的思路。

簡介：目的構(gòu)建漢灘病毒重組腺病毒疫苗并分析其誘導的免疫效果探索發(fā)展新型的漢灘病毒疫苗方法1分別擴增和克隆漢灘病毒的M基因、G1和G2基因并進行序列分析用桿狀病毒載體表達上述基因編碼的重組蛋白2用腺病毒載體構(gòu)建重組腺病毒VADG1、VADG2及VADM用WESTERNBLOTTING等方法鑒定目的基因的表達3采用重組腺病毒單獨免疫、重組腺病毒與DNA疫苗聯(lián)合免疫的方法接種小鼠用ELISA、ELISPOT、流式細胞分析等技術觀察誘導的體液免疫、細胞免疫和黏膜免疫反應用表達漢灘病毒M片段的重組痘病毒攻擊免疫的地鼠分析重組腺病毒疫苗誘導的保護效果結(jié)果1用桿狀病毒表達系統(tǒng)在昆蟲細胞中成功表達了漢灘病毒G1和G2蛋白表達的重組蛋白與病人血清和用滅活病毒免疫的兔血清均發(fā)生特異性反應結(jié)果表明表達的蛋白具有良好的抗原性2漢灘病毒重組腺病毒疫苗免疫動物能誘導特異的免疫應答重組腺病毒VADM誘導出較高水平的中和抗體和細胞免疫應答重組腺病毒單獨或與重組DNA疫苗聯(lián)合免疫小鼠均能誘導出特異的體液免疫、細胞免疫和黏膜免疫應答并能抑制含M片段的重組痘病毒在地鼠體內(nèi)的復制結(jié)論漢灘病毒重組腺病毒疫苗可誘導特異的保護性免疫應答漢灘病毒重組腺病毒疫苗有望發(fā)展為一種新型的基因工程疫苗

簡介：本文對辛棄疾詞中的隱喻翻譯進行認知研究。通過系統(tǒng)、深入地分析作品中隱喻系統(tǒng)的翻譯策略，以期找到隱喻翻譯的規(guī)則和方法，從而更有利于整部作品的翻譯研究。傳統(tǒng)的隱喻觀把隱喻看作是一種修辭手段，是一種語言現(xiàn)象翻譯研究也更多地停留在語言修辭層面。受認知科學的啟發(fā)，認知語言學家認為隱喻是人類思維及認知的普遍方式，是人類組織其概念系統(tǒng)的認知工具，其工作機制是從一個概念域（源域）到另一個概念域（目標域）的映射。蘭考夫和約翰遜提出隱喻的本質(zhì)是認知的，這種觀點推動了隱喻的研究，進一步加強了隱喻與思維之間的聯(lián)系。隱喻研究的認知轉(zhuǎn)向也推動了隱喻翻譯的發(fā)展。翻譯作為一種思維活動，不僅是源語到目標語在修辭層面上的符號轉(zhuǎn)換，更是兩種語言文化所反映的認知方式的轉(zhuǎn)換。某種意義上，翻譯也可被看作是從一種語言到另一種語言的映射。因此隱喻的翻譯也應以認知為取向。在中國古詩詞中有大量的概念隱喻，對隱喻的準確翻譯能夠幫助英語讀者更好地理解這些作品。辛棄疾的詞中含有大量生動而形象的隱喻，這些隱喻不僅使作品的語言更具張力、內(nèi)涵更深厚，而且也使作者細膩的筆觸中展現(xiàn)出的思想更鮮活。許多譯者都對其作品進行了翻譯，在眾多的英譯本中，尤以許淵沖的譯本更具代表性。在辛棄疾的詞中主要包括植物隱喻、時間隱喻、感情隱喻、動物隱喻和天氣隱喻。這些隱喻不僅僅是一種修辭方法，更是構(gòu)建作品意義的重要手段。由于中西方文化對隱喻認知的不同，在英語境中怎樣準確合理地投射這些隱喻的意義，成為了譯者需要解決的重要任務。對于這類隱喻的翻譯，許淵沖大致采取了三種策略直譯、意譯、直譯與意譯相結(jié)合。總體上看，他的譯本準確傳達了原文的意象和內(nèi)涵，同時也符合英語讀者的欣賞特點。研究發(fā)現(xiàn)，辛棄疾中的這些隱喻不僅刻畫渲染了作品哀傷、怨憤的氣氛和情緒，而且也是構(gòu)建作品愛國主題的重要認知工具。此外，對這些隱喻翻譯的研究還有利于我們發(fā)現(xiàn)隱喻的翻譯規(guī)則，從而有利于中國古詩詞的傳播和中國古典文化的發(fā)揚。

簡介：揚州大學碩士學位論文單純皰疹病毒Ⅰ型糖蛋白G基因片段的克隆表達及其表達產(chǎn)物單克隆抗體的制備姓名黃濤申請學位級別碩士專業(yè)微生物學指導教師嚴華200905012一揚州大學碩士學位論文二、GST／GGI融合蛋白的表達純化及特性鑒定將PGEX一4T1／GGI重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化表達宿主大腸桿菌BL2LDE3，然后用異丙基硫代半乳糖苷IPTG進行誘導表達，表達產(chǎn)物經(jīng)SDSPAGE電泳檢測驗證后，對存在于超聲離心后上清液中的融合蛋白用親和層析技術進行純化，并用ELISA間接法對純化的GST／GGR融合蛋白的特性進行鑒定，最終獲得保留天然蛋白抗原性和特異性的重組蛋白。三、GGI重組蛋白單克隆抗體的制備經(jīng)動物免疫后，參考抗體效價挑選合適的BALB／C鼠進行了細胞融合，并于適當時機對雜交瘤細胞進行篩選，遺憾的是雖然我們獲得了2株特異性分泌針對GST蛋白抗體的雜交瘤細胞，但最終卻沒有篩選到特異性分泌針對GGI目的蛋白抗體的雜交瘤細胞。于是對試驗失敗的原因進行了深度剖析，為最終獲得特異性針對GGI重組蛋白的單克隆抗體提出了改進方案。關鍵詞單純皰疹病毒；糖蛋白G克??；表達純化；單克隆抗體

簡介：缺血性心臟病IHD是當代人類發(fā)病率和致死率較高的疾病之一基因治療是目前研究的熱點腺病毒介導的基因轉(zhuǎn)移優(yōu)于直接應用蛋白和質(zhì)粒載體為了探討腺病毒介導VEGFB基因?qū)θ毖募〉男难苄律饔梦覀兪紫葮?gòu)建了編碼人VEGFB基因的復制缺陷的重組腺病毒ADVEGFB載體在體外研究證實對血管內(nèi)皮細胞具有促增殖作用的基礎上直接注射豬慢性缺血心肌以評價在體應用的效果主要結(jié)論如下1、應用RTPCR技術選擇目的基因高豐度的組織可獲得該基因的編碼序列CDNA磷酸鈣共沉淀法結(jié)合先進的COSDNATPC技術可有效地將外源基因?qū)氩溉閯游锛毎蝎@得復制缺陷的重組腺病毒載體效率高、高滴度和低毒性2、我們首次構(gòu)建了攜帶VEGFB基因的復制缺陷的重組腺病毒載體在體外有效地感染心肌細胞和血管內(nèi)皮細胞同時VEGFB基因得到成功轉(zhuǎn)錄和表達進一步證實VEGFB有促血管內(nèi)皮細胞生長的作用3、該研究首次將ADVEGFB直接注射到缺血心肌并證實可促進局部血管新生同時改善心臟局部功能預示VEGFB在IHD的生物因子治療中將有一定的應用價值4、基因轉(zhuǎn)移技術和治療性血管新生作為缺血心肌再血管化的手段應當引起關注